Чистая культура микроорганизмов. Способы выделения аэробных и анаэробных микроорганизмов.
Чистая культура – это популяция опред вид мкÒ, по наличию которого в организме больного человека и животного можно подтвердить поставленный диагноз инфекционного заболевания.
При получении ЧК нужно иметь в виду, что в материалах возбудитель находится в ассоциации с банальной (посторонней) мкФ Þ для его изоляции гной, мокроту, осадки мочи, испражнения и прочие экскреты необходимо засеять так, чтобы получить колонии. Существуют следующие МЕТОДЫ:
1) МЕХАНИЧЕСКОЕ РАЗОБЩЕНИЕ
– метод серийных разведений в жидких пит средах (Пастер)
– метод пластических разведений на плотных пит средах (Кох)
– метод рассева материала по поверхности плотных пит сред.
В результате ## располагаются на расстоянии др от др и при делении образуют отдельные колонии.
2) ФИЗИЧЕСКИЙ – для выделения спорообразующих мкÒ материал обрабатывают t°=70-80°С, при этом вегетативные формы погибают, остаются только споры.
3) ХИМИЧЕСКИЙ – материал обрабатывается кислотой, все мкÒ кроме кислотоустойчивых (tbc) гибнут. К этому же методу относятся элективные (селективные) среды (солевые – стафилококк).
4) БИОЛОГИЧЕСКИЙ – используются гиперчувствительные к опред виду мкÒ Ж!!. При введении в Ò т/го Ж! 1-2 ## начинается быстрый рост и размножение мкÒ, они заселяют все его органы и ткани.
5) ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПОДВИЖНОСТИ – протей.
6) АНТИБИОТИКОУСТОЙЧИВОСТЬ – добавление АБ и ингибиторов роста.
После получения колоний, их изучают и пересевают на скошенные и жидкие среды для накопления биомассы (при этом исследуют культуральные свойства). Окончательное заключение делают только после изучения БХ и культуральных свойств; серологических реакций, фагочувствительности культуры и ее патогенности для экспериментальных животных.
При получении ЧК аэробных и анаэробных бактерий есть различия.
АЭРОБОВвыращивают в обычных условиях кислородной среды при температуре 37°С в термостате. Полученный материал микроскопируют и высевают на плотную среду (иногда – в жидкую среду обогащения), при этом механически разобщают мкÒ (разведением). Посевы помещают в термостат на 24-48ч при температуре 37°С. Затем на чашках Петри с посевами изучают специфические признаки колоний (размеры, форму, прозрачность колоний, поверхность, характер краев, структуру…). Из колонии готовят мазок, окрашивают по Граму и микроскопируют. Остаток колонии пересевают на скошенный агар для получения ЧК в достаточном количестве – культивируют в термостате 24-48 ч при температуре 37 °С. Изучают морфологические, тинкториальные, БХ, серологические свойства.
АНАЭРОБОВвыращивают при ↓ содержании О2, облигатные – при полном его отсутствии (материал→ внутрь жидкой или полутвердой пит среды) Чаще используют жидкую среду Китта–Тароцци (обогащения, состоит из концентрированного МПБ, глюкозы и агара). На дно помещают кусочки печени или фарша (для адсорбции О2). Перед посевом среду кипятят для удаления воздуха, затем быстро охлаждают, после посева заливают стерильным вазелиновым маслом. Посевы на поверхности плотных сред, разлитых в чашки Петри, культивируют в макро– или микроанаэростате.
Макроанаэростат представляет – двухстенный аппарат с крышкой, между стенками – вода, терморегулятор обеспечивает постоянную t°С (37°С). Аппарат герметически закрывают крышкой, соединяют с вакуум–насосом и выкачивают воздух. Имеются также портативные анаэростаты.
Особенности выделения анаэробов:
1. день – материал микроскопируют и высевают в среду Китта–Тароцци, прогревают при температуре 80°С в течение 30 мин, заливают вазелиновым маслом и посевы помещают в термостат.
2. день– помутневшую (часто вспенившуюся) среду набирают пипеткой, которую опускают через слой вазелинового масла до дна пробирки. Выделенную культуру микроскопируют и пересевают на плотные питательные среды (в чашки Петри с кровяно–сахарным агаром или в столбики расплавленных и остуженных сахарных агаров).
3. сутки– изучают выросшие на чашках Петри колонии, делают из них мазки, высевают на среду Китта–Тароцци для обогащения чистой культуры.
Устанавливают видовую принадлежность культуры = изучение морфологических, тинкториальных, культуральных и БХ свойств (ряд Гисса).
1. Цели и задачи мед бактериологии, вирусологии, иммунологии............................................................................................ 1
2. Систематика микроорганизмов. Основы систематики и таксономические группы микроорганизмов............... 1
3. Морфология, ультраструктура бактерий......................................................................................................................................... 1
4. Морфология, ультраструктура микоплазм...................................................................................................................................... 3
5. Морфология, ультраструктура хламидий........................................................................................................................................ 3
6. Морфология, ультраструктура риккетсий....................................................................................................................................... 4
7. Морфология, ультраструктура спирохет.......................................................................................................................................... 4
8. Морфология, ультраструктура актиномицетов............................................................................................................................. 5
9. Морфология, ультраструктура грибов.............................................................................................................................................. 5
10. Химический состав Грам «+» и Грам «–» бактерий. Механизмы окраски по Граму................................................... 6
11. Структура липополисахарида и механизмы его биологического воздействия на макроорганизмы.................... 6
12. Дифференциально-диагностические среды, их состав и механизм действия................................................................. 7
13. Дыхание бактерий. Методы создания анаэробных условий.................................................................................................. 7
14. Питание бактерий. Клсф питательных сред, их состав............................................................................................................ 8
15. Периодические и хемостатные культуры........................................................................................................................................... 9
16. Биология и морфология вирусов. Их взаимоотношения с клеткой хозяина................................................................... 9
17. Клеточные культуры, их происхождение. Способы выявления вирусов в клеточных культурах....................... 10
18. Бактериофаги. Морфология, взаимодействие с клеткой, культивирование, практическое использование... 10