Химические тесты для выявления желчных пигментов

К наиболее широко применяемым химическим тестам для определения желч­ных пигментов в сыворотке относится реакция Ван-ден-Берга. При этой реакции пигменты билирубина под воздействием сульфаниловой кислоты теряют азот, хромогенные продукты определяются калориметрически. С помощью реакции Ван-ден-Берга можно отличить непрямой билирубин от прямого в связи с раз­ной растворимостью этих пигментов. Если реакция происходит в водной среде, то реагирует только водорастворимый прямой билирубин (так назы­ваемая прямая реакция Ван-ден-Берга). Если же она происходит в метанол е, то внутримолекулярные водородные связи непрямого билирубина разрываются; таким образом, реакция как прямого, так и непрямого билирубина позволяет определить его общий уровень. Количество непрямого билирубина можно рассчитать, если из величины, определяющей общее количество билирубина, вычесть величину, определяющую количество билирубина, полученную в прямой реакции Ван-ден-Берга.

При прямой реакции Ван-ден-Берга наиболее точными оказываются резуль­таты, получаемые при продолжительности реакции в 1 мин. Если реакция продолжается дольше, то небольшое количество непрямого билирубина может на­чать реагировать в водной среде. В результате, если реакция продолжается в те­чение 30 мин, то у больного с гипербилирубинемией, обусловленной непрямым билирубином, может быть определен ошибочно низкий уровень непрямого били­рубина. Это свидетельствует о том, что полученные при прямой и непрямой реакциях Ван-ден-Берга значения приблизительны (это не абсолютные значения).

Наиболее точный метод измерения количества билирубина в биологических жидкостях заключается в определении образования метиловых эфиров билиру­бина (щелочной метанолиз) и их концентрации с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Исследования, выполненные с помощью этого метода, показывают, что в норме в плазме содержится преимущественно непрямой билирубин и что лишь менее 4% от общего билирубина приходится на на прямую фракцию. Это подтверждает давно существовавшее мнение о том, что определяемая методом Ван-ден-Берга небольшая величина прямого били­рубина (1—3 мг/л) ошибочна, с помощью этой реакции определяется завышен­ное количество прямого билирубина, фактически содержащегося в плазме в норме. Метод ВЭЖХ также позволяет определить, что у больного с болезнью печени и билирубинемией, обусловленной прямым билирубином, в сыворотке содержится значительное количество как моно-, так и диконъюгатов. Суммарно основные различия в свойствах и реакциях рассмотренных пигмен­тов билирубина представлены в табл. 38-1.

Таблица 38.1. Основные различия между прямым и непрямым билирубином

Свойства и реакции	Непрямой	Прямой
Водорастворимость		+
Сродство с липидами	+
Почечная экскреция		+
Реакция Ван-ден-Берга	Непрямая (общий минус прямой)	Прямая
Связывание (обратимое) с альбуми­ном сыворотки	+++	+
Образование (необратимое) билирубинальбуминового комплекса		+2

¹ Эти свойства относятся к естественно образующемуся билирубину IXa. Другие геомет­рические разновидности и фотоизомеры ведут себя так же, как прямой билнрубин (см. текст).

² Определяемый в плазме в условиях холестаза (см. текст).

Качественное определение билирубина в моче может осуществляться с по­мощью таблеток «Иктотест» или методом ныряющей палочки. Пенный тест также прост и позволяет дать качественную оценку. При энергичном встряхивании нор­мальной мочи в тест-пробирке пена будет совершенно белой, а при содержании в моче билирубина она приобретает желтую окраску. Это различие может быть трудно уловимым и становится очевидным только при непосредственном-сравне­нии образцов нормальной мочи и мочи, в которой содержится билирубин.

За исключением концентрированной мочи самой распространенной причиной ее темно-желто-коричневого окрашивания («темная» моча) бывает билирубинурия. Однако следует учитывать и возможность других механизмов и заболеваний, при которых моча становится темной. К ним относятся желтый цвет мочи в ре­зультате приема лекарственных средств (например, сульфасалазина), красный ее цвет при порфирии, гемоглобин- и миоглобинурии или приеме лекарственных средств (например, пиридина), темно-коричневый или черный цвет, обусловлен­ный присутствием гомогентизиновой кислоты (при охронозе) или меланина (при меланоме).