В условиях введения перфторана
Андреева С.Д.
ФГБОУ ВО Вятская ГСХА, г. Киров, Россия
Актуальность исследования. В лечении деструктивных форм острого панкреатита совершенствуется программа инфузионно-трансфузионной терапии, унифицируется хирургическая тактика. При этом увеличивается число деструктивных форм заболевания, которые составляют от 15 до 35%. Летальность при остром деструктивном панкреатите (ОДП) колеблется от 6 до 26%, достигая 50-85% при инфицированном панкреонекрозе (Савельев В.С. с соавт., 2005; Нестеренко Ю.А. с соавт., 2004)
Таким образом, разработка и внедрение в клиническую практику новых, патогенетически обоснованных методов лечения является актуальной задачей. В этой связи представляет интерес Перфторан, препарат класса перфторуглеродных эмульсий, которые относятся к кровозамещающим средствам и, как показало исследование их свойств, обладают полифункциональным действием. Изучение Перфторана – отечественного кровезаменителя этого класса, разрешенного к клиническому применению, – выявило у него газотранспортные, противоишемические, детоксицирующие свойства, иммуномодулирующее действие, способность к стимуляции процессов репаративной регенерации (Иваницкий Г.Р., Воробьев С.И., 1996-2001 гг. и др.), что обусловило целесообразность изучения эффективности его применения при ОДП.
Цель исследования - оценить гистоструктуру поджелудочной железы при экспериментальном остром деструктивном панкреатите и в условиях введения Перфторана.
Материалы и методы. Эксперимент проводился на 55 белых беспородных половозрелых крысах-самцах весом 180-230 г. Контрольную группу составили 5 животных, 25 крысам панкреатит моделировали путем охлаждения селезеночного сегмента поджелудочной железы хлорэтилом по А.С. Канаяну (1985). Крысам опытной группы (25 крыс) Перфторан вводился пятикратно внутрибрюшинно из расчета 0,3 мл на 100 г веса: сразу после вызванного ОДП, на 1-е, 2-е, 3-и, 4-е сутки. Выведение животных из эксперимента проводилось согласно «Правилам проведения работ с использованием экспериментальных животных». Аутопсия поджелудочной железы при ОДП без применения и с использованием Перфторана осуществлялась через 1 час, на 1-е, 3-и, 7-е и 14-е сутки.
Результаты исследований. При гистологическом исследовании поджелудочной железы с ОДП через 1 час были обнаружены следующие изменения: мелкие, местами более крупные очаги некроза паренхимы без демаркационного воспаления. В прилежащих участках – тяжелая белковая дистрофия ацинарных элементов, междольковый отек. Островки Лангерганса визуально изменены не были. Через сутки в пораженной части органа выявлялись участки коагуляционного некроза, инфильтрированные лейкоцитами. В прилежащей к ним ткани железы клетки эпителия ацинусов были в состоянии различной степени выраженности белковой дистрофии вплоть до некробиоза, строма отечна. В парапанкреальной клетчатке имелась лимфоидная инфильтрация. В интактной части поджелудочной железы некрозы отсутствовали, выявлялась лишь слабовыраженная дистрофия ацинусов, полнокровие сосудов и резкий отек стромы. К третьим суткам в пораженной части некроз паренхимы приобретал тотальный характер, отмечалась слабо выраженная воспалительная реакция по ходу междольковых септ. В непораженной части наблюдалась «зернистая дистрофия» ациноцитов, просвет ацинусов был резко сужен. В отдельных участках по междольковым септам выявлялось скопление клеток воспалительного инфильтрата (лейкоциты, лимфоциты). Сосуды были расширены, полнокровны, с отеком междольковой стромы. На 7-е сутки в пораженной части органа выявлялись обширные участки грануляционной ткани, вокруг которых имелись диффузно расположенные лимфоидные инфильтраты с выраженным сосудистым полнокровием и переваскулярными кровоизлияниями. Неизмененные участки паренхимы были в виде небольших «островков» с набухшим эпителием ацинусов («зернистая дистрофия»). В интактной части имелась слабо выраженная белковая дистрофия ациноцитов, отек стромы. К 14-м суткам в пораженной части отмечалась выраженная белковая дистрофия эпителия ацинусов, очаги микронекрозов паренхимы, отечность стромы и полнокровие сосудов. В интерстиции – очаги скопления лимфоцитов и полиморфно-ядерных лимфоцитов (ПЯЛ), а в парапанкреальной клетчатке только лимфоцитов.
На 1-е сутки в пораженной части поджелудочной железы в условиях применения Перфторана выявлялись мелкие фокусы некрозов, умеренно инфильтрированных ПЯЛ с примесью лимфоцитов, а в прилежащих участках – дистрофические и некробиотические изменения эпителия ацинусов. В сосудах обнаружено умеренно выраженное полнокровие с очагами диапедезных кровоизлияний и резко выраженный отек стромы. Островки Лангерганса визуально не были изменены. В интактной части эпителий ацинусов находился в состоянии «зернистой дистрофии», имелся отек стромы с умеренным полнокровием сосудов. На 3-и сутки в пораженной части органа обнаружен некробиоз паренхимы с единичными «сохранными участками». В этих участках ациноциты были с проявлениями белковой дистрофии. В парапанкреальной клетчатке отмечалась обильная диффузная инфильтрация ПЯЛ с полнокровными сосудами. В отдельных микропрепаратах некробиоз ациноцитов отсутствовал. В интактной части эпителий ацинусов находился в состоянии белковой дистрофии, междольковые септы с наличием фибробластов и моноцитов. В парапанкреальной клетчатке имелись диффузно-очаговые скопления лимфоцитов и ПЯЛ с единичными эозинофилами и полнокровными сосудами. В поджелудочной железе строма была умеренно отечной. К 7-м суткам участки некроза стали четко отграничены от окружающих тканей валом демаркационного воспаления. В прилежащей к ним ткани железы отмечались инфильтрация междольковых перегородок ПЯЛ, лимфоциты с примесью макрофагов, умеренно выраженный отек стромы и полнокровие сосудов. В отдельных препаратах в парапанкреальной клетчатке имелись мелкие фокусы лимфолейкоцитарной инфильтрации.
Рисунок 1 - Некроз паренхимы поджелудочной железы крысы, лимфоцитарная инфильтрация. ОДП, 7-е сутки. Окраска гематоксилином и эозином. х 200
В интактной части имелся слабовыраженный отек стромы. На 14-е сутки в препаратах обнаруживались участки сохранной паренхимы с участками замещения паренхимы грануляционной тканью. В интактной части органа гистологическая картина не отличалась от нормы.
При ОДП в экзокринной паренхиме поджелудочной железы к третьим суткам наблюдаются следующие изменения. Размер ядра ациноцита увеличивается в среднем на 7,14% по сравнению с нормой. Объём цитоплазмы резко уменьшается на 17,2%. Данные изменения приводят к увеличению ядерно-цитоплазматическое отношение (ЯЦО) на 41,18%, и он соответственно равен 0,62. К седьмым суткам состояние ациноцитов внешне несколько нормализуется, о чём свидетельствует минимальное отклонение от нормы размеров ядра (средний размер ядер увеличен на 1,1%) и нормализация объёма цитоплазмы (объём цитоплазмы в среднем на 8,83% ниже нормы). Однако наблюдаемые изменения не являются тенденцией к нормализации состояния клетки, так как к 14 суткам эксперимента ЯЦО всё ещё резко повышен и составляет 0,65 (преимущественно за счёт резкого уменьшения объёма цитоплазмы в клетке – отклонение от нормы составляет 22,3%).
Использование Перфторана при лечении ОДП приводит к следующим изменениям в экзокринной паренхиме поджелудочной железы на клеточном уровне: размер ядра ациноцита уменьшается в среднем на 10,38%, объём цитоплазмы снижается в среднем на 7,31%, ядерно-цитоплазматическое отношение при этом равняется 0,52. На третьи сутки наблюдаем резкое снижение ЯЦО (до 0,29) за счёт резкого увеличения объёма цитоплазмы (по сравнению с интактными животными объём увеличен в среднем на 33,95%). На седьмые сутки лечения Перфтораном наблюдается динамика в сторону нормализации состояния клетки (размер ядра меньше нормального на 6,6%, объём цитоплазмы превышает норму на 24,51%, ЯЦО, таким образом, в среднем равен 0,34). На четырнадцатые сутки размер ядра ациноцита выше контрольного на 6,1%, объём цитоплазмы превышает норму на 7,8%, однако ЯЦО равен таковому у интактных крыс и составляет 0,44, что свидетельствует о нормализации процессов жизнедеятельности ациноцита на фоне компенсаторных изменений внутри отдельных компонентов клетки.
Данные изменения при лечении Перфтораном на 3 и 7 сутки эксперимента обусловлены увеличением объёма микроциркуляторного русла экзокринной паренхимы по сравнению с состоянием поджелудочной железы в этот же период, но без лечения. На третьи сутки применения Перфторана коэффициент ядерно-плазматического отношения увеличен на 43,3% по сравнению с паренхимой без лечения, на седьмые сутки этот показатель составляет 51,9%. На 14 сутки эксперимента изменения ядерно-цитоплазматического отношения ациноцитов по сравнению с нормой минимальны как в случае применения Перфторана, так и без него.
Вывод. Введение Перфторана способствует более быстрому восстановлению структуры поджелудочной железы у крыс с экспериментальным ОДП по сравнению с животными контрольной и экспериментальной группы с ОДП без лечения, что свидетельствует о стимуляции репаративной регенерации паренхимы поджелудочной железы при экспериментальном панкреатите.
Литература
1. Руководство по неотложной хирургии органов брюшной полости / Под редакцией В. С. Савельева. - М.: Триада-Х, 2005. - 640 с.
2. Нестеренко, Ю.А., Лаптев, В.В., Михайлусов, С.В. Диагностика и лечение деструктивного панкреатита. – М.: Бином-пресс, 2004. - 304 с.
3. Иваницкий, Г.Р., Воробьев, С.И. Кровезаменитель Перфторан // Вестн. РАН. – 1997. - №67 (11). - С. 998-1008.
4. Иваницкий, Г.Р. Биофизика на пороге нового тысячелетия: перфторуглеродные среды и газотранспортные кровезаменители // Биофизика. – 2001. - №46 (1). –С. 5-33.
5. Канаян, А.С. Патологическая анатомия и патогенез панкреатита (экспериментальное исследование): Автореф. дис. … докт. мед. наук. - М., 1985. – 25 с.
УДК 619:616.37-002