Исследование методом тонкослойной хроматографии

Исследование проведено в соответствии с методическими рекомендациями “Определение вида наркотических средств, получаемых из конопли и мака“, утвержденными Постоянным комитетом по контролю наркотиков (протокол № 36 от 06.02.1995 г.), с целью выявления наркотически активных опийных алкалоидов в объектах №№ 1 - 3, похожих по внешнему виду и органолептическим признакам на опий.

Навески вещества объектов №№ 1 - 3 массой около 0,1 г помещали в склянки и заливали каждую 1,0 мл смеси хлороформ : этанол : 25 % водный раствор аммиака (1:2:0,1). Содержимое склянок нагревали до начала кипения, снимали нагрев и выдерживали 30 минут при комнатной температуре.

Полученные экстракты в количестве 4 мкл наносили на хроматографическую пластину Kieselgel 60 F ₂₅₄ для высокоэффективной тонкослойной хроматографии (Merck, Германия). На эту же пластину наносили 0,1 % спиртовые растворы морфина, кодеина, тебаина, папаверина и наркотина в качестве свободных образцов для сравнительного исследования. Хроматографирование проводили в системе толуол : этанол : триэтиламин - 9:1:1. После окончания хроматографирования, пластину высушивали на воздухе в течение 20 минут. Полученные хроматограммы осматривали в УФ -свете при длине волны 254 нм, отмечая при этом зоны поглощения флуоресценции. Затем проявляли хроматограммы реактивом Марки.

На хроматограммах экстрактов всех исследуемых веществ выявлены хроматографические зоны со значениями Rf 0,22 и 0,39, окрашиваемые реактивом Марки в фиолетовый цвет, зона со значением Rf 0,64, окрашиваемая реактивом Марки в желтый цвет, а также зона со значением Rf 0,75, не окрашиваемая реактивом Марки. Выявленные хроматографические зоны совпадают по значению Rf и характеру окрашивания соответственно с зонами морфина, кодеина, тебаина и наркотина на хроматограммах свободных образцов. Зоны, соответствующей папаверину, на хроматограммах экстрактов исследуемых веществ в пределах чувствительности использованной методики не выявлено.

Кроме того, проводили фармакопейную пробу на наличие меконовой кислоты в веществе объектов исследования (в соответствии с Государственной Фармакопеей СССР, 9 издание, с. 346). Навески вещества объектов №№ 1 - 3 массой по 0,1 г экстрагировали 10,0 мл дистиллированной воды. К профильтрованным водным экстрактам добавляли по 1 капле 0,1 N водного раствора хлорида окисного железа. При этом наблюдали красное окрашивание всех экстрактов, свидетельствующее о присутствии в исследуемых веществах меконовой кислоты.

Таким образом, установлено, что в объектах №№ 1 - 3 содержатся основные алкалоиды опийной группы - морфин, кодеин, тебаин, наркотин, а также меконовая кислота.

Полученные результаты позволяют утверждать, что все представленные на исследование вещества (объекты №№ 1 - 3), темно-коричневого цвета с характерным запахом опия и содержащие основные алкалоиды опийной группы - морфин, кодеин, тебаин, наркотин, а также меконовую кислоту, являются опием.

Опий включен в Перечень наркотических средств, психотропных веществ и их прекурсоров, подлежащих контролю в Российской Федерации, утвержденный постановлением Правительства Российской Федерации от 30 июня 1998 г. № 681, и отнесен к наркотическим средствам, оборот которых в Российской Федерации запрещен в соответствии с законодательством Российской Федерации и международными договорами Российской Федерации (Список I Перечня, раздел Наркотические средства).

Исследование методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Проведено с целью определения в представленном на исследование опии (объекты №№ 1- 3) относительного и абсолютного содержания основных опийных алкалоидов - морфина, кодеина, тебаина и наркотина.

Исследование проводили на микроколоночном жидкостном хроматографе "Милихром-4" с использованием аналитической колонки длиной 100 мм, диаметром 2,0 мм, заполненной обращенно-фазным сорбентом “Separon SGX-C 18” с размером частиц 5 мкм (ТОО “Медикант”, Россия). В качестве подвижной фазы применяли смесь фосфатный буфер - ацетонитрил (70:30); скорость элюирования - 100 мкл/мин; пятиволновое детектирование на длинах волн УФ спектрофотометра: 210, 220, 230, 250 и 280 нм; объем вводимой пробы -10 мкл.

От высушенного (как указано выше) вещества объектов №№ 1 -3 отбирали по три навески массой около 40 мг каждая, которые взвешивали на весах "Sartorius 2003 MP1" (Германия) с точностью до 0,0001 г и заливали подвижной фазой с таким расчетом, чтобы концентрация вещества в полученных смесях составляла точно 4,0 мг/мл. Экстракцию исследуемых веществ подвижной фазой проводили в течение 60 минут при 20 ^оС в ультразвуковой ванне. Полученные экстракты фильтровали через мембранный фильтр и анализировали на жидкостном хроматографе в указанных условиях. В качестве свободных образцов для сравнительного исследования использовали 0,1 % растворы морфина, кодеина, тебаина, наркотина и папаверина в подвижной фазе, которые хроматографировали в тех же условиях. Выявление хроматографических пиков указанных компонентов на хроматограммах экстрактов исследуемых веществ проводили путем сравнения времен удерживания компонентов хроматограмм с временами удерживания морфина, кодеина, тебаина, наркотина и папаверина на хроматограммах свободных образцов, а также путем сравнения УФ спектров компонентов хроматограмм с УФ спектрами морфина, кодеина, тебаина, наркотина и папаверина.

В результате анализа установлено, что во всех исследуемых экстрактах содержатся основные опийные алкалоиды - морфин, кодеин, тебаин и наркотин. Папаверин в пределах чувствительности использованной методики не выявлен.

Для определения относительного содержания выявленных алкалоидов в исследуемых объектах использовали метод нормировки площадей. При этом содержание морфина (площадь его пика) во всех случаях принимали за единицу, а относительное содержание кодеина, тебаина и наркотина рассчитывали как отношение площадей их пиков к площади пика морфина. Средние значения и доверительные интервалы полученных величин (по результатам трех параллельных анализов вещества каждого объекта) представлены в таблице 1.

Таблица 1.

Результаты определения относительного содержания основных опийных алкалоидов в исследуемых объектах.

Объект №	Содержание морфина в объекте, условные единицы	Содержание кодеина в объекте, условные единицы	Содержание тебаина в объекте, условные единицы	Содержание наркотина в объекте, условные единицы
	1,00	0, 30±0,04	0,12±0,01	0,69±0,05
	1,00	0, 34±0,04	0,12±0,01	0,73±0,05
	1,00	0, 31±0,04	0,12±0,01	0,69±0,05

Из данных, приведенных в таблице 1, следует, что величины относительного содержания основных опийных алкалоидов - морфина, кодеина, тебаина и наркотина в объектах № 1-3 одинаковы, т.к. доверительные интервалы их средних значений для каждого из сравниваемых компонентов перекрываются.

Абсолютное содержание указанных алкалоидов в сухом веществе исследуемых объектов (в массовых %, в пересчете на основание) рассчитывали исходя из значений их концентраций в экстрактах. Концентрации морфина, кодеина, тебаина и наркотина в экстрактах определяли методом абсолютной градуировки, используя для построения градуировочных графиков их растворы c точно известной концентрацией в подвижной фазе.

Средние значения и их доверительные интервалы абсолютного содержания морфина, кодеина, тебаина и наркотина в сухом веществе исследуемых объектов (по результатам трех параллельных анализов вещества каждого объекта) представлены в таблице 2.

Таблица 2.

Результаты определения абсолютного содержания основных опийных алкалоидов в сухом веществе исследуемых объектов.

Объект №	Содержание морфина в сухом веществе объекта, массовые %	Содержание кодеина в сухом веществе объекта, массовые %	Содержание тебаина в сухом веществе объекта, массовые %	Содержание наркотина в сухом веществе объекта, массовые %
	15,7±0,7	5,5±0,3	2,3±0,1	7,9±0,2
	15,0±0,7	5,8±0,3	2,2±0,1	7,9±0,2
	15,3±0,7	5,6±0,3	2,3±0,1	7,7±0,2

Из данных, приведенных в таблице 2, следует, что величины абсолютного содержания основных опийных алкалоидов - морфина, кодеина, тебаина и наркотина в сухом веществе исследуемых объектов одинаковы, т.к. доверительные интервалы их средних значений для каждого из указанных компонентов перекрываются.

Таким образом, по результатам исследования опия (объекты №№ 1-3) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии можно заключить, что:

- весь исследованный опий (объекты №№ 1 - 3) однороден по качественному составу основных опийных алкалоидов и содержит морфин, кодеин, тебаин, наркотин; не содержит папаверина в пределах чувствительности использованной методики исследования;

- весь исследованный опий (объекты №№ 1- 3) одинаков как по относительному содержанию указанных алкалоидов, так и по их абсолютному (процентному) содержанию в сухом веществе представленных образцов.

Эмиссионный спектральный анализ

Для решения вопроса об однородности состава представленного на исследование опия (объекты №№ 1-3), определяли его элементный состав методом эмиссионного спектрального анализа.

С этой целью навеску 2,5 г высушенного до постоянной массы объекта № 1 и оставшуюся часть объектов №№ 2, 3 (в полном объеме) озоляли в муфельной печи при температуре 450 ^оС (контроль за полнотой озоления - визуальный). Зольность объектов составила 2,35 %, 2,21 %, 2,22 %. Полученные зольные остатки растирали в агатовой ступке, смешивали с угольным порошком квалификации ОСЧ в соотношении 1:1, отбирали навески массой по 20 мг в трех повторностях (объект № 3 - в одной повторности из-за малого количества вещества) и помещали их в кратер графитовых электродов для анализа.

Спектрографирование проводили при следующих условиях: источник возбуждения - дуга переменного тока (генератор УБИ-1), сила тока 15А, электроды графитовые марки ОСЧ7-4 с диаметром канала 3,5 мм и глубиной канала 3,5 мм; спектрограф ПГС-2 (дисперсия 7,3 А/мм), трехлинзовая система освещения, промежуточная диафрагма - 0.5, ширина щели спектрографа - 15 мкм; экспозиция - 132 сек; многоканальный анализатор атомно-эмиссионных спектров МАЭС-2.03, 120 накоплений по 1100 мсек на спектр.

Расшифровка спектров показала, что зола объектов №№ 1 - 3 имеет одинаковый качественный элементный состав. Поэтому дальнейшее изучение объектов проводили по количественному содержанию обнаруженных элементов с использованием следующих аналитических линий: алюминий Al _2652.49Å, кальций Ca _2997.31Å, магний Mg _2779.83Å, натрий Na _3302.37Å, кремний Si _2987.65Å, бор B _2497.73Å, железо Fe _2598.37Å, марганец Mn _2798.27Å, медь Cu _3273.96Å, олово Sn _2839.99Å, титан Ti _2956.13Å, фосфор Р _2553.28Å и цинк Zn _3345.02Å.

Средние значения интенсивностей аналитических линий определяемых элементов в золе объектов №№ 1-3 и стандартные отклонения, рассчитанные исходя из трех параллельных определений, приведены в таблице 3.

Из таблицы 3 видно, что количественные характеристики элементного состава золы объектов №№ 1 и 2 одинаковы. Зола объекта № 3, исследовавшаяся в одной повторности, имеет аналогичное золе объектов №№ 1 и 2 содержание элементов (учитывая среднюю ошибку определения методом эмиссионного спектрального анализа - 15 %). Это свидетельствует о том, что содержание выявленных элементов в объектах №№ 1-3 одинаково.

Таким образом, на основании результатов проведенного исследования вещественных доказательств можно констатировать следующее:

- представленные на экспертизу - вещество массой 23,07 г (объект № 1), изъятое у гр. П.., и вещества массами 1,90 г (объект № 2) и 0,77 г (объект № 3), добровольно выданные гр. Ч., являются наркотическим средством - опием;

- весь представленный на экспертизу опий (объекты №№ 1 - 3) одинаков по качественному составу и количественному содержанию основных опийных алкалоидов его органической части - морфина, кодеина, тебаина, наркотина (не содержит папаверина); одинаков по качественному и количественному элементному составу его минеральной части.

В Ы В О Д:

Представленные на экспертизу - вещество массой 23,07 г , изъятое у гр. П.; и вещества массами 1,90 г и 0,77 г , добровольно выданные гр. Ч., являются наркотическим средством - опием.

Весь представленный на экспертизу опий одинаков по качественному составу и количественному содержанию основных опийных алкалоидов его органической части - морфина, кодеина, тебаина, наркотина (не содержит папаверина); одинаков по качественному и количественному элементному составу его минеральной части.

Вариант № 3.

В РАСПОРЯЖЕНИЕ ЭКСПЕРТА ПРЕДСТАВЛЕНО:

- изъятые у гр-ки Р. и гр-на М. вещество, марки и кисточку, пакованные в отдельные конверты в кол-ве 4 шт., которые опечатаны печатью Дежурной части УБОП и скреплены подписями понятых.

НА РАЗРЕШЕНИЕ ЭКСПЕРТИЗЫ ПОСТАВЛЕНЫ ВОПРОСЫ:

1. Является ли представленное на экспертизу вещество наркотическим средством?

2. Если да, то каким именно и каково количество данного вещества?

3. Имеется ли в кисточке, изъятой у гр-ки Р. вещество, являющееся наркотическим средством?

4. Имеется ли в изъятых у гр-ки Р. и гр-на М. марках вещество, являющееся наркотическим средством?”

И С С Л Е Д О В А Н И Е

Вещественные доказательства представлены на экспертизу в четырёх конвертах. Упаковка вещественных доказательств видимых нарушений и повреждений не имела.

Первый (нумерация конвертов дана экспертом)- конверт из белой бумаги, клапан которого заклеен отрезком белой бумаги с оттиском круглой печати, выполненным красящим веществом синего цвета: “Для пакетов.. МВД России*”, скреплённой подписью, выполненной красящим веществом синего цвета. На конверте имелась надпись, выполненная красящим веществом чёрного цвета: “Об^,ект после исследования к справке №57от 02.03.99 упаковал (подпись) (К.)”. В конверте находился вскрытый конверт из белой бумаги. Клапан конверта был заклеен отрезком белой бумаги с оттиском круглой печати: “ДЕЖУРНАЯ ЧАСТЬ *Министерство внутренних дел Российской Федерации* Региональное управление по организованной преступности по г. М.*”, скреплённой двумя подписями выполненными красящим веществом синего цвета. Боковая сторона конверта была заклеена отрезком белой бумаги с оттиском прямоугольной печати, выполненным красящим веществом чёрного цвета: “ ЭКУ ГУВД г. М.» скреплённой подписью и надписью, выполненными красящим веществом чёрного цвета: “2361”. На конверте имелась надпись, выполненная красящим веществом синего цвета: “Пластмассовый пузырёк с тёмной жидкостью изъятый у гр-ки Р.”. В конверте обнаружен шприц-тюбик с жидкостью тёмного цвета объёмом 0,13 мл (объект №1- нумерация объектов дана экспертом).

Второй- конверт из белой бумаги, клапан которого заклеен отрезком белой бумаги с оттиском круглой печати, выполненным красящим веществом синего цвета: “ДЕЖУРНАЯ ЧАСТЬ *Министерство внутренних дел Российской Федерации* Региональное управление по организованной преступности по г. М.*”, скреплённой двумя подписями выполненными красящим веществом синего цвета. На конверте имелась надпись, выполненная красящим веществом синего цвета: “Пласмассовый пузырёк, добровольно выданный М.”. В конверте обнаружен шприц-тюбик с жидкостью тёмного цвета объёмом 1,21 мл (объект №2).

Третий- конверт из белой бумаги, клапан которого заклеен отрезком белой бумаги с оттиском круглой печати, выполненным красящим веществом синего цвета: “ДЕЖУРНАЯ ЧАСТЬ *Министерство внутренних дел Российской Федерации* Региональное управление по организованной преступности по г. М.»”, скреплённой двумя подписями выполненными красящим веществом синего цвета. На конверте имелась надпись, выполненная красящим веществом синего цвета: “Марки и их обрывки в фольге изъятые у Р. из рюкзака”. В конверте находились:

- свёрток из отрезка фольгированной бумаги. В свёртке обнаружен фрагмент бумаги размером 16х8 мм с неясным рисунком красного и оранжевого цветов, разделённый перфорацией на две части (объект №3).

- свёрток из трёх обрывков фольги. В свёртке обнаружены два фрагмента бумаги с неясным рисунком жёлто-зелёного и красно-жёлтого цветов размерами 5х6х8 мм и 3х4х6 мм, соответствено (объекты 4-5).

Четвёртый- конверт из белой бумаги, клапан которого заклеен отрезком белой бумаги с оттиском круглой печати, выполненным красящим веществом синего цвета: “ДЕЖУРНАЯ ЧАСТЬ *Министерство внутренних дел Российской Федерации* Региональное управление по организованной преступности по г. М.”, скреплённой двумя подписями выполненными красящим веществом синего цвета. На конверте имелась надпись, выполненная красящим веществом синего цвета: “Кисточка из^,ятая у гр-ки Р. из рюкзака”. В конверте была обнаружена кисточка с надетой на неё трубкой из прозрачного полимерного материала (объект №6).

Измерение объемов жидкости в шприц-тюбиках (объекты №№ 1,2) производили микрошприцем “Hamilton” (Швейцария) объемом 1,0 мл, отградуированным с точностью до 0,01 мл.