Определение магния в сыворотке крови

Цели занятия:

- Усвоить представление о диагностическом значении определения электролитов в плазме крови;

- Знать функции магния в организме, клинико-диагностическое значение определения магния в сыворотке крови;

- Уметь определить содержание магния в сыворотке крови.

Принцип метода: в щелочной среде Магон реагирует с ионами магния с образованием комплекса красного цвета оптическая плотность которого прямопропорциональна содержанию ионов магния в исследуемом материале.

Реактивы. 1. Магон – 3,5 ммоль/л. 2. Буфер. 3. Эталонный раствор магния – 8,23 ммоль/л 4. Сыворотка. 5. Дистиллированная вода.

Оборудование. 1. Пробирки – 3 шт. 2. Пипетки на 2 мл 3. Дозатор на 0.02 мл 4. ФЭК. 5. Кюветы на 5мм.

Подготовка реактивов:

Раствор 1 –содержимое одной ампулы с реактивом 1 количественно растворяют в 50 мл реактива 2. раствор можно употреблять лишь через 30 минут после приготовления. Реактив устойчив при 2-8 ⁰С 1 неделю.

Раствор 2 –реактив 3 точно разбавляют дистиллированной водой в соотношении 1 : 9, раствор содержит 0,823 ммоль/л. реактив устойчив 1 месяц при комнатной температуре.

Ход определения.

Реактивы.	Опыт, мл	Калибровка, мл	Контроль, мл
Сыворотка.	0,02	-	-
Раствор 1	2,0	2,0	2,0
Раствор 2	-	0,02	-
Дистиллированная вода	-	-	0,02

Перемешиваем и оставляем при комнатной температуре на 15 минут. Затем измеряем оптическую плотность опыта (Д₁) и калибровки (Д₂) против контрольного раствора при 490-520 нм в кюветах на 5 мм. Расчет результатов:

С _магния, ммоль/л = 0,823 _* Д₁/ Д₂.

Нормальные величины: 0,7 – 1,07 ммоль/л.

Клинико-диагностическое значение определения магния в сыворотке крови.

Магний –внутриклеточный катион, 1/3 его сосредоточена в костях, зубах, мышцах. Среднесуточное поступление с пищей составляет 300 – 400 мг.

Физиологическое значение:

· Входит в состав почти 300 ферментных комплексов.

· Способствует синтезу протеинов.

· В комплексе с фосфолипидами входит в состав клеточных мембран, фиксирует их, снижает проницаемость.

Регулирует нервно-мышечную возбудимость и работу сердца

Концентрация в плазме в нормесоставляет – 0.8 – 1.5 ммоль/л.

Гипермагнемиясопровождается появлением сонливости, угнетением дыхательного центра, нарушения проводимости миокарда, блокады и остановки сердца; отмечается при:

· Почечной недостаточнсоти;

· Гипотиреозе.;

· Остром диабетическом ацидозе;

· Бронхиальной астме.болезни Аддисона;

· Обезвоживании.

Гипомагнемияпроявляется обезвоживанием артерий, нарушением свертываемости крови, повышению артериального давления, снижению микроциркуляции в капиллярах. Дефицит магния вызывает нарушение всех энергозависимых процессов, уменьшение синтеза белков; отмечается при:

· Голодании;

· Беременности (2 и 3 триместры);

· Онкологических заболеваниях;

· Остром и хроническом панкреатитах;

· Циррозе печени;

· Сердечно-сосудистой недостаточности;

· Рахите;

· Гастроэнтерите;

· Эндокринных нарушениях (гиперфункции щитовидной железы, гипофункции паращитовидных желез, сахарном диабете).

Задание для самостоятельной работы:

· Законспектируйте методику;

· Подготовьте рабочее место для исследования;

· Проведите определение содержания магния в предложенной сыворотке;

· Оцените полученные результаты;

· Заполните бланки анализа;

· Сделайте выводы по работе и рисунки;

· Ответьте на дополнительные вопросы.

Ответьте на вопросы:

1. К какой группе элементов относится магний?

2. Перечислите основные функции, которые выполняет магний в организме.

3. Патология обмена магния, как она проявляется, чем сопровождается?

Практическая работа

Определение железа в сыворотке крови.

Цели занятия

- Усвоить представление о диагностическом значении определения электролитов в плазме крови;

- Знать функции железа в организме, клинико-диагностическое значение определения железа в сыворотке крови;

- Уметь определять содержание железа в сыворотке крови.

Принцип метода: железо освобождается из железо-связывающих белков сыворотки крови и восстанавливается при действии кислого рабочего раствора, содержащего восстановитель и детергент. Затем, после добавления буфера для создания в реакционной смеси необходимого рН (4,5 –4,8) и феррозина, образуется устойчивый окрашенный комплекс, оптическая плотность которого при 570 нм пропорциональна концентрации железа.

Реакивы. 1. Рабочий раствор. 2. Буфер. 3. Раствор феррозина 30 г/л 4. Калибровочный раствор железа – 89 мкмоль/л 5. Сыворотка

Оборудование. 1. Пробирки – 3 шт. 2. Пипетки 5 и 1 мл 3. Дозатор на 0.02 мл 4. ФЭК. 5. Кюветы на 10 мм.

Ход определения.

Реактивы.	Холостая проба, мл	Калибровочная проба, мл	Опытная проба. мл
Калибровочный раствор железа	-	0.2	-
Рабочий раствор	2.5	2,5	2,5
Сыворотка	-	-	0,5
Вода дистиллированная	0,5	0,3	-
Содержимое пробирок перемешиваем и выдерживаем 25 минут.
Буфер	0,5	0,5	0,5
Перемешиваем и измеряем оптическую плотность опытной пробы против воды при 560 нм, (Д₁)
Раствор феррозина	0,02	0,02	0,02

Перемешивают и выдерживают 10 минут, измеряют оптическую плотность опытной (Д₂) и калибровочной проб (Д_к) при 560 нм против холостой в кювете на 1 см.

Расчет колическтва железа проводят по формуле:

С = 35,8 _* (Д₂ – Д₁) / Д_{калибровки.}

Нормальные величины: 10 – 27 мкмоль/л.

Клинико-диагностическое значение определения железа в сыворотке крови.

Железоотносится к внутриклеточным микроэлементам. Является постоянной составной частью гема гемоглобина и окислительно-восстановительных ферментов. Некоторое количество железа постоянно обнаруживается в плазме крови в виде комплекса с белком – трансферрином. Входит в состав ферритина.

В норме концентрация сывороточного железа у мужчин составляет 14,3 – 25,1 мкмоль/л, у женщин – 10,7 – 21,5 мкмоль/л.

Увеличениесодержания сывороточного железа происходит при:

· Гемолитических анемиях;

· Гипопластических и апопластических анемиях, талассемиях, В₁₂-дефицитных анемиях;

· Передозировке препаратов железа

· Вирусном непатите и других поражениях печени (остром гепатите, остром некрозе печени – повышение концентрации пропорционально степени некроза, хроническом холецистите).

Уменьшениеконцентрации железа в сыворотке крови отмечается при:

· Железодефицитных анемиях вследствие недостатка поступления железа в организм или заболеваний ЖКТ;

· Анемиях, связанных с перераспределением железа в организме (при воспалении, гнойной инфекции, ревматизме, инфаркте миокарда);

· Хронической почечной недостаточности;

· Нефротическом синдроме;

· Беременности;

· Кровотечении;

· Дефиците витамина С.

Задание для самостоятельной работы:

· Законспектируйте методику;

· Подготовьте рабочее место для исследования;

· Проведите определение содержания железа в предложенной сыворотке;