Работа 9. Обнаружение желчных пигментов в моче

Билирубин обычными методами в нормальной моче не открывается, хотя и может находиться в ней в виде следов. Выделение билирубина с мочой повышается при гипербилирубинемии. В этих случаях качественные пробы на билирубин становятся положительными. Реакции на желчные пигменты основаны на получении окрашенных продуктов окисления билирубина: биливердина (зеленый), билицианина (синий), холетелина (желтый) и др.

В пробирку вносят 1 мл концентрированной азотной кислоты и осторожно из пипетки наслаивают мочу. Реакция называется «проба Гмелина». Она основана на окислении билирубина мочи под влиянием азотной кислоты с примесью азотистой в ряд окрашенных в разные цвета продуктов окисления. При наличии желчных пигментов на границе двух жидкостей появляются зеленое, синее, фиолетовое, красное и желтое кольца в указанной последовательности, что соответствует разным степеням окисления билирубина. Дальше всего от азотной кислоты располагается зеленое кольцо биливердина (наименее окисленный продукт), ближе всего к азотной кислоте — желтое кольцо холетелина (наиболее окисленный продукт).

Контрольные вопросы:

1. Приведите схему образования билирубина в организме.

2. Что такое «прямой» и «непрямой» билирубин?

3. Какие виды желтух приводят к гипербилирубинурии?

4. Как отличить механическую желтуху от гемолитической по анализу крови?

Работа 10. Биохимия костной и соединительной ткани

В состав костной ткани входит вода (50%), органические (28%) и неорганические (22%) вещества. Среди последних большую часть составляет фосфат кальция (85%), в значительно меньших количествах содержатся карбонат кальция (10%), фосфат магния (1,5%) и фторид кальция (0,3%). Неорганические вещества зубной ткани представлены главным образом гидроксиапатитом [Са₃РО₄)₂]₃ • Са(ОН)₂.

Получение вытяжки из костной ткани и зуба.

В колбу помещают 5 г костной ткани, приливают 25 мл 0,5%-ного раствора серной кислоты и оставляют на сутки. Неорганические вещества переходят в раствор. Вытяжку отфильтровывают.

Навеску в 0,5 г зуба помещают в колбу и добавляют 30 мл 10% раствора соляной кислоты, кипятят под тягой. Когда зуб полностью растворится, содержимое колбы охлаждают и отфильтровывают.

2. Открытие ионов кальция. К 2 мл вытяжки добавляют 3 - 4 капли насыщенного раствора оксалата аммония. Выпадает осадок оксалата кальция:

3. Открытие ионов магния. Оксалат кальция, полученный в предыдущем опыте, отделяют фильтрованием. К фильтрату добавляют 3-4 капли концентрированного раствора аммиака, выпадает осадок фосфата магний-аммония:

MgHPO₄ + NH₄OH ® MgNH₄PO₄¯ + H₂O

4. Открытие фосфорной кислоты. К нескольким миллилитрам профильтрованной вытяжки прибавляют 5 - 6 капель молибденового реактива и нагревают до кипения. Медленно образуется желтый кристаллический осадок фосфоромолибдата аммония:

12 (NH₄)₂MoO₄ + H₃PO₄ + 21 HNO₃ ® (NH₄)₂PO₄×12MoO₃ + 21 NH₄NO₃ + 12 H₂O

Контрольные вопросы

1. Какими соединениями представлены минеральные вещества костной ткани?

2. В чем различия биохимического состава дентина, цемента, эмали зубов?

3. Как связан рН слюны с состоянием зубной эмали?

4. Как сказывается недостаток и избыток фтора в питьевой воде на состоянии зубной эмали?

5. Какие гормоны влияют на обмен кальция и фосфора в костной и зубной ткани?

Литература

1. Березов, Т.Т. Биологическая химия. / Т.Т. Березов, Б.Ф. Коровкин. - М.: ОАО "Издательство "Медицина"", 2007. - 704 с.

2. Биохимия. / Под ред. Е.С. Северина. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2003. - 779 с.

3. Биохимия. Краткий курс с упражнениями и задачами. / Под ред. Е.С. Северина, А.Я. Николаева. - М.: ГЭОТАР-МЕД, 2001. - 448 с.

4. Зубаиров, Д.М. Руководство к лабораторным занятиям по биологической химии. / Д.М. Зубаиров, В.Н. Тимербаев, В.С. Давыдов. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2005. - 392 с.

5. Кушманова, О.Б. Руководство к лабораторным занятиям по биологической химии. / О.Б. Кушманова, Г.И. Ивченко. - М. - 1983.

6. Ленинджер, А. Основы биохимии / А. Ленинджер. - М., «Мир». - 1985.

7. Марри, Р. Биохимия человека. / Р. Марри, Д. Греннер, П. Мейес, В. Родуэлл. - Т. 1. - М.: Мир, 1993. - 384 с.

8. Марри, Р. Биохимия человека. / Р. Марри, Д. Греннер, П. Мейес, В. Родуэлл. - Т. 2. - М.: Мир, 1993. - 415 с.

9. Николаев, А.Я. Биологическая химия. / А.Я. Николаев. - М.: Медицинское информационное агентство, 2004. - 566 с.

10. Основы аналитической химии. / Под ред. Ю.А. Золотова. - Кн. 2. - М.: Высшая школа, 1996. - 461 с.

11. Справочник. Лабораторные методы исследования в клинике. / Под редакцией проф. В.В. Меньшикова. - М. Медицина. - 1987.

12. Филиппович, Ю.Б. Основы биохимии. / Ю.Б. Филиппович. - М.: Высшая школа, 1993. - 496 с.

13. Филиппович, Ю.Б. Упражнения и задачи по биологической химии. / Ю.Б. Филиппович, Г.А. Севастьянова, Л.И. Щеголева. - М.: Просвещение, 1986. - 144 с.

14. Филиппович, Ю.Б. Практикум по общей биохимии / Ю.Б. Филиппович и др. - Учеб. пособие. - М.: Просвещение, 1982.

15. Эллиот В, Эллиот Д. Биохимия и молекулярная биология. / В. Эллиот, Д. Эллиот. - М. - 1999.