Качественная реакция на эритромицин

Эритромицин относится к группе антибиотиков-макролидов, содержащих в молекуле макроциклическое лактонное кольцо. Продуцируется Streptomyces erythreus.

В основе метода лежит образование окрашенных продуктов окисления под действием концентрированных кислот.

К 0,02 г эритромицина добавить 2 мл концентрированной серной кислоты, в результате появляется красно-коричневое окрашивание.

2. Качественные реакции на тетрациклин

Тетрациклины – группа антибиотиков, имеющая конденсированную четырехциклическую систему, имеющую общее название тетрациклин. Тетрациклины были выделены из Streptomyces aureoaciens и Streptomyces rimosus. В основе действия тетрациклинов лежит подавление ими биосинтеза белка микробной клетки на уровне рибосом.

Метод основан на свойстве концентрированной серной кислоты образовывать ангидропроизводные тетрациклинов. При последующем добавлении хлорида железа проявляется окраска, обусловленная наличием фенольных гидроксилов в молекуле тетрациклина.

0,1 г тетрациклина поместить в пробирку, прибавить 2 мл концентрированной серной кислоты. При добавлении 1 мл воды окраска становится фиолетовой в случае тетрациклина, красной – в случае окистетрациклина и зеленой – в случае хлортетрациклина. При добавлении 1–2 капель раствора хлорида железа окраска переходит в коричневую или красно-коричневую.

Качественная реакция на левомицетин

Левомицетин – синтетическое вещество, идентичное природному антибиотику хлорамфениколу, являющемуся продуктом жизнедеятельности Streptomyces venezuelae. Механизм антимикробного действия связан с нарушением синтеза белков микроорганизмов.

Метод основан на щелочном гидролизе левомицетина и выделении основания левомицетина желтого цвета.

К 0,1 г левомицетина добавить 2 мл 10% раствора гидроксида натрия и нагреть 1-2 минуты, в результате появляется желтое окрашивание, переходящее в красно-оранжевое.

Указания к составлению отчета. Выписать формулы антибиотиков, описать методы идентификации и наблюдаемые феномены.

Контрольные вопросы:

1. Какие роды микроорганизмов являются наиболее популярными продуцентами антибиотиков?

2. Какие группы антибиотиков вы знаете, кроме перечисленных в работе?

Лабораторная работа №9

ВЫДЕЛЕНИЕ АЛКАЛОИДОВ ИЗ ЧАЙНОГО ЛИСТА И КАЧЕСТВЕННЫЕ РЕАКЦИИ НА АЛКАЛОИДЫ

Цель работы – овладеть навыками выделения алкалоидов из чайного листа и провести их качественное определение с помощью общеалкалоидных осадительных реактивов и специфической мурексиновой пробы на пуриновые алкалоиды.

Для проведения качественных реакций алкалоиды из сырья извлекают 5% HCl или CH₃COOH в соотношении 1:10 кипячением в течение 5 минут.

Для идентификации алкалоидов в различных объектах очень широко используют осадительные общеалкалоидные реактивы. Известно около сотни таких реактивов, которые образуют с алкалоидами-основаниями нерастворимые в воде простые или комплексные соли. В данной работе используются: реактив Бушарда-Вагнера, раствор танина и раствор пикриновой кислоты. Осадительные реакции нередко используют для испытания подлинности препаратов алкалоидов. При выполнении этих реакций выпадают аморфные или кристаллические осадки. Последние часто имеют характерную температуру плавления, которая также может быть использована для идентификации алкалоида. Осадительные реактивы неспецифичны для алкалоидов. Они дают положительные реакции не только с алкалоидами, но и с большинством азотсодержащих органических соединений, в том числе с белками.

Для испытания подлинности пуриновых алкалоидов (кофеин, теофиллин, теобромин) используется мурексидная проба. Она основана на разрушении молекулы пурина при нагревании с окислителем (перекисью водорода, бромной водой, азотной кислотой и другими) и образовании смеси производных аллоксана и его изомера диалуровой кислоты. Взаимодействуя между собой, они образуют метилированные производные аллоксантина, которые под действием избытка раствора аммиака приобретают пурпурно-красное окрашивание. Окраска обусловлена появлением аммонийной соли метилированного производного пурпуровой кислоты. Мурексидная реакция неспецифична, она является общей для всех производных пурина.

кофеин теофиллин теобромин

йодид кофеина пикрат теофиллина галлат теобромина

Химизм мурексидной реакции с кофеином:

аммонийная соль тетраметилпурпуровой кислоты

Материал исследования: чай черный или зеленый.

Реактивы:

1. 5% раствор HCl.

2. Раствор йода в йодиде калия (реактив Вагнера-Бушарда – 5 г йода и 10 г йодида калия растворить в 100 мл воды, можно воспользоваться раствором Люголя, который необходимо развести в 2 раза).

3. 10% свежеприготовленный раствор танина.

4. 1% раствор пикриновой кислоты.

5. 30% раствор азотной кислоты.

6. 10% раствор аммиака.

Оборудование:

1. Штатив с пробирками.

2. Пипетки.

3. Песчаная баня или спиртовка.

4. Выпарительная чашка.

Ход работы:

1 г черного или зеленого чая поместить в пробирку, залить 10 мл 5% раствора соляной кислоты и кипятить на спиртовке или песчаной бане в течение 5 минут, считая от момента закипания. Слить экстракт с осадка в другую пробирку и остудить.

Для проведения осадительных реакций в три пробирки налить по 1 мл приготовленного экстракта, в первую пробирку добавить 1 мл раствора йода в йодиде калия, во вторую – 1 мл раствора танина, в третью – 1 мл раствора пикриновой кислоты. Отметить цвет образующихся осадков.

Для проведения мурексидной пробы остаток экстракта перелить в выпарительную чашку, добавить 10 капель азотной кислоты и выпарить на песчаной бане досуха. Остаток смочить 1–2 каплями раствора аммиака и описать наблюдаемое изменение остатка.

Указания к составлению отчета. Написать формулы алкалоидов чайного листа, реакции идентификации, отметить цвета осадков.

Контрольные вопросы:

1. Что такое алкалоиды?

2. Почему экстракцию алкалоидов проводят подкисленным водным раствором?

3. Какая функциональная группа алкалоидов участвует в осадительных реакциях?

Список литературы

1. Руководство к практическим занятиям по биологической химии. / О.Д. Кушманова, Г.И. Ивченко. – М.: «Медицина», 1974.

2. Практикум по биологической химии. / Е.А. Строев, В.Г. Макарова. – М.: «Высшая школа», 1986.

3. Лабораторные методы исследования в клинике: справочник. / Под ред. В.В. Меньшикова. – М.: «Медицина», 1987.

4. Практикум по биохимии. / А.А. Чиркин. – Минск: «Новое знание», 2002.

Лицензия ЛР №020370

Составитель: Л.В. Аникина

Редактор, корректор И.А. Мангасарова

Подписано в печать 03.07.06.

Формат 60х90/16 Объем 2,0 п.л.

Тираж 50 Заказ 94/2006

Редакционно-издательский отдел

Пермского государственного технического университета