Определение количества фага (титрование)
Титр бактериофага___________________________________________________________
___________
Индекс бактериофага_________________________________________________________
___________
1. Титрование в жидкой среде по Аппельману. Принцип метода состоит в выявлении максимального разведения фаговой суспензии (титра), которое дает просветление (лизис) стандартного количества индикаторной культуры бактерий. Для этого в 10-кратные разведения исследуемой фаговой суспензии вносят одинаковые количества бактерий (около 250 млн/мл среды). Инкубируют в термостате 16-18 ч и определяют максимальное разведение, в котором имеется просветление. Титр выражают степенью разведения, напр. 108.
Определите титр бактериофага:
| Разведение фага | ||||||||||
| 10 -1 | 10 -2 | 10 -3 | 10 -4 | 10 -5 | 10 -6 | 10 -7 | 10 -8 | 10 -9 | 10 -10 | |
| Результат | - | - | - | - | - | - | + | + | + | + |
Титр бактериофага______________________
2. Титрование бактериофага по методу Грациа.1,0 мл фага смешивают в пробирке с 0,5 мл бактериальной культуры и добавляют в эту же пробирку расплавленный МПА. Все содержимое выливают в чашку с МПА. Дают застыть верхнему тонкому слою и ставят в термостат. При встрече фага с бактерией, происходит лизис последней и образуется негативная колония фага. Такие негативные колонии затем подсчитывают для определения титра. Титром фага называют количество фаговых частиц в 1 мл препарата фага.
Определите количество негативных колоний в разведениях:
10 -4 ____________ 10 -5 __________ 10 -6_________
Индекс бактериофага _________ БОЕ/мл
Применение бактериофагов в диагностике и медицине
1. Применение бактериофагов в терапии и профилактике заболеваний:
Местно применяют бактериофаги:_______________________________________________
_____________
Перорально применяют бактериофаги:____________________________________________
_____________
Фагодиагностика
Идентификация культуры возбудителя с помощью известных (диагностических) фагов. Бактериальную культуру засевают на плотную питательную среду. Чашку делят на сектора и на каждый сектор наносят диагностические бактериофаги. Фаг помещенный в сектор, в котором произошел лизис культуры, является специфичным для данной культуры и идентифицирует ее.
 |  | ||
Контроль культуры Фаг к E.coli
 | ||||
 | ||||
 |
Фаг к S.aureus Фаг к S.pyogenes
Вывод: Выделена культура _______________________
Фаготипирование
Фаготип (фаговар)____________________________________________________________
____________
Строгая специфичность типовых фагов дает возможность типировать варианты внутри вида (фаговары). Фаготипирование имеет большое значение в эпидемиологии, так как позволяет установить источник инфекции и решить ряд других вопросов; Исследуемый материал (от больного или из объектов внешней среды) засевают методом бактериального газона, чашку делят на сектора, в каждый сектор вносят специфичный индикаторный фаг. После инкубации в термостате определяют фаговар культуры возбудителя.
 | Определите фаговар S.Typhimurium ________________________________(на сегодняшний день выделено 90 фаговаров S.Typhimurium) |
Список литературы:
1. Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам. Методические указания. МУК 4.2.1890-04 от 4 марта 2004 года
2. ГОСТ Р 51600-2000 Методы определения наличия антибиотиков http://docs.cntd.ru/document/gost-r-51600-2000
3. М. В. Гусев, Л. А. Минеева. Микробиология. — М: МГУ, 1992. — С. 56.
4. А. А. Воробьев. Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии. — МИА, 2003. — С. 44. — ISBN 5-89481-136-8.
5. Л. Б. Борисов. Руководство к лабораторным занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии. — Медицина, 1992. — С. 31-44. — ISBN 5-2225-00897-6.
6. Методические указания по бактериологической диагностике брюшного тифа, паратифа А, В и других заболеваний салмонеллезной этиологии http://bestpravo.ru/sssr/eh-dokumenty/r9k.htm