Фотоэлектроколориметрический метод

ПРИБОРЫ И МАТЕРИАЛЫдля фотоэлектроколориметрического метода: колба вместимостью 100 см³; сульфатцинка; раствор калия гексацианоферрата; дистиллированная вода; бумажный фильтр; пикриновая кислота;раствора гидроксида натрия;пробирки с пришлифован­ными пробками ; водяная баняфотоэлектроколориметр стандартный раство­р глюкозы(см. ниже)

Метод основан на взаимодействии редуцирующих Сахаров с пикриновой кислотой с образованием аминопикриновой кислоты, окрашивающей исследуемый раствор в коричневый цвет. Интен­сивность образовавшейся окраски пропорциональна содержанию сахара в растворе.

Подготовка к анализу. Перед анализом спиртованные соки и морсы предварительно осветляют. Сок в количестве 10 см³ помещают в мерную колбу вместимостью 100 см³, приливают по 2 см³ раствора сульфата цинка и раствора калия гексацианоферрата. Содержимое колбы доводят до метки дистиллированной водой и фильтруют через бумажный складчатый фильтр. Фильтрат исполь­зуют для анализа.

Проведение анализа.В две пробирки с пришлифован­ными пробками помещают по 5 см³ раствора пикриновой кислоты и по 10 см³ раствора гидроксида натрия. В одну из пробирок прилива­ют 0,5 см³ используемого фильтрата, а в другую (контрольный ра­створ) — 0,5 см³ дистиллированной воды. Пробирки закрывают пробками, их содержимое перемешивают и выдерживают в кипя­щей водяной бане в течение 5 мин. Затем содержимое пробирок ох­лаждают в проточной холодной воде и колориметрируют на фотоэлектроколориметре при светофильтрах с длиной световой волны 440 нм в кюветах с шириной рабочей грани 3 мм.

Массовая концентрация сахара (г/100 см³)

где К— коэффициент пропорциональности, установленный экспериментально для каждого фотоэлектроколоримстра; О —оптическая плотность анализируемого ра­створа; л — коэффициент разведения.

За окончательный результат анализа принимают среднее ариф­метическое результатов двух параллельных определений, допускае­мые расхождения между которыми не превышают 1,0% относи­тельных.

Определение коэффициента пропорцио­нальности.Для получения точных результатов при определе­нии содержания сахара в спиртованных соках и морсах необходимо для применяемого фотоэлектроколориметра определить коэффи­циент пропорциональности.

Определение проводят с использованием стандартных раство­ров глюкозы. Навеску глюкозы массой 1,041 ± 0,001 г растворяют в дистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 100 см³, объем доводят до метки водой и перемешивают. В 1 см³ полученно­го раствора содержится 10 мг глюкозы.

В две мерные колбы вместимостью 100 см³ вносят 30 и 40 см³ ра­створа глюкозы, объем доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают. Полученные растворы используют для колориметрирования по вышеописанному методу.

Коэффициент пропорциональности рассчитывают по формуле

где С—массовая концентрация глюкозы в анализируемом растворе, мг/100см³; D— оптическая плотность.

Проводят два-три параллельных определения и рассчитывают среднее значение оптической плотности.

При мер 1. Определить коэффициент пропорциональности. Приготовили ра­створы глюкозы с массовой концентрацией 0,3 и 0,4 г/100 см³. После проведения реакции и последующего колориметрирования первого раствора получены значе­ния оптических плотностей, равные 0,398; 0,399 и 0,400.

Среднее значение равно

После проведения реакции и колориметрирования второго раствора получены

значения оптических плотностей, равные 0,531; 0,533 и 0,535.

Коэффициент пропорциональности равен

Пример 2. Определить массовую концентрацию сахара в абрикосовом спир­тованном соке. Сок разбавили водой в 10 раз. После проведения колориметричес­кой реакции получили оптическую плотность 0,420.

Массовая концентрация сахара

С= 0,750 -0,420- 10 = 3,15 г/100 см³.