Лабораторная работа. Количественное определение креатина в моче.

Ход работы: В три пробирки внести по 0,2 мл 37% раствора соляной кислоты, в 1-ю и 2-ю пробирки добавить по 0,2 мл исследуемой мочи, разбавленной в 5 раз дистиллированной водой. Смесь в пробирке 2-й нагреть 3 мин на кипящей водяной бане, затем охладить. Во все три пробирки внести по 0,6 мл насыщенного р-ра пикриновой кислоты и по 1мл 12,5% раствора едкого натрия. Инкубировать 10 мин при комнатной температуре, добавить по 6 мл воды.

Растворы колориметрировать против контроля (пробирка 3-я) в кювете с рабочим слоем 10 мм (фильтр зеленый). Ниже в таблице приведены данные для построения калибровочной кривой, полученные в опытах со стандартным раствором креатинина.

Концентрация стандартных растворов креатинина, мг\мл	Оптическая плотность, экстинция
0,08	0,05
1,0	0,10
1,2	0,20
1,4	0,30
1,6	0,40
1,8	0,50
2,0	0,60

На основании этих данных построить график зависимости оптической плотности от концентрации растворов креатинина и с помощью графика определите содержание креатинина в исследуемой пробе:

Пробирка 1-ая – содержание креатинина;

Пробирка 2-ая – содержание креатинина + креатина.

По разнице между пробами 1-й и 2-й можно рассчитать содержание креатина.

Полученные результаты сравните с нормальными показателями. Может ли служить показателем патологии мышц изменение содержания креатина, креатинина в моче? Ответ аргументировать.

Самостоятельно выполните следующие задания:

1. В постабсорбтивный период уровень глюкозы в крови снижается. Какова роль печени в поддержании нормогликемии в этой ситуации? Ответ проиллюстрируйте схематичным изображением конкретного молекулярного механизма.

2.В период длительного голодания для поддержания нормогликемии в печени интенсивно протекает глюконеогенез. Чем обьяснить в этой ситуации увеличение скорости мочевинообразования в печени?

3. Какова роль печени в желчеобразовании? Назовите субстрат и фермент образования желчных кислот.

4. В абсорбтивный период (рост уровня инсулина) в печени активно идет синтез холестерина. Назовите основные соединения, которые снижают активность регуляторного фермента синтеза холестерина (гидроксиметилглютарил-КоА-редуктазы).

Какова роль печени в выведении холестерина из организма?

5. Назовите процессы в печени, которые могут нарушаться при дефиците липотропных факторов. Назовите патологический процесс, который является следствием этих нарушений.

6. При длительном углеводном голодании возможно истощение буферных оснований крови. Какова роль печени в развитии этого эффекта? Опишите молекулярный механизм.

7. Печень часто называют – «орган-альтруист», т.к. в печени образуются жизненнонеобходимые соединения, которые печень синтезирует на экспорт. Назовите эти вещества и вспомните их значение.

8. Используя таблицу №24 «Клинико-биохимическая характеристика желтух» ( кН.:«Биохимия для врача» стр. 259), проверьте свои знания по биохимическим показателям крови, мочи кала в норме при желтухе.

9. Изменится ли активность аланинаминотрансферазы сыворотки крови при остром инфекционном поражении печени. Вспомните место этого фермента в метаболизме. С какой целью определяют активность АСТ и АЛТ в биохимических лабораториях лечебных учреждений?

10. Определите понятие «диспротеинемия». Какова возможная причина этого состояния? С помощью какова теста можно обнаружить диспротеинемию?

11. Поверьте свои знания: При продолжительной мышечной работе:

а. Повышается уровень инсулина в крови; б. Ускоряется глюконеогенез из лактата в печени; в. Ускоряется глюконеогенез из глицерина в печени; г. В мышцах происходит распад гликогена; д. В печени происходит распад гликогена.

12. В клетках скелетных мышц при выполнении срочной физической работы происходит:

а. Повышение проницаемости мембран клеток для глюкозы под влиянием инсулина;

б. Распад цАМФ, катализируемый фосфодиэстеразой;

в. Активация гликогенфосфорилазы путем ее фофсфорилирования;

г. Переход гликогенфосфорилазы в неактивную форму путем фосфорилирования;

д. Активация аденилатциклазы в клетке.

13. Потребность мышцы в АТФ при сокращении может возрасти примерно в 1000 раз (запаса АТФ в клетке хватит на 0,5 с работы). В этом случае потребление кислорода отстает от потребности в АТФ и ее поставщиком становится гликолиз. Какой продукт является аллостерическим активатором гликолиза, через какой фермент реализуется его действие?

13. Почему при гипоксии возникает регидность мышц?

14. Креатинин обнаруживается в слюне человека, причем его количество коррелирует с содержанием в крови. Обьясните какую роль играет его непосредственный предшественник в организме. Для этого:

а. Назовите это соединение, назовите его химическую природу, место синтеза и функции.;

б. Назовите для каких целей определяют содержание креатина и креатинина в крови и моче.