Исходы взаимодействия вирусов с клеткой хозяина

1. Продуктивный процесс —репликация (продукция) вирусов.Выделяют:

· продуктивный цитолитический процесс с образованием инфекционного потомства и выходом вирионов во внеклеточную среду.

· продуктивной нецитолитический процесс с образованием инфекционных вирусных частиц без лизиса клетки, которая продолжает функционировать.

Цитопатический эффект является результатом интенсивного размножения и формирования большого количества вирусных частиц (характерный результат продуктивного процесса), вызванного вирусами с высокой цитопатогенностью. Цитопатический эффект действия на клеточные культуры для многих вирусов носит узнаваемый специфический характер;

2. Интегративный процесс —интеграция вирусного генома с геномом клетки хозяина (вирогения).Это особый вариант продуктивного процесса по типу стабильного взаимодействия. Вирус реплицируется вместе с геномом клетки хозяина и может длительно находиться в латентном состоянии. Встраиваться в ДНК — геном хозяина могут только ДНК- вирусы (принцип “ДНК — в ДНК”). Единственные РНК — вирусы, способные интегрироваться в геном клетки хозяина — ретровирусы, имеют для этого специальный механизм. Синтез ДНК провируса на основе геномной РНК с помощью фермента обратной транскриптазы (ревертазы) с последующим встраиванием ДНК в геном хозяина.

3. Абортивный процесс —клетки освобождаются от вируса, не вызывая появление дочерней популяции или появление в меньшем количестве. При инфицировании дефектным вирусом, для репликации которого нужен вирус- помощник, самостоятельная репликация этих вирусов невозможна. Например, дельта вирус или вирус гепатита D может реплицироваться в клетке только при наличии вируса гепатита B, его HВs — антигена. При инфицировании вирусом генетически нечувствительных к нему клеток или при заражении чувствительных клеток вирусом в неблагоприятных условиях.

Возможные последствия инфекционного процесса, вызванного вирусами для клетки:

• сохранение жизнеспособности клетки
• деструкция клетки, возникающая при цитолитической инфекции (цитопатогенное действие вируса — ЦПД)
• образование многоядерных клеток в результате их слияния (симпластообразование)
• образование вирусных внутриклеточных включений

· онкогенная трансформация клетки при интеграции вирусного генома с геномом клетки (вирогении, интегративной инфекции)

Вирусологический метод. Культивирование вирусов

Лабораторные методы диагностики вирусных инфекций включают:

· вирусоскопический метод (табл. 37),

· вирусологический метод (культивирование, индикация и идентификацию возбудителя),

· серологический метод (обнаружение и определение титра противовирусных антител с помощью РТГА, РСК, ИФА и др.),

· экспресс-метод (реакция иммунофлюоресценции — РИФ, иммунная электронная микроскопия — ИЭМ, обнаружение элементарных телец, включений),

· молекулярно-генетический метод (обнаружение генетического материала с помощью ПЦР)

· биологический (применяют чувствительных лабораторных животных для культивирования, индикации и идентификации вирусов, изучение клинических симптомов и патоморфологических изменений.

Таблица 37. Особенности вирусоскопического метода диагностики

Вирусоскопический метод (время проведения 1-2 часа)
а) световая микроскопия	применяется для обнаружения крупных вирусов (оспы) в окраске по Морозову и внутриклеточных вирусных включений в окраске по Туревичу и Муромцеву. Применяется для экспресс-диагностики.
б) электронная микроскопия	дает возможность изучить ультраструктуру вириона
е) метод иммунной элек­тронной микроскопии, в основе которого лежит взаимодействие антител с вирусами при смешивании вируссодержащего материала со специфической сыворот­кой	в результате реакции образуется микропре­ципитаты, состоящие из вирусных частиц, покрытых своеобраз­ным «венчиком». Применяется для экспресс-диагностики.
г) иммунофлюоресцентный метод (прямой и не­прямой) с использованием флюоресцирующих сывороток	при положительной реакции в люминес­центном микроскопе наблюдается специ­фическое свечение. Применяется для экспресс-диагностики.

Вирусологический метод направлен на выделение и идентификацию вируса и является «золотым стандартом» в диагностике вирусных инфекций. Вирусы являются облигатными внутриклеточными паразитами, в связи с этим, вирусологический метод имеет ряд принципиальных особенностей. Для проведения вирусологического метода диагностики требуется от 3-5 суток до 1 месяца. Схема вирусологического метода включает ряд последовательных этапов: 1) забор, транспорт и подготовка исследуемого материала, 2) культивирование, 3) индикация и 4) идентификация вирусов (табл. 38).

При заборе материала для исследований необходимо отбирать образцы с учетом локализации первичной репликации и ритма циркуляции возбудителя. Образцы следует доставлять в лабораторию незамедлительно, при относительно кратковременной транспортировке (не более 5 суток) образцы сохраняют на льду, при более длительной — при tºC -50ºC.

Таблица 38. Схема вирусологического метода

Подготовка исследуемого материала	Клинический материал обычно содержит смесь бактерий и вирусов, с целью их разделения проводят: · центрифугирование · антибактериальную деконтаминацию (антибиотики широкого спектра действия — бензилпенициллин, стрептомицин и др.) · фильтрацию (бактериальные фильтры)
Культивирование вирусов	Вирусы размножаются только в живых клетках, соответственно используются следующие способы культивирования: · куриные эмбрионы · лабораторные животные · культуры клеток (клеточные культуры) — первичные, полуперевиваемые, перевиваемые
Индикация вирусов	Цель данного этапа — выявление вируса. Вирусы являются ультрамикроскопическими микроорганизмами и для их визуализации используют специальные (опосредованные) методы: · цитопатогенного действия (ЦПД) вирусов (деструкция монослоя культуры клеток, формирование внутриклеточных включений, синцития и симпластов и др.) · образования бляшек · реакции гемагглютинации (РГА) · гемадсорбции · «цветной» реакции (подавление метаболической активности)
Идентификация вирусов	После обнаружения вируса необходимо определить вид и тип этого вируса. Существует два вида идентификации: Для сероидентификации вирусовиспользуют Культивированные вирусы в культуре клеток, аллантоисную или амниотическую жидкость заражённого кури­ного эмбриона, и ставят реакции: а) торможения (задержки) гемагглютинации (РТГА) б) связывания комплемен­та (РСК) в) нейтрализации (РН) г) иммуноферментного анализа (ИФА) д) реакция иммунофлюоресценции (РИФ) е) радиоиммунный анализ (РИА) Для генетической идентификации – ПЦР (полимеразная цепная реакция), МГ (молекулярная гибридизация)