Метод закручивания (метод Шульмана)
Качественные методы гельминтоовоскопии
Просмотр препаратов (исследование) производят при малом увеличении микроскопа: объектив Х8 – Х10, окуляр Х7-Х10. Только в сомнительных случаях используют объектив - Х40. При просмотре яиц с прозрачной оболочкой необходимо затемнить поле зрения микроскопа.
1. Метод нативного мазка
1. Крупинку фекалий растереть на предметном стекле в капле 50% раствора глицерина (можно в воде или в физиологическом растворе) до равномерной взвеси.
2. Покрыть покровным стеклом.
3. Исследовать.
На одном предметном стекле готовят две капли взвеси фекалий на расстоянии 3-4 см друг от друга, используя разные палочки для фекалий.
Этот метод мало эффективен, особенно при слабой инвазии. Метод используют как дополнительный к другим методам.
2. Метод толстого мазка (метод Като и Миура)
1. Квадратные пластинки целлофана (22х30 мм)выдержать в феноле, затем в смеси дистиллированной воды (100 мл) + глицерин (100 мл) + 3% малахит зеленый (1 мл)24 часа. ГЛИЦЕРИН ОБЕЗВОЖИВАЕТ ПЛАСТИНКУ ЦЕЛЛОФАНА, ФЕНОЛ ОБЕЗЖИРИВАЕТ, МАЛАХИТ ОКРАШИВАЕТ ПЛАСТИНКУ В ЗЕЛЕНЫЙ ЦВЕТ. Использование такой пластинки улучшает наблюдение яиц в нативном препарате. Препарат обезвоживается и обезжиривается, за счёт этого просветляется, яйца окрашиваются малахитовым зелёным и лучше видны среди фекальной массы.
2. Крупинку фекалий намазать на стеклянную пластинку (25х35 мм)- препарат мутный, яйца трудно различать, т.к. они окрашены пигментом фекалий в желто-коричневый цвет.
3. Накрыть влажной целлофановой пластинкой(препарат обезвоживается, обезжиривается и просветляется, яйца окрашиваются в зеленоватый цвет. Препарат легче изучать).
4. С помощью предметного стекла или биохимической пробочки притереть целлофан.
5. Препарат выдержать в течение часа при комнатной температуре.
6. Затем выдержать 30 минут в сушильном шкафу при 400С.
7. Исследовать.
С помощью этого метода можно исследовать большой объём фекалий в препарате. Наиболее точный метод. Позволяет определить яйца, цисты паразитов при незначительной инвазии.
3.Метод Телемана – осаждения. Основан на разности плотности яиц и раствора. Используется раствор меньшей плотности (лёгкие органические растворы — эфиры,спирты,ацетон), чем яйца гельминтов (яйца тяжелее).
1. Фекалии (1,5 г) смешать в стакане с 50% раствором соляной кислоты (5 мл) или с 10% раствором едкого натра – NaOH.
2. Эту смесь перелить в пробирку с эфиром(5 мл).
3. Закрыть пробкой, встряхнуть до равномерной взвеси.
4. Эту смесь пропустить через металлически фильтр.
В результате в пробирке образуется три слоя взвеси.
5. Два верхних слоя слить.
6. К осадку добавить воду, встряхнуть.
7. Центрифугировать.
8. Исследовать 2 капли осадка при увеличении микроскопа 7Х10.
С помощью этого метода можно исследовать яйца всех гельминтов.
Метод Фюллеборна — всплывания (флотации)
Этот метод основан на свойстве яиц гельминтов - всплывать в насыщенных солевых растворах (350 г поваренной соли + 1литр кипяченой воды = фильтровать через марлю). Используется раствор имеющий плотность большую, чем яйца гельминтов(яйца легче). Более плотные истинные солевые растворы.
1. Одну часть фекалий смешать с 20-ю частями насыщенного раствора хлорида натрия (NaCl).
Удельный вес раствора составляет 1,18. Раствор добавлять постепенно.
2. Удалить крупные частицы фекалий.
3. Смесь оставить отстаиваться 40-60 минут.
Яйца гельминтов, имеющих меньший удельный вес, чем раствор всплывут на поверхность.
4. С поверхности проволочной петлей (диаметр – 1 см) снять несколько капель и перенести на предметное стекло.
5. Покрыть покровным стеклом и исследовать.
С помощью этого метода нельзя обнаружить яйца Trematoda и неоплодотворенные яйца Ascaris. Яйца этих гельминтов и яйца Trichuris trichiura можно обнаружить в осадке. Поэтому надо изучать не только надосадочную плёнку,но и осадок.
Метод Калантарян (видоизменённый метод флотации - всплывания)
Этот метод основан на свойстве яиц гельминтов всплывать в насыщенных растворах (NaNO3 + вода ). Удельный вес раствора – 1,4, выше чем имеет раствор поваренной соли.
1. Одну часть фекалий смешать с 20-ю частями раствора.
2. Прокипятить.
Через 10-15 минут яйца всплывут на поверхность.
3.С поверхности смеси снять проволочной петлей (диаметр – 1 см) несколько капель и перенести на предметное стекло.
4. Покрыть покровным стеклом и исследовать.
Исследование осадка при этом методе не требуется (яйца Trematoda всплывают).
Можно использовать калиевую соль, аммиачную селитру, смесь солей.
Метод Красильникова
1. Фекалии (2,5г) размешать в 1% - 1,5% растворе детергента (20-30 мл).
Детергент (моющее или чистящее средство) – «Лотос», «Экстра» и т.д.
2. Отстаивать в течение суток или центрифугировать 1 мин. При 1000 оборотах/ мин.
В результате образуется 3 слоя взвеси. Яйца концентрируются над нижним слоем.
3. Приготовить 2-3 препарата после центрифугирования или взять пипеткой с поверхности нижнего слоя.
4. Исследовать.
Метод закручивания (метод Шульмана).
1. Фекалии (2-3 г) поместить в стеклянный стакан.
2. Добавить воды (10-15 г) или 0,85% раствор хлорида натрия.
3. Тщательно размешать стеклянной палочкой.
4. Вращать палочкой по центру.
5. Быстро вынуть и поставить на предметное стекло.
В стекающей капле концентрируются яйца или личинки гельминтов (благодаря центростремительной силе вращения).
При исследованиях также обнаруживаются «транзитные»яйца гельминтов (фасциолы,ланцетовидного сосальщиков) и об этом нужно помнить.