Выделение чистых культур микроорганизмов, идентификация микроорганизмов, определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам

Изучение микроорганизмов невозможно без распознавания принадлежности отдельных их колоний к тем или иным биологическим видам, типам, родам и т.д. Процесс аутентификации организмов является одним из самых важных и трудоемких этапов проведения биологических исследований.

Основными методами распознавания бактерий являются: метод прямого прижизненного окрашивания различных проб воды, почв и осадков; прямые методы оценки метаболической активности клетки; метод молекулярного анализа; метод обратной транскрипции.

Перечисленные методы представляют собой основу для исследователей и являются базисом для большого количества методик, которые позволяют определять такие свойства бактерий, как:

- морфологические (особенности и индивидуальные свойства строения клеток);

- культуральные свойства (питание, дыхание, условия для роста бактериальной культуры);

- ферментативные (биохимические свойства, связанные со способностью бактериальной культуры расщеплять сахара, белки, разрушать эритроциты);

- антигенные (свойства, связанные с особенностями антигенов чистой бактериальной культуры).

Идентификация любых бактерий невозможна без выделения чистой культуры. Это требование в микробиологии связано с тем, что присутствие микробов других родов и семейств во время проведения бактериологических исследований всегда существенно искажает результаты, вследствие чего исследователь производит неверные заключения. Этапы выделения чистой бактериальной культуры Для выделения чистой культуры используются различные методы, большинство из которых основано на бактериальных чашечных посевах.

После выделения чистой культуры микроорганизмы подвергают проверке по грамму, идентификация по ферментативной активности, изучение конечных продуктов метаболизма; исследование визуальных характеристик колоний бактерий, изучение биохимических свойств бактерий.

Следующим этапом работы врача бактериолога является подбор антибиотиков для подавления патогенного возбудителя.

При определении чувствительности диско-диффузионным методом на поверхность агара в чашке Петри наносят бактериальную суспензию определенной плотности (обычно эквивалентную стандарту мутности 0,5 по McFarland) и затем помещают диски, содержащие определенное количество антибиотика. Диффузия антибиотика в агар приводит к формированию зоны подавления роста микроорганизмов вокруг дисков. После инкубации чашек в термостате при температуре 35о-37оС в течение ночи учитывают результат путем измерения диаметра зоны вокруг диска в миллиметрах (рис. 1).

Выделение чистых культур микроорганизмов, идентификация микроорганизмов, определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам - student2.ru

Рисунок 1. Определение чувствительности микроорганизмов диско-диффузионным методом.

После окончания инкубации чашки помещают кверху дном на темную матовую поверхность так, чтобы свет падал на них под углом в 45° (учет в отраженном свете). Диаметр зон задержки роста измеряют с точностью до 1 мм, предпочтительнее пользоваться штангенциркулем или кронциркулем.

При измерении зон задержки роста следует ориентироваться на зону полного подавления видимого роста. Не следует обращать внимания на очень мелкие колонии, выявляемые в пределах зоны задержки роста только при особых условиях освещения или увеличении, и едва заметный налет у края зоны. Исключение составляют случаи учета результатов определения чувствительности стафилококков к оксациллину, когда необходимо учитывать и самые мелкие колонии, выявляемые в пределах четкой зоны подавления роста.

Крупные колонии, выявляемые в пределах четкой зоны подавления роста, свидетельствуют о наличии посторонней микрофлоры или о гетерорезистентности популяции микроорганизмов, в этом случае необходимо повторить идентификацию микроорганизма, формирующего эту колонию, и определение чувствительности этого штамма.

При определении чувствительности ДДМ роящихся штаммов протея, зона подавления роста может быть затянута тонкой вуалеобразной пленкой, которая не мешает установлению границы зоны и не учитывается при регистрации результатов.

При определении чувствительности к сульфаниламидам и их комбинации с триметопримом границу зоны подавления роста следует учитывать на уровне ингибиции роста на 80 процентов. Это связано с тем, что под действием этих препаратов перед полным подавлением роста возможно завершение 1-2 циклов пролиферации микроорганизма.




Заключение

В ходе прохождения летней учебно-исследовательской практики с 26.06.2017 по 8.07.2017 в бактериологической лаборатории ГАУЗ «ГКБ им. Н. И. Пирогова» города Оренбурга, мною была подробно изучена структура и специфика деятельности лаборатории, основное оборудование лаборатории, а также получены навыки осуществления большого спектра клинических и санитарно-бактериологических исследований.

Практика способствовала получению как новых знаний, так и закреплению имеющихся навыков по профилю «Микробиология». Мною были освоены особенности работы с микроорганизмами III и IV группы патогенности; проанализирована специфика деятельности при работе в бактериологической лаборатории, требующая глубоких знаний и строгое соблюдение техники безопасности; закреплены на практике основные способы выделение чистых культур микроорганизмов и их последующая идентификация; изучен метод определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам диско-диффузионным методом.

Полученные навыки позволят углубить собственный интерес к будущей профессии, сформировать эффективную траекторию личностного и профессионального саморазвития, а также станут основой для написания выпускной дипломной работы.


Наши рекомендации