Объяснение содержания лабораторной работы и формы отчетности. Преподаватель обращает внимание студентов на то, что оксидазы – ферменты, катализирующие окисление субстратов кислородом воздуха

Преподаватель обращает внимание студентов на то, что оксидазы – ферменты, катализирующие окисление субстратов кислородом воздуха, имеются как в животных, так и растительных тканях. К этой группе ферментов относятся полифенолоксидаза, окисляющая фенол и другие родственные им соединения, например, тирозин, адреналин и др. В работе для получения ферментного препарата полифенолоксидазы используется картофельный клубень или другой растительный источник. Фильтрат из картофельного клубня содержит как полифенолоксидазу, так и пероксидазу, и поэтому может быть использован в работе по определению активности пероксидазы и активности полифенолоксидазы. Работа выполняется индивидуально каждым студентом согласно методической разработке, предложенной кафедрой. Индивидуально выполняется так же количественное определение пероксидазы согласно описанию, приведенному в практикуме. Следует обратить внимание, что пероксидазы выполняют две функции: собственно пероксидазную и оксидазную. В практике используется определение активности пероксидазы при оценке метаболизма ростовых веществ, лигнана и др. вторичных продуктов обмена. Пероксидаза, выделенная из хрена, используется как аналитический реагент. Поэтому метод измерения активности фермента можно использовать для контроля качества продажного препарата фермента. Протоколы по выполненным работам оформляются студентами в виде нижеприводимых таблиц (см. рабочую тетрадь для студентов 2-го курса).

Самостоятельная работа студентов.

Студенты под руководством преподавателя выполняют лабораторные работы индивидуально, в качестве ориентировочной основы действия пользуются приводимыми в практикуме и методических указаниях описанием лабораторных работ. В процессе выполнения студентами лабораторных работ преподаватель корректирует их действия для того, чтобы научить их необходимым практическим навыкам и умениям.

Контроль усвоения материала занятия.

Контроль усвоения материала проводится в форме индивидуальной беседы со студентами в процессе проверки протоколов. Для проведения контроля рекомендуется использовать следующие вопросы.

1. На чем основан метод определения пероксидазы ?

2. На чем основано исследование действия полифенолоксидазы ?

3. Каким образом можно получить ферментный препарат?

4. Почему раствор адреналина под действием полифенолоксидазы изменяет свою окраску?

5. Какое практическое значение имеет определение пероксидазы и полифенолоксидазы?

6. Как в практике может быть использован метод определения активности пероксидазы?

7. В каких единицах выражается активность пероксидазы?

8. Объясните каким образом на приборе Вы устанавливаете время протекания реакции?

9. Каким образом проводится расчет активности пероксидазы?

10. Какие соединения используются в качестве субстрата пероксидазы?

Критерии достижения цели занятия.

1. Правильные ответы на поставленные вопросы.

2. Умение определить действие полифенолоксидазы.

3. Уметь количественно определить активность пероксидазы.

4. Правильное оформление протокола и умение сформулировать выводы.

Таблица 1. Исследование действия полифенолоксидазы. Принцип:основана оа образовании под влиянием полифенолоксидазы продуктов окисления адреналина – адренохрома и меланина темного цвета.	Изменение окраски	Нет	Темное окрашивание	Вывод:кипячение фильтрата разрушает полифенолоксидазу. Таблица 2. Определение активности пероксидазы. Принцип:основан на непрерывном измерении светопоглащения бензидиновой синью, образующейся при окислении бензидина Н₂О₂ под действием пероксидазы.	расчет	DЕ25100 Х= 0,1* t * d = 15625 = t = ? = ? Е с^-1кг^-1	Выводы:активность пероксидазы 565 Ес^-1кг^-1
Время реакции (достижения Е=0,25 на ФЭКе)	-
Термостат 37°С	10-15 мин.	10-15 мин.	Н₂О₂ 0,03% р-р после помещения в ФЭК	-
0,1 % раствор адреналина	1 мл	1 мл	Р-р бензидина 0,92 г/л	2,0 мл
Фильтрат водной вытяжки	1 мл кипятить 2-3 мин.	1 мл	Ацетатный буфер 0,1М р-р рН=5,4	2,0 мл
№ пробирки	№1	№2	Фильтрат вводной вытяжки в кювету ФЭК	2,0 мл
Исследуемый материал (приготовление водной вытяжки)	1) 1,0 г клубня картофеля; 2) 10 мл дистил. воды; 3) растирание в ступке; 4) фильтрация.	Исслед. материал (приготовление водной вытяжки)	100мг раст. материала (капуста)+10мл дистил. воды, растирание в ступке, помещение в колбу и доведение водой до объема 25 мл, настаивание 10 мин, фильтрация

ЗАНЯТИЕ №15

Контрольная работа по теме «Введение в обмен веществ и энергии.
Характеристика промежуточного обмена веществ.

Биологическое окисление». Контроль практических навыков и умений.

Работа на занятии.

Цели занятия.

- закрепление теоретических знаний студентов по теме:

- контроль усвоения навыков и умений по теме: выполнение количественного анализа активности пероксидазы или каталазы в контрольной пробе.

Цели самоподготовки.

Для выполнения контрольной работы студент должен знать ответы на контрольные вопросы:

1. Что такое обмен веществ и энергии, его назначение.

2. Что называется катаболизмом и анаболизмом и роль в обмене веществ и энергии катаболизма и анаболизма.

3. Взаимосвязь гетеротрофных и аутотрофных организмов.

4. Энергетика обмена веществ, макроэргические связи и соединения, роль АТФ в обмене веществ.

5. Характеристика промежуточного обмена и его функции.

6. Характеристика стадий катаболизма.

7. Характеристика стадий анаболизма.

8. Характеристика амфиболических путей метаболизма (центральных путей).

9. Стадии освобождения энергии при катаболизме и их характеристика.

10. Особенность пищеварения в различных отделах пищеварительного тракта.

11. Понятие о сбалансированном рациональном питании.

12. Что такое биологическое окисление, аэробное и анаэробное окисление.

13. Что такое редокс – потенциал, и каково его значение в биологических окислительно-восстановительных системах.

14. Характеристика стадий биологического окисления и центральных путей метаболизма.

15. Что такое первичные субстраты биологического окисления и как они образуются.

16. Реакции превращения пировиноградной кислоты в процессе окислительного декарбоксилирования.

17. Характеристика реакций лимоннокислого цикла.

18. Реакции дегидрирования лимоннокислого цикла и их энергетический выход.

19. Характеристика пиридин – и флавинзависимых дегидрогеназ.

20. Схема окисления субстратов с участием пиридинпротеинов, флавопротеинов, каталазы, пероксидазы, цитохромов.

21. Характеристика главного и побочного путей биологического окисления субстратов.

22. Состав и функционирование дыхательной цепи митохондрий.

23. Характеристика окислительного, субстратного и фотосинтетического фосфорилирования и их роль в метаболизме.

24. Механизм окислительного фосфорилирования с точки зрения хемиосмотической гипотезы Митчелла.

25. Строение митохондрий и их роль в организме.

26. Реакции глицерофосфатного и малатного челночных механизмов переноса атомов водорода через митохондриальную мембрану и их роль в процессе биологического окисления.

27. Характеристика свободно – радикального окисления.

28. Антиоксидантные системы организма.

29. Использование антиоксидантов в медицине, антиоксидантные препараты.

Хронокарта занятия.

Этапы занятия	Время (мин.)	Дидактическая система
1. Организационные вопросы	2 мин	Классическая
2. Тестирование	10 мин.	Технические средства общегрупповые
3. Собеседование преподавателя со студентами по контрольным вопросам коллоквиума и сдача практических навыков и умений по индивидуальным заданиям.	123 мин.	Репетитор (хороший)

Организационные вопросы.

Преподаватель выясняет, есть ли отсутствующие, обращает внимание на форму одежды студентов, сообщает цели занятия, предлагает приготовить для проверки записи лекций, проверяет посещаемость лекций.

Выполнение контрольной работы.

Для письменной подготовки студент получает 2-3 контрольных вопроса – задания и после 15 минутной подготовки отвечает преподавателю. Предварительно студент проводит анализ контрольной пробы по определению активности пероксидазы (или каталазы), результат которой сообщает преподавателю. Оценки выставляются в кафедральном журнале.

Критерии достижения цели занятия.

1. Правильные ответы на контрольные вопросы – задания.

2.Правильные результаты анализа контрольной пробы.

Занятие № 16

Тема: Обмен углеводов. Определение промежуточных и конечных продуктов обмена углеводов.

Работа на занятии.

Цели занятия.

Студенты должны уметь:

-воспроизвести процесс гликогенолиза в мышечной ткани и подтвердить это обнаружением молочной кислоты с помощью реакции Уфельмана;

-поставить опыт по спиртовому брожению глюкозы с помощью бродильного сосуда;

-поставить реакции для обнаружения продуктов спиртового брожения (углекислого газа и спирта);

-проанализировать результаты определений, оформить протокол и сформулировать выводы;

Цели самоподготовки.

Студенты должны знать:

-особенности пищеварения углеводов;

-реакции гликогенолиза и их энергетический итог, ферменты гликогенолиза;

-реакции гликолиза и их энергетический итог, ферменты гликолиза;

-реакции спиртового броженияи углеводов и катализирующие их ферменты;

Хронокарта занятия.

Этапы занятия	Время (мин.)	Дидактическая система
1. Организационные вопросы	2 мин	Классическая
2.Контроль исходного уровня знаний студентов и его коррекция	28 мин.	Репетитор (хороший)
3. Организация самостоятельной работы студентов	10 мин.	Технические средства общегрупповые
4. Самостоятельная работа студентов	80 мин.	«Малая группа»
5. Итоговый контроль усвоения материала занятия	15 мин.	Репетитор (хороший)

Оснащение занятия.

1.Оборудование: штативы с пробирками, весы с разновесами, водяная баня, лед, воронки, фильтры, стеклянные лопаточки, бродильные сосудики, мерные цилиндры, кварцевый песок, термостат.

2. Реактивы:фосфатный буфер, рН 8,0; крахмал 1 % раствор; трихлоруксусная кислота, 10% раствор; сернокислая медь, 10 % раствор; гидроокись кальция в порошке; серная кислота концентрированная; вазелиновое масло; фенол, 1% раствор; хлорное железо, 1% раствор; молочная кислота, 0,5% раствор,

3. Материалы для исследования: свежеизмельченные мышцы крысы или лягушки.

Организационные вопросы.

Преподаватель выясняет, есть ли отсутствующие, обращает внимание на форму одежды студентов, сообщает цели занятия.

Контроль исходного уровня знаний.

Контроль проводится в виде устного опроса студентов. Оценки выставляются в кафедральном журнале.

Вопросы для обсуждения.

1. Где происходит пищеварение углеводов и каким образом?

2. Назовите основные пути превращения углеводов в тканях?

3. Что такое гликогенолиз, назовите реакции гликогенолиза и ферменты их катализирующие?

4. Что такое гликолиз, назовите реакции гликолиза и ферменты их катализирующие?

5. Что такое спиртовое брожение? Каково его значение в практической деятельности человека?

6. Назовите необратимые реакции гликолиза.