Количественное определение b - липопротеидов в сыворотке крови

Количественное определение общих липидов в сыворотке крови. Описание. Спектрофотометр.

2. Количественное определение b-липопротеидов в сыворотке крови. Описание. Спектрофотометр.

3. Реакции на лецитин. Практикум. Верболович П.А. 1973. раб. 225 (3).

Принцип метода: Бета-липопротеины осаждают всыворотке с помощью гепаринового реактива. Образующуюся мутность фотометрируют, калибровку проводят определяя содержание холестерина в осадке бета-липопротеинов. Среднее содержание холестерина в бета-липопротеинах около 47 %.

Референтные величины:

бета-липопротеины г/л - до 3,4 Проведение анализа

Длина волны 580-600 нм Кювета 1 см

Температура с +15 до +25С

В пробирке смешивают рабочий раствор в соотношении 50+1 с сывороткой проба и энергично встряхивают )напр. 2,5 мл рабочего раствора смешивают с 0,05 мл сыворотки). Через 15 минут снова интенсивно встряхивают и измеряют оптическую плотность пробы А против дистиллированной воды.

Расчет

Калибровочный фактор F = 0,823 ____

Количественное определение общих липидов в сыворотке крови.

Референтные величины: (нтБ) С- общие липиды г.л 4-8)

Проведение анализа. Длина (510-550) нм. Кювета 1 см. температура +15 до +25 С

В трех пробирках смешивают серную кислоту конц. (ч.д.а.) в соотношении 75+1 с сывороткой (проба), реактивом 1 (стандарт) или дистиллированной водой, (контрольный раствор), перемешивают и нагревают 15 мин на кипящей водяной бане ( напр. 1,5 мл серной кислоты конц. (ч.д.а) и 0, 02 мл сыворотки, реактив 1 или дистиллированной воды. После охлаждения пробирок проточной водой смешивают гидролизат с реактивом 2 в объемном соотношении 1 + 15 и оставляют стоять 50 мин. при температуре (с +15 до +25) С (например 0,1 мл гидролизата пробы, и 1,5 мл реактива 2). Не позднее чем через 60 мин измеряют оптическую плотность пробы А¹ и стандарта А² против контрольного раствора.

Отмерить мл	Проба	Стандарт	Контрольный раствор
Сыворотка Реактив 1 Кислота серная конц.	0,02 - 1,59	- 0,02 1,50	- - 1,50
Перемешивают и нагревают 15 мин на кипящей водяной бане. После охлаждения пробирок проточной водой отмеряют.
Гидролизат Реактив 2	0,10 1,50	0,10 1,50	0,10 1,50
Перемешивают и оставляют стоять 50 минут при +15 до +25 С. Не позднее чем через 60 мин измеряют оптическую плотность пробы А ¹стандарта А² против контрольного раствора

Расчет А¹

Общие липиды (г./л ) = 8_________

А²

Рубежный контроль: Основные вопросы темы:

1. Важнейшие липиды тканей. Основные фосфолипиды и гликолипиды тканей человека.

2. Строение и биологические функции липидов.

3. Резервные и структурные липиды.

4. Переваривание жиров, всасывание продуктов гидролиза, роль желчных кислот.

5. Состав, строение и физиологическая роль транспортных липопротеидов крови.

6. Нарушение переваривания и всасывания липидов.

7. Ресинтез триацилглицеринов в стенке кишечника.

8. Обмен жирных кислот. Бета-окисление как специфический путь катаболизма жирных кислот, его физиологическое значение. Карнитиновый челночный механизм транспорта жирных кислот в митохондрии.

9. Биосинтез жирных кислот.

10. Особенности биосинтеза жиров в печени и жировой ткани.

11. Резервирование и мобилизация жиров.

12. Регуляция и физиологическая роль резервирования и мобилизации жиров.

13. Нарушение этих процессов при ожирении.

14. Синтез, использование и физиологическое значение кетоновых тел.

15. Эйкозаноиды и их роль в регуляции метаболизма и физиологических функции. Перекисное окисление липидов, роль возникновении мембранных патологии. Антиоксиданты.

16. Обмен стероидов.

17. Представление о биосинтезе холестерина, регуляция этого процесса. Включение холестерина в ЛПОНП.

18. Синтез желчных кислот. Выведение холестерина и желчных кислот из организма.

19. Гиперхолестеринемия, причины ее возникновения. Внутрисосудистый липолиз.

20. Биохимия атеросклероза.

21. Механизм развития желчнокаменной болезни. Биохимические основы лечения атеросклероза и желчекаменной болезни.

22. Представление о биосинтезе и катаболизме фосфолипидов и гликолипидов.

23. Понятие о сфинголипидозах.

Вопросы СРС

1. Особенности обмена отдельных аминокислот (цистеина, гистидина, триптофана, валина и др.)

2. Биогенные амины.

3. Окисление биогенных аминов (моноаминоксидазы), ингибиторы МАО.