Поставить и учесть (демонстрация) опыт по определению чувствительности кандид к противогрибковым препаратам, красителям, антибиотикам широкого спектра действия
Чистую культуру возбудителя, выделенную из клинического материала больного (соскоб белого налета из мест поражений), засевают на поверхность питательного агара (среда Сабуро) сплошным газоном с помощью стеклянного шпателя. После посева крышку чашки приоткрывают не более чем на 15 мин и дают поверхности среды подсохнуть. Затем стерильным пинцетом следует положить на поверхность агара бумажные диски, пропитанные раствором определенного противогрибкового препарата, и слегка придавить. Расстояние между дисками и краем чашки должно быть не менее 15 мм. Для контроля наносят диски с антибиотиками широкого спектра действия (тетрациклин, стрептомицин и др.). Чашки инкубируют около 18 ч при 37°С в перевернутом положении. При наличии чувствительной к антибиотику флоры вокруг соответствующих дисков отмечается зона угнетения роста микроорганизмов. Диаметр зоны измеряют с точностью до 1 мм, определяя чувствительность: чувствительные (>20 мм), промежуточная чувствительность (15-20 мм), устойчивые (14 мм и менее).
Заключение: рекомендовано применение противогрибковых препаратов, к которым чувствительны кандиды: …….
Учесть и зарисовать готовую РА с “парными” сыворотками в серодиагностике кандидоза.
Данный серологический метод диагностики используют для выявления противогрибковых антител в сыворотке крови больного.
Компоненты реакции: исследуемые сыворотки пациента (материал берется на конец 1-й — начало 2-й и конец 3-й — начало 4-йнеделях с момента заболевания), кандидозный диагностикум и фосфатный буфер.
Постановка: «парные» исследуемые сыворотки титруют в 2-х рядах пробирок фосфатным буфером от 1:50 с двукратным увеличением титра. Для создания контролей в каждую предпоследнюю пробирку ряда вносят 0,5 мл сыворотки на физиологическом растворе и в каждую последнюю — 0,5 мл кандидозного диагностикума на физиологическом растворе. После добавления во все опытные лунки одинакового количества кандидозного диагностикума проводят инкубацию в термостате при температуре 37º 30-40 минут, а затем сутки выдерживают при комнатной температуре (18-20°С).
Учетразвернутой реакции агглютинации производят, оценивая последовательно каждую пробирку, начиная с контрольных. Контроль сыворотки больного — жидкость прозрачная, осадка нет. Контроль диагностикума — жидкость прозрачная, на дне осадок в виде белой «пуговки».
Для опытных лунок положительным результатом является агглютинация в лунках (хлопья агглютината в абсолютной прозрачной жидкости (белый «зонтик»); отрицательная реакция «-» — отсутствие агглютинации (белая «пуговка»).
Учет результатов реакции производят путем установления нарастания антител в «парных» сыворотках (нарастание титра антител во второй сыворотке по сравнению с первой в 4 и более раза является положительным результатом).
Заключение:отмечаетсянарастание титра антител во второй сыворотке по сравнению с первой в 4 раза, что является признаком «свежего» инфекционного процесса.
Изучить и зарисовать морфологические и тинкториальные свойства актиномицетов и друзы в тканях по таблице.
Характерная особенность актиномицетов — способность образовывать хорошо развитый мицелий. Грам+ палочковидные формы часто имеют утолщённые концы, в мазках располагаются одиночно, парами, V-или Y-образно. Окраску по Граму фиксируют плохо; часто образуют фиолетовые зернистые формы.
Друзы актиномицетов имеют плотную, каменистую консистенцию и скрипят как песок при раздавливании между стеклами. Друзы актиномицетов (по Романовскому-Гимзе) образованы агрегатами мицелия, имеющими вид округлых или овальных базофильных масс с эозинофильными включениями на поверхности.
Примеры ситуационных задач
Ситуационная задача
У больного С. 22 года, после курса антибиотикотерапии появился желтоватый «творожистый» налет на слизистой оболочке полости рта. При микроскопии в мазке обнаружены скопления Грам+ овальных клеток. При посеве на питательные среды возбудитель образует колонии средних размеров, молочно-белые, напоминающие «капли майонеза». Биохимические свойства характеризуются способностью ферментировать глюкозу и мальтозу с образованием кислоты и газа.
Назовите возбудителя данного заболевания:
1) Actinomyces israelii
2) Epidermophyton floccosum
3) Trichophyton rubrum
4) Candida albicans
5) Staphylococcus aureus
Назовите питательные среды для культивирования данного возбудителя:
1) сывороточная среда с ристомицином
2) среда Сабуро
3) среда Сотона
4) глюкозо-пептонный агар
5) ЖСА
Перечислить методы лабораторной диагностики заболевания:
1) бактериоскопический
2) биологический
3) серологический
4) бактериологический
5) аллергологический
Теоретические вопросы для рубежного контроля знаний
1) Характеристика биологических свойств возбудителя и особенности микробиологической диагностики сыпного тифа: эпидемического и эндемического (крысиного)
2) Характеристика биологических свойств возбудителя и особенности микробиологической диагностики Ку-лихорадки
3) Характеристика биологических свойств возбудителя и особенности микробиологической диагностики возвратного тифа
4) Характеристика биологических свойств возбудителя и особенности микробиологической диагностики клещевого боррелиоза (болезни Лайма)
5) Характеристика биологических свойств и особенности микробиологической диагностики сифилиса
6) Характеристика биологических свойств и особенности микробиологической диагностики гонореи
7) Характеристика биологических свойств и особенности микробиологической диагностики трихомоноза
8) Характеристика биологических свойств и особенности микробиологической диагностики урогенитального хламидиоза
9) Характеристика биологических свойств и особенности микробиологической диагностики урогенитального микоплазмоза
10) Характеристика биологических свойств и особенности микробиологической диагностики кандидоза
11) Характеристика биологических свойств и особенности микробиологической диагностики дерматомикозов (Асhorion sp., Epidermophyton sp., Trichophyton sp.)
12) Характеристика биологических свойств и особенности микробиологической диагностики актиномикоза