Характеристика конечной продукции производства

Содержание

1. Характеристика конечной продукции производства 5

2. Химическая схема производства 5

3. Технологическая схема производства 6

4.Аппаратурная схема производства и спецификация оборудования 7

5.Характеристика сырья, материалов и полупродуктов 15

6. Описание технологического процесса 17

ВР-1. Подготовка помещений, оборудования, персонала, воздуха 17

ВР-1.1. Подготовка помещений 17

ВР-1.2. Подготовка оборудования 18

ВР-1.3. Подготовка персонала 20

ВР-1.4. Подготовка воздуха 22

ВР-2. Подготовка фармацевтических субстанций и вспомогательных материалов 23

ВР-2.1. Отвешивание натрия хлорида 23

ВР-2.2. Получение воды для инъекций 23

ВР-2.3. Подготовка фильтров и фильтровальных материалов к работе 24

ТП-1. Приготовление и фильтрование раствора 25

ТП-1.1. Растворение натрия хлорида в воде для инъекций 25

ТП-1.2. Фильтрование раствора 25

ТП-2. Ампулирование 25

ТП-2.1. Резка ампул 25

ТП-2.2. Укладка ампул в кассеты 26

ТП-2.3. Мойка, сушка ампул 26

ТП-2.4. Наполнение и запайка ампул 27

ТП-3. Стерилизация и проверка на герметичность 27

ТП-3.1. Стерилизация 27

ТП-3.2. Проверка на герметичность 28

ТП-4. Просмотр ампул 28

ТП-5. Стандартизация 29

Отсутствие механических включений 29

Стерильность 29

Однородность дозированных единиц 31

Бактериальные эндотоксины 31

Пирогенность 33

Аномальная токсичность 35

Определение извлекаемого объема парентеральных лекарственных

средств 36

УМО-1. Маркирование и упаковывание ампул 37

УМО-1.1. Маркирование ампул 37

УМО-1.2.Упаковывание ампул во вторичный контейнер 37

УМО-1.3. Групповая упаковка 37

УМО-1.4. Отгрузка ампул на склад 37

7. Материальный баланс 38

8. Переработка и обезвреживание отходов производства 42

9. Контроль производства 43

10. Техника безопасности, пожарная безопасность и производственная санитария 44

11. Охрана окружающей среды 46

12. Информационные материалы 47

13. Выводы и предложения по совершенствованию технологии лекарственной формы 48

Список литературы 49

Характеристика конечной продукции производства

Раствор натрия хлорида 0,9% для инъекций

Solutio Natrii chloridi 0,9% pro injectionibus

Состав (на 1 литр раствора):

Натрия хлорида - 9 г

Воды для инъекций до 1 л

Описание. Бесцветная, прозрачная жидкость солоноватого вкуса.

Подлинность.5 мл раствора, упаренные до 1 мл, дают характерную реакцию на натрий. 2 мл раствора дают характерную реакцию на хлориды.

рН 5,0-7,0 (потенциометрически).

Испытание на пирогенность. Количество вводимого раство­ра - 10 мл на 1 кг веса животного.

Количественное определение. 10 мл раствора титруют 0,1 н. раство­ром нитрата серебра до оранжево-желтого окрашивания (индикатор - хромат калия).

1 мл 0,1 н. раствора нитрата серебра соответствует 0,005844 г NaCl, которого в 1 мл раствора должно быть 0,0087-0,0093 г.

Упаковка.Выпускается в ампулах по 5 мл, 10 мл и 20 мл, во флаконах – по 250 и 400 мл.

Хранение. В хорошо укупоренной таре.

Применение. Поддерживает соответствующее осмотическое давление плазмы, крови и внеклеточной жидкости. Применяется при дегидратации и дезинтоксикации.

Химическая схема производства

В процессе производства раствора натрия хлорида изотонического 0,9 % для инъекций химических превращений не происходит.

Технологическая схема производства

ВР-1. Подготовка помещений, оборудования, персонала, воздуха (Кт, Кх, Кмб)

ВР-2.3. Подготовка фильтров и фильтрующих материалов к работе

ВР-2.2. Получение воды для инъекций

ВР-1.4. Подготовка воздуха

ВР-1.3. Подготовка персонала

ВР-1.2. Подготовка оборудования

ВР-2. Подготовка фармацевтических субстанций и вспомогательных материалов (Кт, Кх, Кмб)

ВР-2.1.Отвешивание натрия хлорида

ТП-1. Приготовление и фильтрация раствора (Кт, Кх)

ТП-1.1.Растворение натрия хлорида в воде для инъекций

ТП-1.2. Фильтрование раствора

Потери Фильтрование раствора субстанции промедола

ТП-2. Ампулирование (Кт, Кх)

ТП-2.1. Резка ампул

ТП-2.2. Укладка ампул в кассеты

Потери Фильтрование раствора субстанции промедола

ТП-З. Стерилизация (Кт, Кх, Кмб)

ТП-3.1.Стерилизация

ТП-3.2.Проверка герметичности

Потери Фильтрование раствора субстанции промедола

ТП-4. Просмотр ампул (Кт)

Потери Фильтрование раствора субстанции промедола

ТП-5. Стандартизация (Кт, Кх, Кмб)

Потери Фильтрование раствора субстанции промедола

УМО-1. Маркирование и упаковывание ампул (Кт, Кх, Кмб)

УМО-1.1. Маркирование ампул

УМО-1.2. Упаковывание ампул во вторичный контейнер

УМО-1.4. Отгрузка ампул на склад

ВР-1.1. Подготовка помещений

ТП-2.3. Мойка, сушка ампул

ТП-2.4. Наполнение и запайка ампул

УМО-1.3. Упаковывание ампул в групповой контейнер

ВР.1 Подготовка помещений, оборудования, персонала, воздуха.

ВР 1.1 Подготовка помещения.

Стерильную продукцию необходимо производить в чистых зонах, доступ в которые персонала и/или поступление оборудования и материалов должны осуществляться через воздушные шлюзы. Чистые зоны (помещения) следует обслуживать таким образом, чтобы они отвечали стандарту чистоты; в них необходимо поставлять воздух, который прошел через фильтры соответствующей эффективности.

Чистые зоны (помещения) при производстве стерильных лекарственных средств подразделяются на четыре класса.

Класс А: Локальная зона для проведения операций, представляющих высокий риск для качества продукции, например: зоны наполнения (фасования), укупорки, вскрытия ампул и флаконов, смешивания, а также соединения частей оборудования в асептических условиях. Как правило, такие условия обеспечиваются ламинарным потоком воздуха на рабочем месте. Системы ламинарного потока воздуха должны обеспечивать равномерную скорость воздуха в диапазоне от 0,36 до 0,54 м/с (нормативное значение),что применимо к месту ведения работ в открытом чистом помещении. Поддержание ламинарности должно быть доказанным и валидированным. В закрытых изоляторах и боксах с перчатками можно использовать однонаправленный поток воздуха с меньшими скоростями.

Класс B: Зона, непосредственно окружающая зону класса А, и предназначенная для асептического приготовления и наполнения.

Классы C и D: Чистые зоны для осуществления менее критичных стадий производства стерильной продукции.

Таблица. Максимально допустимое количество частиц в 1 м³ воздуха

Класс	Максимально допустимое количество частиц в 1 м3 воздуха при размере частиц равном или больше указанного
Оснащенное состояние	Эксплуатируемое состояние
0,5 мкм	5,0 мкм	0,5 мкм	5,0 мкм
A	3 520		3 520
B	3 520		352 000	2 900
C	352 000	2 900	3 520 000	29 000
D	3 520 000	29 000	не нормируется	не нормируется

В чистых зонах все открытые поверхности должны быть гладкими, непроницаемыми и неповрежденными, чтобы свести к минимуму образование и накопление частиц или микроорганизмов, а также позволить многократно применять моющие и при необходимости дезинфицирующие средства.

Для уменьшения накопления пыли и облегчения уборки в помещениях не должно быть не поддающихся очистке углублений и должно быть как можно меньше выступающих краев, полок, шкафов и оборудования. Двери должны быть сконструированы без углублений, недоступных для очистки; по этой же причине нежелательно использовать раздвижные двери.

Подвесные потолки должны быть герметичными с целью предотвращения попадания загрязнения из пространства над ними.

Монтаж трубопроводов, воздуховодов и другого оборудования следует выполнять таким образом, чтобы не образовывались не доступные для очистки зоны и поверхности, а также негерметичные углубления и отверстия.

Запрещается устанавливать раковины и сливы в зонах класса А/В, где осуществляется производство продукции в асептических условиях. В других зонах должен быть предусмотрен разрыв струи между оборудованием и канализационной трубой или стоком. Стоки в полу в чистых помещениях с более низким классом чистоты должны быть обеспечены сифонами или гидрозатворами для предотвращения обратного потока.

Запрещается одновременное открывание обеих дверей воздушного шлюза. Для предотвращения одновременного открывания более одной двери должна работать блокировочная система или система визуального и/или звукового предупреждения.

Подача отфильтрованного воздуха должна поддерживать положительный перепад давления относительно окружающих зон с более низким классом чистоты при всех рабочих условиях, а также эффективное обтекание воздухом контролируемой зоны. Смежные помещения с разными классами чистоты должны иметь перепад давления 10-15 Па (нормативное значение).

ВР 1.2 Подготовка оборудования.

Конструкция, установка и расположение оборудования, мест соединения и зоны обслуживания должны предусматривать возможность проводить работы с оборудованием, его техническое обслуживание и ремонт снаружи чистой зоны. Если необходима стерилизация, то она должна быть проведена после максимально полного монтажа оборудования.

Если при проведении технического обслуживания оборудования внутри чистой зоны был нарушен необходимый уровень чистоты (стерильности) во время этой работы, то до возобновления процесса производства, необходимо провести очистку, дезинфекцию и/или стерилизацию этого оборудования (зоны) (в зависимости от того, что подходит).

Получение воды требуемого качества должно гарантироваться проектом, конструкцией, монтажом и техническим обслуживанием систем подготовки и распределения воды. Не допускается эксплуатация оборудования подготовки воды сверх проектной мощности. Приготовление, хранение и распределение воды для инъекций следует выполнять так, чтобы предотвратить рост микроорганизмов, например за счет постоянной циркуляции воды при температуре выше плюс 70 ^оС.

Все критическое оборудование (стерилизаторы, системы подготовки и фильтрации воздуха, воздушные и газовые фильтры, системы приготовления, хранения и распределения воды и пр.) подлежит аттестации (валидации) и плановому техническому обслуживанию. Их повторный ввод в действие должен быть разрешен в установленном порядке.

Производственное оборудование следует проектировать, размещать и обслуживать таким образом, чтобы оно соответствовало своему назначению.

Работы по ремонту и техническому обслуживанию оборудования не должны представлять опасности для качества продукции.

Производственное оборудование должно быть спроектировано таким образом, чтобы его можно было легко и тщательно очищать. Очистку следует проводить в соответствии с подробными документированными процедурами; оборудование следует хранить только в чистом и сухом состоянии.

Оборудование (инвентарь), применяемое для мытья и очистки, следует выбирать и использовать так, чтобы оно не стало источником контаминации.

Оборудование должно быть установлено таким образом, чтобы предотвратить риск ошибок или контаминации.

Производственное оборудование не должно представлять никакой опасности для продукции. Части производственного оборудования, соприкасающиеся с продукцией, не должны вступать с ней в реакцию, выделять или абсорбировать вещества в такой степени, чтобы это могло влиять на качество продукции и создавать, таким образом, какую-либо опасность.

Для производственных и контрольных операций должны иметься в распоряжении весы и оборудование для измерений с соответствующими диапазоном и точностью.

Средства измерений, весы, записывающие и контрольные приборы через определенные промежутки времени следует калибровать и проверять соответствующими методами. Необходимо вести и сохранять записи о таких испытаниях.

Стационарные трубопроводы должны быть четко маркированы с указанием их содержимого и, где возможно, направления потока.

Трубопроводы для дистиллированной, деионизированной и при необходимости другой воды следует подвергать санитарной обработке в соответствии с документированными процедурами, в которых подробно изложены установленные пределы микробной контаминации, а также необходимые меры.

Неисправное оборудование, по возможности, должно быть удалено из производственных зон и зон контроля качества или, по крайней мере, обозначено соответствующим образом.

ВР 1.3 Подготовка персонала.

Весь персонал (включая персонал, занимающийся очисткой и техническим обслуживанием), который работает в таких зонах, должен регулярно проходить обучение по дисциплинам, связанным с надлежащим производством стерильной продукции, включая вопросы гигиены и основы микробиологии. Если необходимо, чтобы посторонние работники, не прошедшие такого обучения (например, работающие по контракту строители или наладчики оборудования), находились в чистом помещении, то они должны быть подробно проинструктированы и за ними должно быть установлено строгое наблюдение.

Не допускается вход в зоны производства стерильной продукции персонала, работающего с материалами из тканей животных или культурами микроорганизмов, которые не используются в текущем технологическом процессе, за исключением особых случаев, при которых необходимо соблюдать установленные процедуры для входа в эти зоны.

Необходимо соблюдать требования к личной гигиене и чистоте. Персонал, занятый в производстве стерильных лекарственных средств, должен быть проинструктирован о порядке оповещения руководства о любых факторах повышения уровня контаминации сверх допустимой нормы. Следует организовать контроль за состоянием здоровья персонала. Действия, которые необходимо предпринять в отношении персонала, который может стать источником микробной контаминации, должны определяться специально назначенным компетентным лицом.

В чистых зонах персоналу запрещается носить наручные часы и ювелирные украшения, а также использовать косметику.

Переодевание и мытье необходимо осуществлять в соответствии с письменными инструкциями, чтобы свести к минимуму риск контаминации одежды для работы в чистых зонах и не внести загрязнения в чистые зоны.

Одежда и ее качество должны соответствовать технологическому процессу и классу рабочей зоны. Одежду следует носить таким образом, чтобы защитить продукцию от контаминации.

К одежде, предназначенной для зон каждого класса чистоты, предъявляются следующие требования.

Класс D: волосы и борода (при наличии) должны быть закрыты. Следует носить обычный защитный костюм и соответствующую обувь или бахилы. Должны быть приняты соответствующие меры для предотвращения любой контаминации чистой зоны извне.

Класс С: волосы, а также борода и усы (при их наличии) должны быть закрыты. Необходимо носить комбинезон или брючный костюм, плотно прилегающий на запястьях и имеющий высокий воротник, а также соответствующую обувь или бахилы. От них практически не должны отделяться волокна или частицы.

Класс А/В: головной убор должен полностью закрывать волосы, а также бороду и усы (при их наличии); он должен быть заправлен под воротник костюма; необходимо на лице носить маску для предотвращения распространения капелек. Следует носить соответствующим образом простерилизованные и неопудренные резиновые или пластиковые перчатки и простерилизованные или продезинфицированные бахилы. Нижние края штанин должны быть заправлены в бахилы, а рукава одежды – в перчатки. Защитная одежда практически не должна выделять волокна или частицы и должна задерживать частицы, которые отделяются от тела.

Уличную одежду запрещается вносить в помещения для переодевания, которые ведут в помещения классов В и С. Каждый работник в зоне класса А/В должен быть обеспечен чистой стерильной (простерилизованной или прошедшей соответствующую санитарную обработку) защитной одеждой для каждой смены. Перчатки во время работы необходимо регулярно дезинфицировать. Маски и перчатки необходимо менять, по крайней мере, каждую смену.

Одежду для чистых помещений необходимо очищать и обрабатывать таким образом, чтобы она впоследствии не становилась причиной контаминации. Эти операции следует выполнять в соответствии с письменными инструкциями. Для подготовки такой одежды желательно иметь отдельные прачечные. Ненадлежащим образом проведенная обработка одежды приводит к повреждению волокон ткани, что увеличивает риск отделения частиц.

На предприятии должны быть разработаны детальные программы по гигиене труда, с учетом особенностей конкретного производства. Правила должны содержать процедуры, касающиеся здоровья, соблюдения гигиенических правил и одежды персонала. Каждый сотрудник, обязанности которого предполагают пребывание в зонах производства и контроля, должен понимать и точно соблюдать эти правила. Руководство предприятия должно содействовать развитию программ по гигиене, которые следует широко обсуждать при обучении.

Каждый поступающий на работу должен пройти медицинский осмотр. Производитель несет ответственность за наличие процедур, в соответствии с которыми обеспечивается его информирование о таком состоянии здоровья сотрудников, которое может повлиять на качество продукции. После первого медицинского осмотра последующие проводятся периодически, а также в тех случаях, если это необходимо для работы или здоровья персонала.

Должны быть приняты меры, гарантирующие, насколько это возможно, что ни один сотрудник с инфекционным заболеванием или повреждениями на открытых участках тела не будет допущен к производству лекарственных средств.

Защитная одежда входящего в производственные помещения (зоны) должна соответствовать назначению помещения и выполняемым операциям.

В производственных зонах и складских зонах запрещаются курение, прием пищи, питье, жевание резинки, а также хранение пищевых продуктов, напитков, табачных изделий или личные лекарственных средств. Не допускается любая деятельность, нарушающая гигиенические требования в производственных помещениях (зонах) или в других местах, которая может оказать неблагоприятное влияние на качество продукции.

Следует избегать прямого контакта между руками оператора и открытой продукцией, а также любой частью оборудования, контактирующей с продукцией.

Персонал должен быть обучен правилам мытья рук.

ВР 1.4 Подготовка воздуха

Производственные помещения должны иметь эффективную систему приточно-вытяжной вентиляции с контролирующим воздушный поток оборудованием и приборами для измерения температуры и влажности воздуха.

В соответствии с требованиями к помещениям для производства лекарственных средств в асептических условиях РДП 46-3-80 все производственные помещения делятся на 4 класса в зависимости от чистоты воздуха.

Таблица. Максимальное допустимое число частиц в 1 м³ воздуха

Зона	Максимальное допустимое число частиц в 1 м³ воздуха, при размере частиц, равном или большем
В оснащенном состоянии	В эксплуатируемом состоянии
0,5 мкм	5,0 мкм	0,5 мкм	5,0 мкм
А	3 520		3 520
B	3 520		352 000	2 900
C	352 000	2 900	3 520 000	29 000
D	3 520 000	29 000	Не регламентируется	Не регламентируется

Помещения 1-го класса чистоты предназначены для проведения операций, представляющие высокий риск для качества продукции.

(Зоны наполнения, фасовки, укупорки, вскрытия ампул и флаконов) В помещениях 2-го класса проводится приготовление растворов, наполнение ампул. Помещение 3-го класса - для мойки и стерилизации вспомогательных материалов. В помещениях 4-го класса - операции с первичной упаковкой и материалами после мойки.

Между помещениями различных классов чистоты создается подпор воздуха и устанавливается шлюзовые соединена. При входе в помещение 1-го класса персонал должен проходить через тамбур, где устанавливаются воздушный душ.

В «чистых» помещениях необходимо поддерживать определенную температуру и влажность в соответствии с ГОСТ 12.1.005-76, использовать бактерицидные лампы. Помещение должны быть герметизированы. Воздух подается через фильтр предварительной очистки и затем - через стерилизующий фильтр с материалом марки ФПП-1. Скорость потока воздуха по всему сечению помещения - 27,5 м/мин ± 20%.

ВР2. Подготовка натрия хлорида, фильтров и контейнеров, получение воды для инъекций

ВР 2.3 Подготовка фильтров и фильтрующих материалов

Фильтр-грибок работает под вакуумом. Он представляет собой перфорированную воронку, на которую намотан фильтрующий материал (два слоя бязи, слой ваты и т.д.). Фильтры должны максимально качественны; задерживать очень мелкие частицы и микроорганизмы; обладать высокой механической прочностью, чтобы препятствовать выделению волокон и механических включений; противодействовать гидравлическим ударам и менять свои функциональные характеристики; не изменять физико-химический состав и свойства фильтрата; не взаимодействовать с лекарственными, вспомогательными веществами и растворителем; выдерживать тепловую стерилизацию.

ТП 1 Приготовление раствора

ТП 2. Ампулирование.

ТП 2.1 Резка ампул.

Операция проводится так, чтобы ампулы получались одинаковой высоты. Это важно для точности их наполнения вакуумным способом. Концы капилляров на месте вскрытия должны иметь ровные и гладкие края для уменьшения загрязнения ампул стеклянной пылью и для обеспечения качественной запайки.

Вскрытие капилляров ампул будем проводить с помощью приставки для резки ампул к стеклоформующему автомату. Принцип работы данного устройства заключается в следующем: ампулы из лотка стеклоформующего автомата с помощью транспортных линеек приставки попадают в питатель. Коромыслом с масляным демпфером ампулы плавно подводятся к дисковому ножу, который делает на капилляре круговой надрез, на месте которого происходит вскрытие за счет термоудара при нагревании первой горелкой. Перед нанесением кругового надреза ампула приводится во вращательное движение роликом. Далее на второй горелке кончик капилляра оплавляется, и ампулы попадают в бункер для набора ампул в кассеты.

ТП.2.3 Мойка и сушка ампул

Мойка ампул включает в себя наружную мойку и внутреннюю.

Ø Наружная осуществляется на полуавтоматах АП-2М-2. Полуавтоматы имеют свободновращающуюся подставку, на которую устанавливается кассета с ампулами, душирующее устройство в верхней части камеры подает горячую фильтрованнную воду, под действием воды кассета с ампулами вращается и ампулы равномерно обмываются снаружи.

Ø Внутренняя мойка осуществляется шприцевым способом.

Принцип работы: в ампулу, ориентированную капилляром вниз вводят полую иглу, через которую под давлением подают воду. Турбулентная струя воды из шприца отмывает внутреннюю поверхность ампулы и удаляется через зазор между ампулой и отверстием капилляра.

ТП – 4. Просмотр ампул

Проводят путем просмотра сосудов на черном и белом фоне при освещении 60 Вт. На черном фоне проверяются прозрачность и наличие механических включений – стеклянная пыль, волокна фильтрующих материалов, не растворенные частицы лекарственного вещества и т.д.; на белом – цветность раствора, отсутствие механических включений черного цвета и целостность стеклянного изделия. Метод имеет недостатки: субъективизм контролируемого – острота зрения, опыт работы, усталость контролера и т.д. Допустимая ошибка метода составляет 30%.

ТП – 5. Стандартизация

Раствор натрия хлорида 0,9% для инъекций подвергается испытаниям согласно ГФ РБ на:

· Отсутствие механических включений;

· Стерильность;

· Однородность дозированных единиц;

· Бактериальные эндотоксины;

· Пирогенность;

· Аномальная токсичность;

· Определение извлекаемого объема парентеральных лекарственных средств.

Отсутствие механических включений:

Ø Проводят путем просмотра сосудов на черном и белом фоне при освещении 60 Вт.

Ø На черном фоне проверяются прозрачность и наличие механических включений – стеклянная пыль, волокна фильтрующих материалов, не растворенные частицы лекарственного вещества и т.д.;

Ø На белом – цветность раствора, отсутствие механических включений черного цвета и целостность стеклянного изделия.

Метод имеет недостатки:

Ø Субъективизм контролируемого – острота зрения, опыт работы, усталость контролера и т.д.

Ø Допустимая ошибка метода составляет 30%.

Стерильность

Испытание может быть выполнено с использованием метода мембранной фильтрации или путем прямой инокуляции питательной среды испытуемым продуктом.

Мембранная фильтрация.

Используют мембранные фильтры с номинальным размером пор, не превышающим 0,45 мкм, с установленной способностью к удерживанию бактерий. Например, фильтры на основе нитрата целлюлозы используют для водных, масляных и разбавленных спиртовых растворов, а фильтры на основе ацетата целлюлозы – в частности, для растворов с высоким содержанием спирта.

Аппарат для фильтрации и мембрану стерилизуют подходящим способом.

Небольшое количество подходящего стерильного растворителя, не подавляющего рост микроорганизмов, например, нейтрального раствора мясного или казеинового пептона концентрацией 1 г/л (рН 7,1 ± 0,2), помещают на мембрану аппарата и фильтруют.

Содержимое контейнера, подлежащих испытанию, переносят на мембрану и фильтруют. Затем мембрану целиком переносят в питательную среду или в асептических условиях делят ее на две равные части, каждую из которых помещают в две подходящие среды. Кроме того, среда может быть нанесена на мембрану в аппарате.

Жидкая тиогликолевая среда предназначена в первую очередь для культивирования анаэробных бактерий, но также обнаруживает и аэробные бактерии. Среда на основе гидролизатов соевых бобов и казеина и среда Сабуро подходит для культивирования как грибов, так и аэробных бактерий. Среды инкубируют в течение не менее 14 дней.

Бактериальные эндотоксины

Испытание на бактериальные эндотоксины проводят для определения наличия или количества эндотоксинов, источником которых являются грамотрицательные бактерии, с использованием лизата амебоцитов мечехвоста Limulus polyphemus или Tachypleus tridentatus. Существует три принципа проведения данного испытания: принцип гель-тромба, основанный на образовании геля; турбидиметрический принцип, основанный на помутнении в результате расщепления эндогенного субстрата; хромогенный принцип, основанный на появлении окраски после расщепления синтетического пептидно-хромогенного комплекса. В настоящем разделе описаны шесть методов:

Метод А. Гель-тромб-метод: предельное испытание.

Метод В. Гель-тромб-метод: полуколичественное испытание.

Метод С. Турбидиметрический кинетический метод.

Метод D. Хромогенный кинетический метод.

Метод Е. Хромогенный метод конечной точки.

Метод F. Турбидиметрический метод конечной точки.

Испытание выполняют любым из этих шести методов. В сомнительных и спорных случаях окончательное решение принимают, основываясь на методе А, если иное не предписано в частной статье. Испытание выполняют в условиях, не допускающих загрязнения посторонними эндотоксинами.

Принцип гель-тромба (Метод А): гель-тромб-методы позволяют определять наличие и количество эндотоксинов и основываются на эффекте свертывания лизата в присутствии эндотоксинов. Концентрация эндотоксинов, требующаяся для свертывания лизата в стандартных условиях, представляет собой указанную на этикетке чувствительность лизата.

Готовят стандартные растворы не менее, чем четырех концентраций, эквивалентных 2λ, λ, 0,5λ и 0,25 λ, путем разбавления исходного стандартного раствора эндотоксина водой для ИБЭ. В каждой из пробирок смешивают раствор лизата с равным объемом одного из стандартных растворов (например, по 0,1 мл каждого). Реакционную смесь инкубируют в течение определенного периода, в соответствии с рекомендациями производителя лизата (обычно 37±10С в течение 60±2 минут), избегая вибрации. Исследуют целостность геля: при использовании пробирок каждую из них по очереди извлекают из инкубатора и переворачивают одним плавным движением приблизительно на 180°. Если образуется твердый гель, остающийся на своем месте после переворачивании, результат записывают как положительный. Результат отрицательный, если неповрежденного геля не образуется. Результаты испытания считают достоверными, если низшая концентрация стандартных растворов во всех повторностях дает отрицательный результат. За конечную точку принимают последний положительный результат в нисходящем ряду концентраций эндотоксина.

Пирогенность

Пирогены - высокомолекулярные вещества от 50 до 1 мкм липополисахариды отсорбированные белковым носителем, содержат углеводы, азот, фосфор, зольные вещества.

Различные вещества, вызывающие при внутрисосудистом введении лихорадочные состояния.

Свойства: растворимы в воде, нерастворимы в спирте и ацетоне, устойчивы к высокой температуре, изменение рН раствора не влияет на устойчивость.

Делятся на:

Ø Эндогенные (клеточнотканевые, образуются в определенных условиях);

Ø Экзогенные (содержатся в микроорганизмах и выделяются ими в процессе жизнедеятельности).

Источники:

Ø микроорганизмы (грамм и грамм бактерии, грибы и вирусы);

Ø некоторые химические вещества (продукты термоокислительной деструкции пластмасс и фторопластов).

Существует три степени тяжести пирогенных реакции:

Ø Легкая степень ( незначительное повышение температуры 370С)

Ø Средняя степень(озноб, головная боль, повышение температуры до 390С, проходит в течении нескольких часов)

Ø Тяжелая степень (сильный озноб, боли в пояснице, рвота, отдышка, повышение температуры до 400С, возможен смертельный исход, улучшение наступает через сутки)

Методы контроля на апирогенность

Ø Биологическое испытание

Ø LAL-тест ( высоко чувствительный и специфичный)

Биологическое испытание
Испытание состоит в измерении роста температуры тела, вызванного у кроликов внутривенном введением стерильного раствора испытуемого образца.

Ø Используют здоровых взрослых кроликов обоего пола массой не менее 1,5 кг, получавших полноценное сбалансированное питание, не включающее антибиотиков, масса тела которых не снижалась в течение недели, предшествующей испытанию.

Ø Помещение для животных. Кроликов содержат индивидуально в тихом помещении при однородной подходящей температуре. Испытание проводят в тихом помещении, где могут возбудить животных, и в котором температура поддерживается на уровне не более чем на 3°С, отличающимся от температуры поддерживаемое в месте постоянного содержания кроликов. Животные помещаются в клетки не менее чем за 1 час до первого измерения температуры и остаются там в течение всего испытания.

Ø Используют термометр или электрическое устройство, показывающее температуру с точностью до 0.1°С, вводя его в прямую кишку кролика на глубину около 5 см. Глубина введения постоянна для каждого из кроликов в течение каждого из испытаний.

Предварительное испытание:

Ø вводят внутривенно апирогенный раствор 9 г/л натрия хлорида Р. Нагретый до температуры 38,5 0С в количестве 10 мл на килограмм массы тела. Записывается температура животных, начиная не менее чем за 90 минут до введения и продолжая в течение 3 часов после введения раствора . Животные, температура которых колеблется в пределах более чем 0,60С , не используются в основном испытании.

Основное испытание:

Ø Проводят с использованием группы из трех кроликов.

Ø Испытуемый раствор медленно вводят в крайнюю вену уха каждого из кроликов в течение не более 4 минут.

Ø После проведения испытания на группе из 3 кроликов его при необходимости повторяют на других группах из 3 кроликов ( суммарно до 4-х групп, в зависимости от полученных результатов).

Ø Если суммированный результат, полученный в первой группе, не превышает значение, данное во второй колонке таблицы 5 считают, что продукт выдерживает испытание.

Ø Если суммированный результат превышает значение, данное во второй колонке таблицы 5, но не превышает значение, данное в третьей колонке таблицы, испытание повторяют как указано выше.

Ø Если суммированный результат превышает значение, данное в третьей колонке таблицы , считают, что продукт не выдерживаетиспытание.

Таблица 5: Значения для биологического испытания на пирогенность

Количество кроликов	Продукт выдерживает испытание, если суммированный результат не превышает	Продукт не выдерживает испытание, если суммированный результат превышает
	1,150С	2,650С
	2,800С	4,300С
	4,450С	5,950С
	6,600С	6,600С

Ø Кролики, которые использовались в испытании на пирогенность, в случае если повышение температуры составило 1,2°С , исключаются из дальнейших испытаний.

Ø Недостаток: относительная длительность проведения эксперимента, различная чувствительность к пирогенам у кролика и человека, нельзя провести количественное определение.

LAL-тест:

Ø В основе лежит физико-химическое взаимодействие лизата клеток мечехвостиков с эндотоксином.

Ø В результате образуется гель различной плотности.

Ø Можно установить наличие эндотоксина и провести количественное определение.

Ø Время выполнения 1 час.

Ø Испытание на бактериальный токсин проводят для определения его присутствия или количества( источник эндотоксина Гр- бактерии).

Существует 3 принципа проведения испытания:

1. Принцип гель тромба ( основан на образовании геля);

2. Турбидиметрический метод ( основан