К практическим занятиям по микробиологии
ГОУ ВПО РОСЗДРАВА
Алтайский государственный медицинский университет
Кафедра микробиологии
Методические указания
К практическим занятиям по микробиологии
для студентов стоматологического факультета
Учебное пособие в двух частях
Часть 2. Частная микробиология
Барнаул, 2009
Методические указания составил авторский коллектив кафедры микробиологии АГМУ: доцент В.А. Юрова, доцент Л.Ю. Бутакова, доцент Л.А. Крафт, доцент Н.В. Куклина, доцент А.А. Сазанская, к.м.н. Б.В. Илинская, к.б.н. Е.Б. Карабасова, зав. учебными лабораториями Ю.В. Винникова, к.м.н. В.В. Прокопьев.
Методические указания предназначены для студентов 3 курса стоматологического факультета.
Рецензент: зав. кафедрой терапевтической стоматологии
дмн, профессор С. И. Токмакова
Утверждено решением методической комиссии медико-профилактического факультета « _______» ___________ 2009 г.
Утверждено решением ЦКМС ГОУ ВПО АГМУ Росздрава
«_________» _________________ 2009 г.
План практических занятий по курсу частной микробиологии
для студентов стоматологического факультета.
1. Методы микробиологической диагностики инфекционных заболеваний.
2. Условно-патогенные грамотрицательные микроорганизмы – возбудители гнойно-воспалительных заболеваний (протеи, синегнойная палочка, капсульная палочка, кишечная палочка и др.), их роль в патологии ЧЛО. Микробиологическая диагностика, специфическая профилактика и терапия гнойно-воспалительных заболеваний, вызванных условно-патогенными грамотрицательными микроорганизмами.
3. Стафилококки и стрептококки – возбудители гнойно-воспалительных заболеваний. Микробиологическая диагностика, специфическая профилактика и терапия стафило- и стрептококковых инфекций. Кариесогенные стрептококки, их роль в развитии кариеса.
4. Возбудители туберкулеза и микобактериозов, формы туберкулеза слизистой полости рта. Возбудители менингококковой инфекции. Методы микробиологической диагностики туберкулеза и менингококковой инфекции. Специфическая профилактика.
5. Возбудители дифтерии. Патогенные и резидентные анаэробные бактерии. Возбудители клостридиальной и неклостридиальной анаэробной инфекции ЧЛО. Методы микробиологической диагностики данных инфекций. Специфическая профилактика и терапия.
6. Урогенитальные инфекции (сифилис, гонорея, микоплазмоз, хламидиоз, гарднереллез). Проявления в полости рта. Спирохеты – возбудители язвенно-некротического гингиво-стоматита Симановского-Венсана.
7. Контрольное занятие по темам № 1-6.
8. Патогенные и условно-патогенные грибы – возбудители заболеваний слизистой полости рта. Кандидоз слизистой полости рта: характеристика возбудителя, условия возникновения, микробиологическая диагностика. Актиномицеты – возбудители актиномикоза ЧЛО, условия возникновения заболевания, микробиологическая диагностика.
9. Семинар I по микробиологии полости рта.
10. Семинар II по микробиологии полости рта.
11. Кишечная палочка – нормальный обитатель кишечника. Диареегенные кишечные палочки – возбудители кишечных инфекций, их диагностика. Возбудитель дизентерии, диагностика острой и хронической форм дизентерии. Сальмонеллы – возбудители брюшного тифа и паратифов, микробиологическая диагностика.
12. Возбудители холеры, эпидемиология и патогенез холеры, микробиологическая диагностика, специфическая профилактика. Кампилобактерии: патогенные – возбудители кишечных инфекций, и условно-патогенные - нормальные обитатели полости рта. Возбудители пищевых бактериальных отравлений (стафилококковый токсикоз, ботулизм, пищевые токсикоинфекции).
13. Контрольное занятие по темам № 8-12.
14. Вирусы, общая характеристика. Способы культивирования вирусов. Индикация вирусов при культивировании их в курином эмбрионе, культуре клеток, в организме чувствительных лабораторных животных. Методы диагностики вирусных инфекций.
15. Респираторные вирусы: ортомиксовирусы, парамиксовирусы, аденовирусы.
16. Поксвирусы. Пикорнавирусы. Вирусы гепатитов А, В, С, Д, Е. Герпесвирусы, значение в патологии полости рта. Опасность инфицирования в стоматологическом кабинете.
17. Рабдовирусы: вирус бешенства, вирус везикулярного стоматита. Вирусы – возбудители стоматитов, микробиологическая диагностика. Арбовирусы. Вирус клещевого энцефалита. Ретровирусы.
18. Контрольное занятие по темам № 13-17.
19. Зачетное занятие по сдаче практических навыков и тестовых заданий.
Занятие № 1
Актуальность темы занятия
Микробиологические методы диагностики играют большую роль при диагностике стоматологических заболеваний. Выбор метода зависит от нозологической формы инфекции, ее стадии. Правильный диагноз нередко может быть поставлен при оценке результатов лишь нескольких методов диагностики, особенно при доказательстве роли условно-патогенных микробов в этиологии заболевания.
Врач-стоматолог должен знать, какой материал подлежит исследованию, уметь правильно произвести забор материала, уметь выбрать метод диагностики в зависимости от стадии и патогенеза инфекции, правильно оценить результаты микробиологических исследований.
Вопросы для подготовки.
1. Микроскопический метод диагностики, его цель и сущность. Виды микроскопии. Достоинства и недостатки каждого метода.
2. Бактериологический метод диагностики, его цель и сущность. 3 этапа исследования (получение изолированных колоний, накопление чистой культуры, идентификация). Достоинства и недостатки метода.
3. Цель и сущность биологического метода диагностики.
4. Иммунологические методы диагностики:
4.1 Суть серологического метода диагностики (определение наличия антител, титров антител, природы антител, исследование парных сывороток). Используемые реакции.
4.2 Собственно иммунологический метод диагностики – индикация и идентификация микробных антигенов исследуемом клиническом материале. Используемые реакции: реакция преципитации, РСК, РИФ, ИФА.
4.3 Аллергический метод диагностики, его сущность. Способы определения клеточного иммунного ответа.
5. Генетический метод диагностики – молекулярная гибридизация, ПЦР.
Практическая работа
Задание № 1
Больной А., 30 лет. Клинический диагноз: одонтогенный сепсис. Выбрать метод диагностики, указать патологический материал и методику его забора, примерную схему исследования.
Задание № 2
Больной К. Клинический диагноз: инфицированное термическое поражение слизистой полости рта. Выбрать метод диагностики, указать патологический материал и методику его забора, примерную схему исследования.
Задание № 3
Больной М. Клинический диагноз: «Брюшной тиф»12 день болезни. Выделить возбудителя не удалось. Выбрать метод диагностики указать патологический материал и методику забора, примерную схему исследования.
Задание № 4
Больной Л. Клинический диагноз: «Острый гонорейный уретрит». Выбрать метод диагностики, указать патолоигческий материал и методику его забора, примерную схему исследования.
Задание № 5
Описать предлагаемые диагностические препараты: их состав, механизм действия, назначение. Результаты внести в таблицу:
| № /п | Название препарата | Активное начало | Механизм действия | Назначение |
Инфицированного организма.
| 1. Методы, направленные на поиск возбудителя в патологическом материале больного | а) микроскопический метод | Микроскопия патологического материал | Окрашивание простыми и сложными методами окраски |
| б)бактериологический, вирусологический методы | Выделение возбудителя из патологического материала | Посев исследуемого материала на питательные среды, определение свойств выделенного микроба, идентификация выделенной культуры по совокупности свойств. | |
| в) биологический метод | Заражение чувствительных лабораторных животных патологическим материалом | Постановка диагноза по типичному симптомокомплексу , искусственно воспроизведенному в опытах на животных. | |
| 2. Методы, направленные на обнаружение следов пребывания возбудителя в организме – обнаружение антигенов возбудителя или антител в сыворотке – иммунологические методы. | а)собственно иммунологический метод | Индикация и идентификация антигенов возбудителя в патологическо материале от больного | Используемые реакции: реакция преципитации, РСК, РИФ, ИФА, РИА, р-я нейтрализации. |
| б) серологический метод | Обнаружение в сыворотке и секретах специфических антител, определение титра и природы антител в парных сыворотках. | Используемые реакции: РА, РНГА, РН, РСК, РИФ, ИФА. | |
| в) аллергический метод | Выявление гиперчувствительности замедленного типа, выявление клеточного иммунного ответа. | Постановка кожно-аллергических проб, использование пробирочных реакций на выявление МИФ, лимфобласттрансформирующей субстанции и др. | |
| Генетический метод | Индикация и идентификация нуклеиновой кислоты возбудителя в исследуемом патологическом материале | ДНК и РНК – зондирование, полимеразная цепная реакция ПЦР. |
Справочный материал для оформления протоколов и выполнения практической работы
День исследования
Оценка чистоты культуры по морфологическим и тинкториальным свойствам, посев на среды «пестрого» ряда и в МПБ для изучения сахаролитических и протеолитических свойств. При необходимости изучение патогенных, антигенных, фаголизабельных свойств выделенного возбудителя. Посев чистой культуры с целью изучения чувствительности к антибиотикам и антисептикам.
День исследования
Идентификация чистой культуры по совокупности свойств: морфологических, тинкториальных, культуральных, биохимических, антигенных и др. Изучение чувствительности к антибиотикам и антисептикам. Оценка полученных результатов.
Занятие № 2
Тема. Условно-патогенные микроорганизмы–возбудители гнойно-воспалительных заболеваний и госпитальных инфекций
Актуальность темы занятия
Гнойная хирургическая инфекция и внутрибольничная /госпитальная/ инфекция продолжают оставаться на протяжении последних десятилетий важными проблемами здравоохранения во многих странах мира. Возбудителями гнойно-воспалительных заболеваний в большинстве случаев являются условно-патогенные микроорганизмы - представители нормальной микрофлоры. За последние 20 лет в клинике участились случаи гнойно-воспалительных заболеваний, вызванных условно-патогенными грамотрицательными микроорганизмами. Отмечается как нарастание числа гнойных осложнений у хирургических больных, так и увеличение случаев первичных заболеваний, вызванных ими.
По статистическим данным в настоящее время в развитых странах у 5-12 % госпитализированных лиц развивалась внутрибольничная инфекция, а у 4-7 % умерших она является основной причиной смерти. Причиной этих заболеваний часто являются госпитальные штаммы.
Вопросы для подготовки
1. Понятие «внутрибольничная /госпитальная/ инфекция», ее этиологические факторы. Общая характеристика возбудителей: распространение в природе, пути заражения, условия возникновения заболеваний, пути формирования госпитальной инфекции, госпитальные штаммы, маркеры госпитальных штаммов.
2. Бактериологическая диагностика гнойно-воспалительных заболеваний, вызванных условно-патогенными микроорганизмами. Диагностика внутрибольничной /госпитальной/ инфекции.
3. Условно-патогенная кишечная палочка, классификация, общая характеристика, факторы патогенности, возможные заболевания, роль в патологии ЧЛО.
4. Бактерии рода Протея, классификация, общая характеристика, факторы патогенности, пути распространения, вызываемые заболевания, роль в патологии ЧЛО.
5. Род Klebsiella, виды, классификация, общая характеристика, роль в патологии ЧЛО.
6. Синегнойная палочка – возбудитель госпитальной инфекции, классификация, общая характеристика, факторы патогенности, роль в патологии ЧЛО.
7. Биопрепараты для диагностики, специфической терапии и профилактики гнойно-воспалительных заболеваний, вызванных грамотрицательными микроорганизмами.
8. Принципы рациональной антибиотикотерапии в лечении гнойно-воспалительных заболеваний, вызванных условно-патогенной группой микроорганизмов.
Практическая работа
Задание № 1
Больная А., 26 лет. Клинический диагноз: «Пневмония». Провести бактериологическое исследование мокроты больной по демонстрационным посевам, с определением количества возбудителя, идентифицировать до рода и вида. Результаты исследования внести в таблицу /см. ниже/. Определить чувствительность к антибиотикам. Сделать заключение.
Задание № 2
Больной М., 5 месяцев. Клинический диагноз: «Острый пиелонефрит». Провести бактериологическое исследование мочи по представленным демонстрациям с учетом количества возбудителя, определить его род и вид. Определить чувствительность к антибиотикам. Полученные данные внести в таблицу /см. ниже/. Сделать заключение.
Задание № 3
Больной С., 25 лет. Клинический диагноз: «Одонтогенный остеомиелит верхней челюсти». Гной взят из свищевого хода. Провести бактериологическое исследование, используя готовые демонстрационные посевы. Полученные данные внести в таблицу /см. ниже/. Определить чувствительность к антибиотикам и антисептикам. Сделать заключение.
Задание № 4
Больной К., 30 лет. Клинический диагноз: «Посттравматический хронический остеомиелит нижней челюсти». Учесть результаты бактериологического исследования гнойного отделяемого из свищевого хода. Идентифицировать возбудителя на основании изучения свойств, представленных в демонстрационном наборе. Результаты исследования внести в таблицу /см. ниже/. Определить чувствительность к антибиотикам и антисептикам. Сделать заключение.
Задания № 5, 6, 7
В отделении челюстно-лицевой хирургии у пациентов с ожогами лица 2-3 cтепени возникли гнойные осложнения. При лабораторном обследовании выяснилось, что инфицирование ран у больных вызвано одним и тем же возбудителем. При исследовании объектов окружающей среды отделения данный микроорганизм обнаружен в устье раковины. Провести бактериологическое исследование отделяемого раны больного М (зад.5), отделяемого раны больного С (зад. 6), отделяемого устья раковины (зад 7), идентифицировать микроорганизмы по готовым посевам. Результаты исследования внести в таблицу /см. ниже/. По готовым посевам определить пиоцинотип выделенных культур, сравнить результаты, определить источник инфекции. Можно ли думать о госпитальной инфекции? Дайте рекомендации по лечению больных. Сделайте заключение.
Образец оформления протокола
| Метод диагностики, материал для исследования | ||||||||||
| Среда для посева | ||||||||||
| Характер роста | ||||||||||
| Морфология, тинкториальные свойства | ||||||||||
| Пигмент | ||||||||||
| Рост по Шукевичу | ||||||||||
| Капсула | ||||||||||
| Капсула | ||||||||||
| ||||||||||
| Фаготип/пиоцинотип | ||||||||||
| Антибиотикограмма, чувствительность к антисептикам |
Задание № 8
Изучить биопрепараты, используемые для диагностики и специфической терапии заболеваний, вызванных условно-патогенными грамотрицательными микроорганизмами. Данные внести в таблицу:
| Название | Активное начало | Механизм действия | Применение |
Справочные материалы для оформления протоколов и выполнения практической работы
Занятие № 3
Тема. Стафилококки и стрептококки–возбудители гнойно-воспалительных заболеваний. Кариесогенные стрептококки, их роль в возникновении и развитии кариеса.
Актуальность темы занятия
Стафилококки и стрептококки, наряду с условно-патогенными грамотрицательными микроорганизмами, являются основными возбудителями гнойно-воспалительных заболеваний. В последние годы широко распространились штаммы устойчивых к антибиотикам стафилококков, среди них описаны госпитальные штаммы, вызывающие внутрибольничные инфекции у хирургических больных, новорожденных и рожениц. Микробиологические исследования помогают выяснить этиологию, эпидемиологию гнойной инфекции, сделать выбор антибактериальной терапии, методов специфического лечения и профилактики.
В патологии человека большую роль играют стрептококки, они являются возбудителями гнойно-воспалительных заболеванй, скарлатины, причиной ревматизма, одними из основных кариесогенных микроорганизмов.
Вопросы для подготовки
1.Стафилококки: классификация, общая характеристика, факторы патогенности, распространение в природе.
2.Заболевания, вызываемые стафилококками, пути и условия инфицирования организма.
3.Стрептококки, их классификация по Ленсфильд и по гемолитической активности, общая характеристика, факторы патогенности, роль в патологии человека.
4.Бактериологическое исследование патологического материала при стафилококковых и стрептококковых гнойно-воспалительных заболеваниях. Особенности бактериологического исследования при сепсисе.
5.Иммунитет при стафило- и стрептококковых инфекциях.
6.Скарлатина, этиология, патогенез, методы диагностики.
7.Специфическая профилактика и лечение стафилококковых и стрептококковых заболеваний.
8.Кариесогенные стрептококки, их характеристика.
9.Зубная бляшка, условия ее формирования, роль в развитии кариеса.
Практическая работа
Задание № 1
Больной А., 18 лет. Клинический диагноз: «Абсцесс мягких тканей челюстно-лицевой области справа одонтогенного происхожденияё ». Учесть результаты бактериологического исследования гноя из очага воспаления. Описать ход исследования по дням и дать заключение о виде выделенного возбудителя, используя готовые демонстрации. Определить чувствительность к антибиотикам и антисептикам.
Задание № 2
Больной К., 25 лет. Клинический диагноз: «Одонтогенный сепсис». Кровь из локтевой вены (10 мл) засеяна на сахарный бульон в соотношении 1:10. Учесть результаты бактериологического иследования и дать заключение о виде выделенного возбудителя, используя демонстрационные посевы. Определить чувствительность к антибиотикам.
Задание № 3
Больной Б., 45 лет. Клинический диагноз: «Абсцесс мягких тканей челюстно-лицевой области слева одонтогенного происхождения с переходом во флегмону шеи, послеоперационный сепсис». Кровь в количестве 10 мл из локтевой вены засеяна на сахарный бульон в соотношении 1:10. Учесть результаты бактериологического исследования и дать заключение о виде выделенного возбудителя, используя демонстрации. Определить чувствительность к антибиотикам.
Задание № 4
Больная М., 23 года. Клинический диагноз: «Гнойный периодонтит». Материал для исследования - гнойное отделяемое . Учесть результаты бактериологического исследования, дать заключение о виде возбудителя, используя готовые демонстрации. Определить чувствительность к антибиотикам и антисептикам.
Задание № 5
Больной С., 25 лет. Клинический диагноз: «Флегмона дна полости рта». Материал для исследования – гной, полученный при оперативном вмешательстве. Учесть результаты бактериологического исследования, дать заключение о виде возбудителя, используя готовые демонстрационные посевы. Определить чувствительность к антибиотикам и антисептикам.
Задание № 6
Больная К., 34 года. Клинический диагноз: «Одонтогенный остеомиелит нижней челюсти справа». В бактериологическую лабораторию доставлен материал – отделяемое свищевого хода. Учесть результаты бактериологического исследования, используя готовые демонстрации. Идентифицировать возбудителя. Определить чувствительность к антибиотикам и антисептикам.
Задание № 7
Больная З., 21 год. Клинический диагноз: «Травматический гнойный периостит верхней челюсти ». Материал для исследования – гной, полученный при вскрытии гнойного очага. Учесть результаты бактериологического исследования, дать заключение о виде выделенного возбудителя по имеющимся демонстрациям. Определить чувствительность к антибиотикам и антисептикам.
Задание № 8
В отделении челюстно-лицевой хирургии возникла вспышка гнойной инфекции, вызванной золотистым стафилококком. С целью выявления носителей золотистого стафилококка и определения источника инфекции проведено обследование медицинского персонала. Обнаружено, что врач и медсестра являются носителями золотистого стафилококка. Проведено фаготипирование выделенных штаммов. По готовым посевам определить фаготип культур, выделенных от больных, медсестры и врача. Определить источник инфекции.
Справочные материалы для оформления протоколов и выполнения практической работы
Занятие № 4
Тема. Возбудители туберкулеза и микобактериозов, менингококковой инфекции
Актуальность темы занятия
В настоящее время, несмотря на успехи в деле профилактики, лечения и диагностики туберкулеза, отмечается значительный рост этого заболевания, в особенности в нашей стране. Клиническая диагностика туберкулеза и микобактериозов сопровождается микробиологическими исследованиями, где врач должен четко представлять их место в каждом конкретном случае.
Патогенные нейссерии – возбудители менингококковых инфекций, в последние годы регистрируются довольно часто. Среди этиологических агентов гнойных менингитов в нашей стране до 80 % составляют менингококки. Диагностика менингококковых инфекций целиком основана на микробиологических исследованиях.
Вопросы для подготовки
1. Характеристика возбудителей туберкулеза и микробактериозов, их классификация, факторы патогенности.
2. Особенности патогенеза и эпидемиологии туберкулеза, иммунитет при туберкулезе. Особенности поражения слизистой полости рта при туберкулезе.
3. Методы и цели микробиологической диагностики туберкулеза: микроскопический, бактериологический, биологический, аллергический, собственно иммунологический.
4.Биопрепараты, применяемые для специфической профилактики и диагностики туберкулеза.
5.Характеристика возбудителей менингококковой инфекции, классификация, факторы патогенности, отличие от непатогенных нейссерий.
6. Эпидемиология и патогенез менингококковой инфекции. Опасность инфицирования в стоматологическом кабинете. Методы микробиологической диагностики разных форм менингококковой инфекции. Специфическая профилактика менингококковой инфекции
Практическая работа
Задание № 1
Клинический диагноз: Туберкулезная волчанка? Промикроскопировать мазок, приготовленный из отделяемого язвы, расположенной на щечной поверхности слизистой полости рта. Мазок окрашен по Цилю-Нильсену. Определить наличие кислотоустойчивых бактерий.
1. Какой использован метод диагностики?
2.Является ли обнаружение кислотоустойчивых палочек основанием для постановки диагноза?
3. Что нужно предпринять дальше?
Задание № 2
На среду Левенштейна-Йенсена произведен посев отделяемого свищевых ходов от больных А. и Б. с клиническим диагнозом: «туберкулезный остеомиелит нижней челюсти». Посевы выдержаны в термостате при 37 C в течение 26 суток, когда был обнаружен рост микроорганизмов.
1. Какой применен метод диагностики?
2. Описать культуральные свойства выделенной культуры. Являются ли они характерными для микобактерий туберкулеза?
3. Закончено ли бактериологическое исследование?
4. Можно ли на основании полученных данных подтвердить диагноз «Туберкулезный остеомиелит?
Задание № 3
Определить чувствительность туберкулезных бактерий, выделенных от 2-х больных, к химиотерапевтическим препаратам. Соответствующие препараты в разных концентрациях были внесены в питательную среду, после чего был произведен посев выделенной культуры. Учет результатов производится спустя 3-4 недели при наличии роста в контрольных пробирках. Определить чувствительность культуры, результаты внести в таблицу:
| Название препарата | 1 | 2 |
| Стрептомицин 5 ЕД -//-10 ЕД | ||
| ПАСК 5 ЕД -//- 10ЕД | ||
| Циклосерин 30 ЕД | ||
| Канамицин 30 ЕД |
«+» – рост есть; «–» – роста нет.
Задание № 4
Учесть результаты иммуноферментного анализа, проведенного с патологическим материалом /отделяемое язвы красной каймы губ/ от двух больных с диагнозом: Туберкулезная волчанка?
Этапы постановки реакции:.
1. Антитела к возбудителю туберкулеза в лунке
2. Патологический материал.
3. Антитела к возбудителю туберкулеза, меченные ферментом.
4. Субстрат, изменяющий окраску при воздействии на него фермента. Появление желто-коричневого окрашивания свидетельствует о положительной реакции.
1. Какой использован метод диагностики?
2. С какой целью проведено исследование?
3. Можно ли по результатам исследования подтвердить или снять клинический диагноз?
Сделать заключение.
Задание № 5
Больной С., заболел остро, заболевание началось с назофарингита. Затем произошло ухудшение состояния и больной был госпитализирован в инфекционное отделение с диагнозом: Менингококковый менингит. Промикроскопируйте мазок, приготовленный из спинномозговой жидкости больного и окрашенный метиленовым синим, зарисуйте.
1. Какой метод диагностики применен?
2. Можно ли на основании микроскопии подтвердить диагноз?
3. Являются ли обнаруженные характерные микробы менингококками?
Задание № 6
В отделении челюстно-лицевой хирургии возник случай генерализованной менингококковой инфекции /менингококкцемия/. При обследовании персонала у 2-х человек /медицинской сестры и врача отделения/ из носоглотки выделены нейссерии. Определите по готовым посевам, являются ли медсестра /А/ и врач /Б/ носителями менингококка, или это непатогенные нейссерии – представители нормальной микрофлоры носоглотки. Результаты бактериологического исследования внесите в таблицу.
| Обследуемый | Среда с с ристомицином | Сывороточный агар 22 градуса | Сывороточный агар 37 градусов | МПА 37 градусов |
| А | ||||
| Б |
Результат: + - наличие роста, - - отсутствие роста.
Как можно интерпретировать полученные результаты?
Сделать заключение.
Задание № 7
Изучить биопрепараты, применяемые для диагностики и специфической профилактики туберкулеза и менингококкового менингита. Данные занести в таблицу (таблицу см. в занятиях выше).
Занятие № 5
Актуальность темы занятия
В середине 90-х годов прошлого столетия в России возникла эпидемия дифтерии, когда и заболеваемость и смертность от этой инфекции возросла в десятки раз. Основной причиной такой ситуации явились серьезные недостатки организации и проведения иммунизации населения и, как следствие этого, низкий уровень коллективного иммунитета.
Чаще всего патологический процесс при дифтерии локализуется на слизистой зева. Врачи-стоматологи могут первыми обнаружить признаки дифтерии и предпринять все необходимые меры для своевременной госпитализации пациента. Также врачам-стоматологам необходимо знать показания для микробиологических исследований при подозрении на дифтерию.
Раневая анаэробная инфекция - столбняк и газовая гангрена – это редко встречаемые, но опасные инфекции, сопровождающееся высокой смертностью и инвалидизацией. Ранение любой локализации может привести к возникновению этих инфекций. Врачи-стоматологи должны знать особенности возбудителей, уметь правильно произвести забор материала для микробиологического исследования, оценить результаты исследования, знать показания к применению биопрепаратов для специфической профилактики данных заболеваний.
Неспорообразующие анаэробные бактерии составляют основную часть нормальной микрофлоры полости рта и при определенных условиях могут явиться причной гнойно-воспалительных процессов челюстно-лицевой области. Микробиологические методы диагностики являются основными в диагностике таких инфекций.
Вопросы для подготовки
1. Возбудитель дифтерии, классификация, биологические свойства, факторы патогенности. Патогенез и эпидемиология дифтерии. Особенности иммунитета при дифтерии.
2. Методы микробиологической диагностики дифтерии и дифтерийного носительства.
3. Методы оценки напряженности антитоксического иммунитета в эпидситуациях: РНГА и реакция Шика.
4. Специфическая профилактика и лечение дифтерии. Возможные осложнения при серотерапии и их предупреждение.
5. Возбудитель столбняка, классификация, биологические свойства, факторы патогенности. Патогенез и эпидемиология столбняка, иммунитет, методы микробиологической диагностики. Препараты для специфической профилактики и терапии столбняка.
6. Возбудители газовой гангрены, классификация, биологические свойства, факторы патогенности. Патогенез и эпидемиология газовой гангрены. Методы микробиологической диагностики. Препараты для специфической профилактики и терапии газовой гангрены.
7. Неклостридиальные анаэробы – представители нормальной микрофлоры полости рта и возбудители гнойно-воспалительных процессов: пептококки, пептострептококки, бактероиды, фузобактерии, вейлонеллы. Их классификация, биологические свойства, факторы патогенности, методы микробиологической диагностики заболеваний, вызываемых неспорообразующими анаэробными микроорганизмами.
8. Язвенно-некротический гингиво-стоматит и ангина Симановского-Венсана
/фузоспирохетоз/: характеристика возбудителей, условия возникновения заболевания, диагностика, дифференциальная диагностика с дифтерией.
Практическая работа
Задание № 1
В приемный покой детской инфекционной больницы поступил ребенок с клиническим диагнозом «Дифтерия зева». Был взят мазок со слизистой зева больного и доставлен в лабораторию. Мазок окрасили по методу Леффлера. Промикроскопируйте мазок и дайте ответы на следующие вопросы.
1. Какой применен метод диагностики?
2. Как берется мазок со слизистой зева обследуемого?
3. Какие морфологические и тинкториальные особенности присущи возбудителю дифтерии, и проявляются ли они в данном препарате?
4. Какова степень информативности мазка?
5. Можно ли на основании изученного мазка идентифицировать дифтерийную палочку?
Задание № 2
При обследовании детей, имевших контакт с больным дифтерией у двоих из них (В. и С.) были выделены из зева коринеформные бактерии. По представленным демонстрациям определите вид бактерий, выделенных из зева контактных детей В. и С. Опишите ход исследования по дням и сделайте заключение. Все полученные результаты внести в следующую таблицу:
| Свойства культуры | Культура больного В. | Культура больного С. |
| Морфология | ||
| Тинкториальные свойства | ||
| Кровяно-теллуритовый агар | ||
| Гемолиз | ||
| Глюкоза | ||
| Сахароза | ||
| Крахмал | ||
| Мочевина | ||
| Проба Пизу | ||
| Токсигенность |
Сделать заключение.
Задание № 3
У двух детей Д. (10 лет) и Г. (5 лет) после проведения профилактических прививок поставили РПГА с сывороткой крови этих детей для выявления формирования противодифтерийного антитоксического иммунитета. Проанализируйте результаты РПГА и объясните полученные данные. Диагностический титр 1:20. Все сведения занесите в таблицу:
| Разведения сыворотки | 1:10 | 1:20 | 1:40 | 1:80 | 1:160 | 1:320 | К. сыв. | К. анг. |
| Сыв. б-го Д. | ||||||||
| Сыв. б-го С. |
Сделайте заключение о степени напряженности антитоксического иммунитета у этих детей. Какой использован метод диагностики?
Задание № 4
Изучить посевы анаэробных бактерий на среде Китта-Тароцци, Вильсон-Блера и молоке.
Задание № 5
Промикроскопировать мазок, приготовленный из Cl. Perfringens. Окраска по Граму. Обратить внимание на морфологию и тинкториальные свойства бактерий. Результаты зарисовать.
Задание № 6.
Во время врачебного приема стоматолог обратил внимание на некротический налет на одной из миндалин у ребенка 5 лет. Ребенок недавно перенес тяжелую ангину стрептококковой этиологии. С пораженной миндалины был взят мазок стерильным тампоном и отправлен в бактериологическую лабораторию. Был приготовлен препарат, окрашен по Граму. При микроскопии в мазке в большом количестве обнаружены грамотрицательные веретенообразные палочки и спирохеты
Какой применен метод диагностики? О каком заболевании можно думать? Достаточно ли данных для постановки диагноза?
Задание № 7.
Изучить биопрепа