Аллергены, методы получения и цель использования

Аллергены представляют собой антигены (белки, белково-нуклеиновые комплексы) микроорганизмов, способные сенсибилизировать организм. Повторное (последующее) введение такого антигена-аллергена проявляется аллергической реакцией. Аллергены применяются для аллергического метода диагностики (кожно-аллергический тест).

При некоторых инфекционных заболеваниях развивается состояние повышенной чувствительности (сенсибилизации) организма к специфическому аллергену, которым является возбудитель данного заболевания. Состояние повышенной чувствительности в этих случаях определяется внутрикожным введением аллергена. Аллергическая реакция такого типа обычно связана с реакцией сенсибилизированных лимфоцитов и относится к классу гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ).

Клинически такая реакция выражается появлением зоны инфильтрации и гиперемии в месте введения аллергена (по механизму IV типа ГЗТ), что оценивается как положительный результат, свидетельствующий о сенсибилизации организма антигенами данного микроба. Кожно-аллергические пробы применяются для диагностики туберкулеза (туберкулин), сибирской язвы (антраксин), бруцеллеза (бруцеллин), туляремии (тулярин) и некоторых других.

Туберкулин ¾ очищенная белковая основа туберкулезных бактерий. Представляет собой препарат микробных белков, полученных из бульонной культуры возбудителя туберкулеза. Используется для постановки пробы Манту. Внутрикожная проба Манту применяется для отбора лиц подлежащих ревакцинации. Положительная проба (папула 5мм и более) свидетельствует о том, что вакцинный штамм еще находится в организме или об инфицированности организма туберкулезными бактериями и является противопоказанием для ревакцинации.

Препараты для постановки антитоксических проб

Для выявления напряженности антитоксического иммунитета применяют антитоксические пробы. С этой целью обследуемому человеку внутрикожно вводят небольшие безвредные дозы токсина. Если в организме обследуемого есть антитела к токсину, то они нейтрализуют вводимый токсин и воспаление в месте инъекции токсина не развивается. Если антитоксический иммунитет отсутствует, то в месте инъекции токсина возникает отечность и краснота.

Проба Шика ставится для выявления восприимчивости к дифтерийному токсину. С этой целью детям внутрикожно вводят дифтерийный токсин в количестве 1/40 Dlmдля морской свинки. При наличии у ребенка антитоксического иммунитета ¾ на месте введения токсина будут отсутствовать признаки воспаления.

Проба Дика ставится для выявления восприимчивости к скарлатине. С этой целью внутрикожно вводят эритрогенный стрептококковый токсин в количестве 1 кожной дозы. Отрицательная реакция свидетельствует о наличии в крови обследуемого скарлатинозного антитоксина. Последняя в настоящее время не применяется и имеет лишь исторический интерес.

Умелое использование иммунологических препаратов для профилактики и лечения больных, предотвращает распространение инфекционных заболеваний, которые не только наносят ущерб здоровью людей, но и вызывают еще значительные экономические потери общества.

Использование для лечения больных инфекционными заболеваниями, наряду с антибиотиками и антибактериальными химиопрепаратами (сульфаниламиды, нитрофураны, имидазолы, фторхинологны и др.), иммунологических препаратов (иммунных сывороток и иммуноглобулинов) оказывается очень эффективным, особенно в начале развития болезни.

III. План практической работы

1. Изучить схему оценки иммунного статуса человека, тесты оценки иммунного статуса человека: клеточных и гуморальных факторов врожденного и приобретенного иммунитета и методы их определения (см. базовый текст).

2. Изучить схему постановки и учесть реакцию Манчини с целью определения концентрации IgG.

Моноспецифическую антиIgG сыворотку смешивают с расплавленным агаровым гелем и выливают в чашку Петри. После застывания в геле делают лунки, в которые вносят равные объемы исследуемых и стандартных сывороток. Стандартные сыворотки содержат различные известные концентрации IgG. Чашку Петри инкубируют при 37ºС в течение 4 часов. Антиген (IgG) диффундирует в гель и образует со специфическими антителами кольца преципитации (зоны иммунодиффузии). Затем измеряют диаметры зон иммунодиффузии вокруг контрольных лунок и строят калибровочную прямую. Измерив диаметры зон иммунодиффузии вокруг исследуемых лунок и используя калибровочную прямую, находят концентрацию IgG в образце.

3. Изучить схему постановки и учесть реакцию определения титра комплемента в сыворотке крови.

Готовят разведения исследуемой сыворотки 1:10, 1:15, 1:20, 1:25, 1:30, 1:35 и 1:40. К 0,2 мл каждого разведения сыворотки добавляют по 0,4 мл гемолитической системы (смесь равных объемов 3% суспензии эритроцитов барана в изотоническом растворе хлорида натрия и гемолитической сыворотки кролика в тройном титре после их инкубации в течение 30 минут). Готовят контроли гемолитической системы, включающий компоненты гемолитической системы и изотонический раствор хлорида натрия, и контроль комплемента, содержащий гемолитическую систему и стандартный препарат комплемента. После инкубации пробирок 30 минут при 37ºС определяют титр комплемента ¾ наибольшее его разведение, которое вызывает полный лизис эритроцитов в гемолитической системе.

4. Разобрать предложенные биопрепараты, распределить их по группам, охарактеризовать состав, метод получения и цель применения.

5. Изучить и выписать названия вакцин, схемы вакцинации и ревакцинации для вакцин, применяемых согласно национальному календарю иммунизации и используемых по эпидемиологическим показаниям согласно таблице.

IV. Примеры ситуационных задач

Задача 1

При учете реакции Манчини получены следующие результаты: диаметр зоны иммунодиффузии контрольной лунки, в которую была внесена стандартная сыворотка, содержащая IgM в концентрации 1 г/л, равен 5 мм, диаметр зоны иммунодиффузии одной из опытных лунок равна 15 мм. Рассчитать, какая концентрация IgM содержится в исследуемой сыворотке. Оцените полученный результат и интерпретируйте его в контексте инфекционной патологии.

Задача 2

Реакция иммунного гемолиза была использована для предварительного этапа РСК. В пробирках с разведениями комплемента 1:10, 1:15, 1:20 наблюдается гемолиз, с разведениями 1:25, 1:30, 1:35, 1:40 ¾ отсутствие гемолиза. В пробирке с контролем гемолитической системы гемолиз отсутствует, в пробирке с контролем комплемента ¾ гемолиз. Дайте оценку специфичности реакции. Определите титр и рабочую дозу комплемента.

Задача 3

Назовите какие группы биопрепаратов могут быть использованы для профилактики инфекционных заболеваний лицам, контактировавшим с уже заболевшими людьми. Объясните механизм их действия.

Таблица 34. Прививочный календарь России с учетом вакцинации против гепатита В

Прививки против	Сроки вакцинации	Сроки ревакцинация	Примечание
Первая	Вторая	Последующие
Гепатита В, дрожжевая, рекомбинантная «Комбитех ЛТД» ¾ Россия, Энджерикс-В ¾ «СмитКляин Битчем», H-B-Vax П «Мерк Шарп и Доум»	Первая доза ¾ в первые 12 часов, вторая в месяц и третья ¾ в 6 мес. (вместе с АКДС-3 и ОПВ-3).	через 7 лет			Дети от матерей ¾ носителей вируса и больных гепатитом В вакцинируются в первые 24 часа жизни по схеме: 0, 1, 2 и 12 мес. жизни
Туберкулеза (БЦЖ)	3-5 день	7 лет	11-12 лет	16-17, 22-23, 27-30 лет	Ревакцинацию проводят только туберкулинонега-тивньм лицам
Полиомиелита (ОПВ)	с 3-х мес. трехкратно с интервалом 45 дней	от 1 до 2 лет двукратно	от 2 до 3 лет двукратно	7-8 и 15-16 лет однократно	Рекомендуется проводить одновременно с АКДС (АДС)
Коклюша, дифтерии, столбняка (АКДС)	с 3-х мес. трехкратно с интервалом 45 дней	через 12-18 мес. после законченной вакцинации			Вакцинация может проводиться одновременно с вакцинацией против полиомиелита
Дифтерии и столбняка (АДС — анатоксин)	с 3-х мес. двукратно с интервалом 45 дней	через 9-12 мес. после законченной вакцинации			Вакцинация может проводиться одновременно с вакцинацией против полиомиелита
Дифтерии и столбняка (АДС-М ¾ анатоксин)			6-7 лет перед школой	16-17 лет, далее каждые 10 лет	Ревакцинация проводится однократно. Взрослым лицам ревакцинация проводится однократно каждые 10 лет
Дифтерии (АДМ ¾ анатоксин)	Примечание: При иммунизации детей по индивидуальным графикам, интервал между первой и второй ревакцинацией должен быть не менее 4 лет, а между последующими ревакцинациями он не должен превышать 5 лет	11-12 лет	Ревакцинация проводится однократно
Кори (ЖКВ)	с 12 мес.	6-7 лет перед школой
Эпидемического паротита (ЖПВ)	с 12 мес.

Теоретические вопросы для рубежного контроля знаний

1. Понятие «иммунитет». Виды иммунитета.

2. Клеточные факторы врожденного иммунитета. Фагоцитоз.

3. Иммунная система организма. Основные клетки иммунной системы и их характеристика.

4. Гуморальные факторы врожденного иммунитета.

5. Система комплемента, пути ее активации.

6. Определение понятия «антиген». Свойства антигенов. Виды антигенов.

7. Определение понятия «антитело». Классы антител и их свойства.

8. Иммунный ответ и этапы межклеточной кооперации при гуморальном иммунном ответе.

9. Этапы межклеточной кооперации при клеточном иммунном ответе.

10. Иммунологические реакции: определение, применение для диагностики инфекционных заболеваний.

11. Серологический метод.

12. Реакция агглютинации и ее виды.

13. Механизм реакции пассивной гемагглютинации. Эритроцитарные диагностикумы.

14. Реакция преципитации. Определение, виды.

15. РСК: этапы, методика определения рабочей дозы комплемента, подготовка гемолитической системы.

16. Особенности современных серологических реакций с использованием меток.

17. Механизм, цели применения реакции иммунофлюоресценции (РИФ), виды РИФ, основные ингредиенты.

18. Механизм, цели применения иммуноферментного анализа (ИФА), ингредиенты.

19. Механизм, ингредиенты радиоиммунного анализа (РИА).

20. Механизм, ингредиенты иммуноблоттинга.

21. Механизм, ингредиенты иммунной электронной микроскопии.

22. Иммунный статус человека. Понятие, уровни, тесты оценки.

23. Тесты оценки иммунного статуса человека I уровня и методы их определения.

24. Тесты оценки иммунного статуса человека II уровня и методы их определения.

25. Реакция Манчини: цель, механизм и ингредиенты реакции Манчини.

26. Механизм, ингредиенты, постановка реакции определения титра комплемента.

27. Понятие об иммунопрофилактике и иммунотерапии. Показания к вакцинации и противопоказания.

28. Виды и методы получения вакцин.

29. Метод получения, цель применения анатоксинов.

30. Природа, цели применения адьювантов.

31. Виды, методы получения, цели применения иммунных сывороток.

32. Цели применения бактериофагов.

33. Иммунологические препараты для диагностики инфекционных заболеваний.

34. Виды, методы получения и цели применения диагностикумов.

35. Аллергены, методы получения и цель использования.