Схема гидролиза нуклеопротеинов

НУКЛЕОПРОТЕИНЫ (дрожжи)

H₂SO₄ 10%

100^oC

БЕЛОК НУКЛЕИНОВЫЕ КИСЛОТЫ

(протамины или гистоны) (ДНК, РНК)

ВЫСОКОМОЛЕКУЛЯРНЫЕ

ПОЛИПЕПТИДЫ ПОЛИНУКЛЕОТИДЫ

ТРИ-, ДИПЕПТИДЫ

СВОБОДНЫЕ АМИНОКИСЛОТЫ МОНОНУКЛЕОТИДЫ

НУКЛЕОЗИДЫ ФОСФОРНАЯ

КИСЛОТА

ПУРИНОВЫЕ ДЕЗОКСИРИБОЗА

ИЛИ ПИРИМИДИНОВЫЕ ИЛИ РИБОЗА

АЗОТИСТЫЕ ОСНОВАНИЯ

Продукты гидролиза открывают специфическими реакциями: полипептиды – биуретовой реакцией; пуриновые основания – серебряной пробой (серебряные соли пуринов образуют светло-коричневый осадок), пентозы – пробой Троммера (возникает красное окрашивание вследствие окисления рибозы), фосфорную кислоту – молибденовой пробой (образуется фосфорномолибденовокислый аммоний – желтый кристаллический осадок).

ХОД РАБОТЫ: взять колбу, внести 5 г дрожжей + 40 мл 10% раствора H₂SO₄, закрыть пробкой со стеклянной трубкой и поставить для кипения (100^оС) на 60 минут.

Через час охладить и отфильтровать.

В фильтрате открыть продукты гидролиза.

Взять четыре пробирки и в каждой выполнить реакцию:

	ОТМЕРИТЬ	ОПЫТ
1. БИУРЕТОВАЯ РЕАКЦИЯ	Гидролизат NaOH 10% CuSO4 1 %	5 капель 10 капель 1 - 2 капли
Возникает фиолетовое окрашивание
1. СЕРЕБРЯНАЯ ПРОБА НА ПУРИНЫ	Гидролизат NH4OH конц. AgNO3 1 %	10 капель 1 каплю 5 капель
Оставить на 5 мин.	Образуется светло-коричневый осадок.
3. ПРОБА ТРОММЕРА НА РИБОЗУ И ДЕЗОКСИРИБОЗУ	Гидролизат NaOH 30 % CuSO4 7 %	5 капель 10 капель 3 капли
Нагреть до начала кипения. Выпадает красный осадок Cu2O или желтый CuOH
4. МОЛИБДЕНОВАЯ ПРОБА НА ФОСФОРНУЮ КИСЛОТУ	Молибденовый реактив Гидролизат	20 капель   5 капель
	Кипятить несколько минут, получается окраска лимонно-желтого цвета.

РЕЗУЛЬТАТ:

ВЫВОД:

Дата: _______________

ЗАНЯТИЕ № 10

РАБОТА № 1. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ МОЧЕВОЙ КИСЛОТЫ В МОЧЕ

ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ. Мочевая кислота образуется из пуриновых оснований (аденин, гуанин). Выделение мочевой кислоты с мочой зависит от содержания пуринов в пище и от состояния обмена нуклеиновых кислот в организме. Мочевая кислота в виде кислого урата натрия входит в состав подагрических отложений в сухожилиях, хрящах, слизистых оболочках суставных сумок. Метаболит существует в виде 2-х таутомерных форм.

ПРИНЦИП МЕТОДА. Мочевая кислота окисляется кислородом при каталитическом действии фермента уриказы с образованием перекиси водорода и аллантоина. Образующаяся перекись водорода под действием пероксидазы окисляет субстрат с образованием окрашенного продукта, определяемого фотометрически.

ХОД РАБОТЫ: взять две пробирки.

Отмерить	Стандарт	Опыт
Сыворотка крови или разведенная моча	-	0,025 мл
Калибровочный раствор 375 мкмоль/л	0,025 мл	-
Рабочий реагент	1 мл	1 мл

Реакционную смесь перемешивают и инкубируют 10 мин при температуре 37^оС. Длина волны 500-520 нм (490 нм, ФЭК), кювета 0,5 см. Измеряют оптическую плотность опытной пробы против воды. Стабильность окраски 15 минут.

ВЫЧИСЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТА:

С_оп = С_ст · Е_оп/Е_ст (мкмоль/л)

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ.

У взрослых здоровых людей с мочой за сутки выделяется 1,6 – 6,44 ммоль мочевой кислоты. Содержание мочевой кислоты в сыворотке крови у женщин составляет 140-340 мкмоль/л, у мужчин – 200-415 мкмоль/л.

Повышенная экскреция мочевой кислоты (гиперурикурия) наблюдается при заболеваниях, сопровождающихся ускоренной гибелью клеток (терапия раковых и лейкозных больных цитостатиками, гемобластозы, гемолитические процессы, псориаз, синдром длительного сдавления), токсикозах беременности, алкоголизации, потреблении богатых пуринами продуктов (печень, почки, икра рыб).

Пониженное выведение мочевой кислоты (гипоурикурия) отмечается при почечной недостаточности, подагре, нефритах, отравлениях свинцом и бериллием, синдроме Дауна.

Дата_______________

ЗАНЯТИЕ № 11