Учетная и отчетная документация в клинико-диагностической лаборатории. Правила составления и формы отчетов КДЛ.

Учетная и отчетная документация в клинико-диагностической лаборатории. Правила составления и формы отчетов КДЛ.

Правила составления годовых отчетов, схема отчетов

Отчет заведующего КДЛ за год должен быть аналитическим и отражать:

– штатный состав лаборатории;

– количество выполненных анализов за год по общеклиническим, гематологическим, биохимическим, изосерологическим, бактериологическим исследованиям и др.;

– динамику количества исследований по годам;

– достижения лаборатории за год;

– недостатки в работе;

– повышение квалификации персонала;

– проблемы;

– предложения по улучшению качества работы;

– выводы.

При перечислении количества выполненных исследований за год целесообразно давать не только абсолютные показатели, но и относительные в процентах от предыдущего года. Затем, обычно в виде таблицы, показывается динамика основных показателей лаборатории за 3-4 последних года.

В таблице кроме количества анализов необходимо отразить нагрузку на одного больного. Затем дается описание таблицы и приводится сравнительная характеристика показателей в сравнении с прошлыми годами.

После описания и характеристики количества исследований необходимо отразить работу дежурной службы и, при необходимости, дать отдельно динамику некоторых показателей, например, определение глюкозы крови.

Далее в отчете необходимо провести подробный анализ деятельности всей лаборатории за год отдельно по службам с отражением своего мнения.

Достижения включают в себя:

– внедрение новых аппаратов и методик;

– научную организацию труда;

– реорганизацию работы и т.п.

Затем даются сведения о повышении квалификации фельдшерами-лаборантами и врачами-лаборантами, присвоение категорий за прошедший год.

Следует акцентировать внимание на проблемах, и, прежде всего на тех обстоятельствах, которые мешают успешному выполнению работы (неисправная аппаратура, плохие реагенты, неправильная организация работы и др.).

Отчет завершается основными выводами и предложениями.

Нормативные акты, регламентирующие деятельность лабораторной службы.

ПРИКАЗЫ И ПОСТАНОВЛЕНИЯ МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ И ДРУГИЕ НОРМАТИВНЫЕ ДОКУМЕНТЫ, РЕГУЛИРУЮЩИЕ ДЕЯТЕЛЬНОСТЬ КЛИНИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРНОЙ СЛУЖБЫ

Приказ МЗ РБ от 28.09.2007 г. № 787 «Об утверждении форм первичной медицинской документации по лабораторной диагностике».

Постановление МЗ РБ от 13 февраля 2008 г. № 35 «Об утверждении прейскуранта на услуги по лабораторной диагностике».

Приказ МЗ РБ № 297 от 24.04.2007 г. «О проведении VII съезда специалистов по клинической лабораторной диагностике Республики Беларусь».

ПРИЛОЖЕНИЕ № 1 Приказ МЗ РБ №787 от 28.09.2007 г.

Перечень документов, наличие которых обязательно для выполнения работ в клинико-диагностической лаборатории

1. Паспорт клинико-диагностической лаборатории, состоящий из титульного листа и следующих форм (таблиц):

1. Перечень выполняемых в КДЛ исследований.

2. Сведения об имеющихся средствах измерения (аппаратуре).

3. Сведения об имеющемся вспомогательном оборудовании.

4. Сведения об имеющихся стандартных контрольных материалах.

5. Сведения о мерной посуде, применяемой в клинико-диагностической лаборатории.

6. Сведения о штатном обеспечении и кадровом составе КДЛ.

7. Сведения о помещениях клинико-диагностической лаборатории.

Таблицы паспорта составляются по формам, предложенным при подготовке документации к аккредитации лабораторий, с некоторыми дополнениями.

В таблице 1 «Перечень выполняемых в КДЛ исследований» в графе 2 указывается вместе с наименованием исследования применяемый метод.

Таблица 6 («Сведения о штатном обеспечении и кадровом составе клинико-диагностической лаборатории») дополняется таблицей о штатном обеспечении, включающей графы:

– количество штатных должностей;

– количество занятых должностей;

– количество физических лиц, в том числе имеющих вторую, первую и высшую категорию,

– количество фельдшеров-лаборантов (лаборантов).

Журнал учета спирта.

АПТЕЧКА ДЛЯ ОКАЗАНИЯ ЭКСТРЕННОЙ МЕД.ПОМОЩИ ПРИ АВАРИЙНОЙ СИТУАЦИИ

· напальчники (или перчатки),лейкопластырь,ножницы,70% этиловый спирт,20-30% р-р альбуцида,5% н-ка йода

· 3% Н2О2,мешок пластиковый для сбора загрязненной одежды,инструкция

Электрофорез в медицине (физиотерапии). Лечебное вещество наносится на прокладки электродов и под действием электрического поля проникает в организм через кожные покровы (в терапии, неврологии, травматологии и др.) или слизистые оболочки (в стоматологии, ЛОР, гинекологии и др.) и влияет на физиологические и патологические процессы непосредственно в месте введения. Электрический ток также оказывает нервно-рефлекторное и гуморальное действие.

Преимущества лечебного электрофореза:

· введение малых, но достаточно эффективных доз действующего вещества;

· накопление вещества и создание депо, пролонгированность действия;

· введение в наиболее химически активной форме — в виде ионов;

· возможность создания высокой местной концентрации действующего вещества без насыщения им лимфы, крови и других сред организма;

· возможность введения вещества непосредственно в очаги воспаления, блокированные в результате нарушения локальной микроциркуляции ;

· лечебное вещество не разрушается, как например, при введении per os;

· слабый электрический ток благоприятно влияет на реактивность и иммунобиологический статус тканей.

Противопоказания к проведению электрофореза: острые гнойные воспалительные заболевания, СН II-III степени, ГБ III стадии, лихорадка, тяжелая форма бронхиальной астмы, дерматит или нарушение целостности кожи в местах наложения электродов, злокачественные новообразования. Учитываются противопоказания для лечебного вещества. Вещества, используемые при электрофорезе, по способу введения разделяются на:

· отрицательно заряженные, вводимые с отрицательного полюса - катода (бромиды, йодиды, никотиновая кислота и другие)

· положительно заряженные, вводимые с положительного полюса - анода (ионы металлов - магний, калия, кальция)

· вводимые как с анода, так и с катода (гумизоль, бишофит и другие).

Преимущество бишофита - в биполярном введении, т.к. эффект оказывают одновременно и положительно, и отрицательно заряженные ионы. При назначении семейным врачом лечебного электрофореза при направлении в отделение медицинской реабилитации целесообразно указывать: диагноз, название метода (электрофорез), желаемое лечебное вещество и зоны его воздействия. Физиотерапевт определяет полярность, силу тока, продолжительность в минутах, кратность процедур.

Электрофорез в научных исследованиях. В биохимии и молекулярной биологии электрофорез используется для разделения макромолекул — белков и нуклеиновых кислот (а также их фрагментов). Различают множество разновидностей этого метода (см. статью Электрофорез белков). Этот метод находит широчайшее применение для разделения смесей биомолекул на фракции или индивидуальные вещества и используется в биохимии, молекулярной биологии, клинической диагностике, популяционной биологии (для изучения генетической изменчивости) и др.

Электрофорез - это один из видов направленных движений заряженных частиц коллоидных систем в жидкой среде под действием внешнего электрического поля.

Иммунохимическое тестирование: основы, аналитические характеристики, технологические принципы, сфера применения. Иммунохимические методы на основе диффузии и электрофореза: радиальная иммунодиффузия, ракетный иммуноэлектрофорез, встречный иммуноэлектрофорез.

Серологические реакции: реакция преципитации, реакция агглютинации, реакция связывания комплемента, реакция пассивной гемагглютинации: принципы методов, аналитические характеристики, клиническое применение.

Иммунологические методы исследования - диагностические методы исследования, основанные на специфическом взаимодействии антигенов и антител. Широко используются для лабораторной диагностики инфекционных и паразитарных болезней, определения групп крови, тканевых и опухолевых антигенов, видовой принадлежности белка, распознавания аллергии и аутоиммунных болезней, беременности, гормональных нарушений, а также в научно-исследовательской работе. Они включают серологические исследования, или серологические реакции, к которым относят обычно реакции прямого воздействия антигенов и антител сыворотки крови in vitro.

Иммунологические методы применяют для решения многих задач:

1.Оценка состояния иммунной системы человека (иммунного статуса) по определению количественных и функциональных характеристик клеток иммунной системы и их продуктов.

2. Определение состава и характеристик тканей человека: групп крови, резус фактора, трансплантационных антигенов.

3. Диагностика инфекционных болезней и резистентности к ним по обнаружению и установлению титров антител (серодиагностика), выявлению антигенов возбудителей в организме, определению клеточных реакций на эти антигены.

4. Сероидентификация культур бактерий и вирусов, выделенных из организма человека и животных.

5. Выявление в организме человека и во внешней среде любых веществ, обладающих антигенными или гаптенными свойствами (гормоны, ферменты, яды, лекарства, наркотики и т.п.).

6. Выявление иммунопатологических состояний, аллергий, трансплантационных и противоопухолевых реакций.

В основе иммунологических методов лежат серологические реакции, для постановки которых используют сыворотку (serum), содержащую антитела (основаны на взаимодействии антигенов и антител) и клеточные реакции, базирующиеся на взаимодействии антигенов (аллергенов) с Т-клетками. Серологические реакции могут быть прямыми (двухкомпонентными) — агглютинация, пассивная гемагглютинация, преципитация и др., и косвенными (трёхкомпонентными) — реакция нейтрализации (например, микроба), реакция торможения гемагглютинации. Из нескольких «простых» складываются сложные серологические реакции: бактериолиз, реакция связывания комплемента и др. Распространены также иммунофлюоресцентные методы, основанные на окраске антител (антигенами) флюорохромами. Особый вид серологических реакций — выявление иммобилизации подвижных форм микроорганизмов (например, реакция иммобилизации бледных трепонем при сифилисе). Некоторые серологические исследования проводят не в пробирке, а непосредственно в организме экспериментальных животных.

Серологические реакции различаются по способности выявлять отдельные классы антител. Реакция агглютинации, например, хорошо выявляет lgM-антитела, но менее чувствительна для определения lgG-антител. Реакции связывания комплемента и гемолиза, которые требуют участия комплемента, не выявляют антитела, не присоединяющие комплемент, например lgA-антитела и lgE-антитела. В реакции нейтрализации вирусов участвуют лишь антитела, направленные против антигенных детерминант поверхности вириона, связанных с патогенностью. Чувствительность И. м. и. превосходит все другие методы исследования антигенов и антител, в частности радиоиммунный и иммуноферментный анализы позволяют улавливать присутствие белка в количествах, измеряемых в нанограммах и даже в пикограммах. С помощью И. м. и. определяют группу и проверяют безопасность крови (гепатит В и ВИЧ-инфекция). При трансплантации тканей и органов И. м. и. позволяют определять совместимость тканей и тестировать методы подавления несовместимости. В судебной медицине используют реакцию Кастеллани для определения видовой специфичности белка и реакцию агглютинации для определения группы крови.

Иммунологические методы широко применяют в лабораторной диагностике инфекционных болезней. Этиологию заболевания устанавливают также на основании прироста антител к возбудителю в сыворотке крови реконвалесцента по сравнению с пробой, взятой в первые дни болезни. На основе И. м. и. изучают иммунитет населения по отношению к массовым инфекциям, например к гриппу, а также оценивают эффективность профилактических прививок.

Развитию иммунологических методов способствовало создание моноклональных антител, продуцируемых гибридомой, полученной в результате слияния иммунокомпетентной клетки В-лимфоцита и клетки миеломы мышей. Моноклональные антитела несут только одну химически однородную популяцию антител, комплементарную специфической детерминанте антигена, что позволяет осуществлять тонкую дифференциацию белков. Развитие И. м. и. идет как по линии совершенствования реагентов (чистоты антигенов и антител), так и по линии создания автоматизированных систем постановки реакций и их инструментального учета.

В зависимости от их механизма и учета результатов И. м. и. можно подразделить на реакции, основанные на феномене агглютинации; реакции, основанные на феномене преципитации; реакции с участием комплемента; реакция нейтрализации; реакции с использованием химических и физических методов.

Серологические исследования (лат. serum сыворотка + logos учение) - методы изучения определенных антител или антигенов в сыворотке крови больных, а также выявления антигенов микробов или тканей с целью их идентификации, основанные на реакциях иммунитета. Обнаружение в сыворотке крови больного антител к возбудителю инф. болезни или соответствующего антигена позволяет установить этиол. фактор заболевания. При выделении микроорганизма от больного проводится идентификация возбудителя путем изучения его антигенных свойств с помощью иммунной диагностической сыворотки (так наз. серологическая идентификация микроорганизмов). С. и. применяют также для определения антигенов различных веществ, групп крови, тканевых антигенов и уровня гуморального звена иммунитета. Для выявления иммунных комплексов, образовавшихся при взаимодействии антиген-антитело, используют различные методы (серол. реакции). Различают реакции агглютинации, преципитации, нейтрализации, реакции с участием комплемента, с использованием меченых антител и антигенов.

Реакции aгглютинации - простые по постановке реакции склеивания корпускулярных антигенов (микробов, эритроцитов и других клеток, а также индифферентных корпускулярных частиц с адсорбированными на них антигенами) с помощью антител. Их используют для определения антител в сыворотке крови больных, напр. при брюшном тифе и паратифах (реакция Видаля), бруцеллезе (реакция Райта, Хаддлсона), туляремии и других инф. болезнях, а также для определения возбудителя, выделенного от больного. Для выявления антител к разведениям сыворотки крови больного добавляют взвесь убитых микробов (диагностикум) и через определенное время при t° 35е отмечают наибольшее разведение (т. е. титр) сыворотки, при к-ром произошла агглютинация.

Реакция пассивной, или непрямой, гемагглютинации основана на использовании эритроцитов с адсорбированными на их поверхности антигенами или антителами, взаимодействие к-рых с соответствующими антителами или антигенами сыворотки крови больных вызывает выпадение эритроцитов на дне пробирки в виде фестончатого осадка. Реакция применяется в диагностике инф. болезней, для определения гонадотропного гормона в моче при установлении беременности, для выявления повышенной чувствительности больного к лекарственным препаратам и гормонам.

Реакция торможения гемагглютинации основана на способности антител иммунной сыворотки нейтрализовать вирусы, к-рые в результате этого процесса теряют свойство агглютинировать эритроциты. Реакция применяется в диагностике многих вирусных болезней, возбудители к-рых (вирусы гриппа, кори, краснухи, клещевого энцефалита и др.) могут агглютинировать эритроциты различных животных.

Реакция агглютинации используется также для определения групп крови и резус-фактора. Антитела против резус-фактора эритроцитов являются неполными, поэтому, связываясь с эритроцитами, эти антитела не могут их агглютинировать. Для их выявления дополнительно в реакцию вводят антиглобулиновую сыворотку, содержащую антитела против иммуноглобулинов человека (реакция Кумбса). Антитела антиглобулиновой сыворотки, взаимодействуя с неполными антителами против резус-фактора, адсорбированными на эритроцитах, агглютинируют эритроциты. С помощью реакции Кумбса выявляют как антирезусные антитела, так и резус-фактор; диагностируют гемолитическую болезнь новорожденных, эритроциты к-рых соединяются с циркулирующими в крови неполными антителами против резус-фактора.

Разновидностью реакции агглютинации является коагглютинация- реакция, в к-рой антигены возбудителя определяют с помощью стафилококков, предварительно обработанных иммунной диагностической сывороткой. Стафилококки, содержащие протеин А., неспецифически адсорбируют антимикробные антитела, к-рые взаимодействуют активными центрами с соответствующими микробами, выделенными от больных. В результате коагглютинации происходит образование хлопьев, состоящих из стафилококков, антител диагностической сыворотки и определяемого микроба.

Реакции преципитации - осаждение комплекса антиген-антитело, образующегося в результате соединения растворимого антигена со специфическими антителами. Осадок комплекса антиген-антитело называется преципитатом. Реакцию ставят в пробирке путем нанесения (наслоения) раствора антигена на иммунную сыворотку. При оптимальном соотношении антиген-антитело на границе этих растворов образуется непрозрачное кольцо преципитата (реакция кольцепреципитации). Широкое распространение получила реакция преципитации в полужидком геле агара или агарозы - двойная иммунодиффузия по Оухтерлоню, радиальная иммунодиффузия, иммуноэлектрофорез и др. Для постановки иммунодиффузии по Оухтерлоню растопленный агаровый гель выливают тонким слоем на стеклянную пластинку и после затвердевания геля в нем вырезают лунки размером 2-3 мм. В противоположные лунки раздельно помещают антигены и иммунные сыворотки, к-рые, диффундируя в агар, образуют в месте встречи преципитат в виде белой полосы. В реакции радиальной иммунодиффузии иммунную сыворотку вносят в агаровый гель. В лунки геля помещают раствор антигена, к-рый, диффундируя в гель, образует кольцевые зоны преципитации вокруг лунок. Диаметр кольца преципитации пропорционален концентрации антигена. Реакцию используют, в частности, для определения содержания в крови иммуноглобулинов различных классов, компонентов системы комплемента. Иммуноэлектрофорез сочетает электрофорез и иммунопреципитацию: смесь антигенов разделяется в геле с помощью электрофореза, затем параллельно зонам электрофореза вносится иммунная сыворотка, антитела к-рой диффундируют в гель и образуют в месте встречи с антигеном линии преципитации. При радиальной иммунодиффузии (по методу Манчини) иммунную сыворотку вносят в агар. Антиген, помещенный в лунки, диффундирует через агар, и в результате преципитации с иммунной сывороткой вокруг лунок образуются непрозрачные кольца, внешний диаметр которых пропорционален концентрации антигена. Метод используют для определения классов иммуноглобулинов, а модификации метода можно применять для определения противомикробных антител, относящихся к различным классам иммуноглобулинов.

Разновидностью иммуноэлектрофореза является радиоиммунофорез В этом случае после электрофоретического разделения антигенов в канавку, вырезанную параллельно движению антигенов в геле, наливают сначала меченную радиоактивным йодом иммунную сыворотку против определяемых антигенов, а затем иммунную сыворотку против lgG-антител, которая преципитирует образовавшиеся комплексы антитела с антигеном. Все несвязавшиеся реагенты вымывают, а комплекс антиген — антитело обнаруживают методом авторадиографии.

Реакция нейтрализации. Реакция нейтрализации основана на способности антител нейтрализовать некоторые специфические функции макромолекулярных или растворимых антигенов, например активность ферментов, токсины бактерий, болезнетворность вирусов. В бактериологии эту реакцию используют для обнаружения антистрептолизинов, антистрептокиназы и антистафилолизинов. Реакцию нейтрализации токсинов можно оценивать по биологическому эффекту, так, например, титруют антистолбнячные и антиботулинические сыворотки. Смесь токсина с антисывороткой, введенная животным, не вызывает их гибели. Различные варианты реакции нейтрализации применяют в вирусологии. При смешивании вирусов с соответствующей антисывороткой и введении этой смеси животным или в клеточные культуры патогенность вирусов нейтрализуется и при этом животные не заболевают, а клетки культур не подвергаются деструкции.

Антитела иммунной сыворотки способны нейтрализовать повреждающее действие микроорганизмов или их токсинов на чувствительные клетки и ткани. Это связано с блокадой микробных антигенов антителами, т. е. их нейтрализацией. Реакцию ставят путем введения смеси антиген-антитело животным или внесения ее в культуру клеток. При отсутствии повреждающего действия микробов или их антигенов, токсинов говорят о нейтрализующем действии иммунной сыворотки и, следовательно, специфичности взаимодействия комплекса антиген-антитело.

Реакции с участием комплемента основаны на активации комплемента в результате присоединения его к антителам, находящимся в комплексе с антигеном (реакции связывания комплемента, радиального гемолиза и др.). Реакция связывания комплемента двухфазная; первая фаза - инкубация смеси искомого антигена (или антитела) с диагностической сывороткой (или антигеном-диагностикумом) и комплементом; вторая фаза - индикаторная - определение наличия в смеси свободного комплемента путем добавления гемолитической системы, состоящей из эритроцитов барана и гемолитической сыворотки, содержащей антитела против эритроцитов барана. В первой фазе реакции при образовании комплекса антиген-антитело происходит связывание им комплемента, во второй фазе гемолиз сенсибилизированных антителами эритроцитов отсутствует (реакция положительная). При отрицательной реакции, если антиген и антитело не соответствуют друг другу, комплемент остается свободным и во второй фазе реакции присоединяется к комплексу эритроцит-антиэритроцитарное антитело гемолитической сыворотки, вызывая гемолиз. Реакция связывания комплемента применяется для диагностики инф. болезней, в частности сифилиса (см. Вассермана реакция).

Реакцию радиального гемолиза ставят в геле агара, содержащем эритроциты барана и комплемент. После внесения в лунки геля гемолитической сыворотки вокруг них в результате радиальной диффузии антител образуется зона гемолиза, размеры к-рой пропорциональны титру сыворотки. Таким образом можно определить активность комплемента и гемолитической сыворотки, а также антитела в сыворотке крови больных гриппом, краснухой, клещевым энцефалитом. Для этого на эритроцитах адсорбируют соответствующие антигены вируса, а в лунки геля с данными эритроцитами добавляют сыворотку крови больного. Противовирусные антитела взаимодействуют с вирусными антигенами, адсорбированными на эритроцитах, после чего к этому комплексу присоединяются компоненты комплемента, вызывая гемолиз. Реакция радиального гемолиза применяется для определении антителообразования.

Иммунное прилипание - реакция, основанная на активации системы комплемента корпускулярными антигенами (бактериями, вирусами), обработанными иммунной сывороткой. В результате образуется активированный третий компонент комплемента (СЗb), к-рый присоединяется к корпускулярному антигену в составе иммунного комплекса. На эритроцитах, тромбоцитах, макрофагах имеются рецепторы для СЗb, благодаря чему при смешивании этих клеток с иммунными комплексами, несущими СЗb, происходят их соединение и агглютинация.

Активация комплемента при наличии антител на поверхности микробов способствует фагоцитозу возбудителей фагоцитами, имеющими рецепторы к СЗb и антителам. Т. о., изучая фагоцитарную реакцию, можно косвенно охарактеризовать активность комплемента и антител.

Реакция с использованием меченых антител или антигенов. Иммунофлюоресценциязаключается в использовании меченных флюорохромом антител, точнее, иммуноглобулиновой фракции антител lgG. Меченное флюорохромом антитело образует с антигеном комплекс антиген — антитело, который становится доступным наблюдению под микроскопом в УФ-лучах, возбуждающих свечение флюорохрома. Реакцию прямой иммунофлюоресценции используют для изучения клеточных антигенов, выявления вируса в зараженных клетках и обнаружения бактерий и риккетсий в мазках. Так, для диагностики бешенства отпечатки кусочков мозга животных, подозреваемых на вирусоносительство, обрабатывают люминесцирующей антирабической сывороткой. При положительном результате в цитоплазме нервных клеток выявляются глыбки ярко-зеленого цвета. На обнаружении антигенов вирусов в клетках отпечатков со слизистой оболочки носа основана экспресс-диагностика гриппа, парагриппа и аденовирусной инфекции.

Более широко применяют метод непрямой иммунофлюоресценции. основанный на выявлении комплекса антиген — антитело с помощью люминесцирующей иммунной сыворотки против lgG-антител и используемой для обнаружения не только антигенов, но и титрования антител. Метод нашел применение в серодиагностике герпеса, цитомегалии, лихорадки Ласса. Препараты с наслоенной исследуемой сывороткой крови помещают в термостат при t° 37° для образования иммунных комплексов, а затем после отмывания несвязавшихся реагентов выявляют эти комплексы меченой люминесцирующей сывороткой против глобулинов человека. Применяя меченые иммунные сыворотки против lgM- или lgG-антител, можно дифференцировать тип антител и обнаруживать ранний иммунный ответ по наличию lgM-антител.

Иммунофлюоресценцию широко используют не только в бактериологии, вирусологии, паразитологии, но и в иммунопатологии для обнаружения антител к тканевым антигенам человека.

Иммуноферментный, или энзим-иммунологический, метод (реакция энзим-меченых антител) - выявление антигенов с помощью соответствующих им антител, конъюгированных с ферментом (пероксидазой хрена или щелочной фосфатазой). После соединения антигена с меченной ферментом иммунной сывороткой добавляют субстрат, к-рый расщепляется ферментом с окрашиванием раствора в желто-коричневый (пероксидаза) или желто-зеленый (фосфатаза) цвет. Наиболее распространен твердофазный иммуноферментный метод. На твердом носителе, напр. в лунках микропанелей, сорбируют антиген. В лунки с адсорбированным антигеном добавляют сыворотку крови больного и затем антиглобулиновую (противочеловеческую) сыворотку, меченную ферментом, и субстрат для фермента. При положительном результате изменяется цвет раствора в лунках. Твердофазный носитель можно сенсибилизировать не только антигеном, но и антителами. Тогда в лунки с сорбированными антителами вносят искомый антиген, добавляют иммунную сыворотку против антигена, меченную ферментом, затем субстрат для фермента. Иммуноферментный метод применяется для диагностики вирусных, бактериальных и паразитарных заболеваний.

Радиоиммунологический метод - количественное определение антител или антигенов, меченных радионуклидом, с применением аналогичных антител или антигенов: напр., искомого антигена с применением иммунной сыворотки и аналогичного антигена, меченного радионуклидом. После их взаимодействия отделяют образовавшийся радиоактивный комплекс антиген-антитело и определяют его радиоактивность по счетчику импульсов: количество меченого антигена, связавшегося с антителами, обратно пропорционально количеству искомого антигена. Широкое распространение получили так наз. прямой и непрямой варианты твердофазного радиоиммунол. метода, при к-рых используют полистироловые плашки с адсорбированными антигенами либо антителами. Метод применяют для выявления антигенов микробов, определения гормонов, ферментов, лекарственных веществ и иммуноглобулинов. Является наиболее чувствительным методом определения антигенов и антител, используется для определения гормонов, лекарственных веществ и антибиотиков, для диагностики бактериальных, вирусных, риккетсиозных, протозойных заболеваний, исследования белков крови, тканевых антигенов.

Иммуногистологические методы предназначены для определения антигенов на поверхности или внутри клетки, например для обнаружения маркеров лимфоцитов и иммунокомплексов при гломерулонефритах и других заболеваниях почек. В этой реакции для выявления антигенов пользуются или иммунофлюоресценцией, или иммуноферментными конъюгатами с пероксидазой. Количество специфических антигенов определяют по интенсивности окрашивания. Иногда используют автоматическую регистрацию с помощью спектрофотометра.

Иммуноблоттингприменяют для выявления антител к отдельным антигенам или «узнавания» антигенов по известным сывороткам. Метод состоит из 3 этапов: разделения биологических макромолекул (например, вируса) на отдельные белки с помощью электрофореза в полиакриламидном геле; переноса разделенных белков из геля на твердую подложку (блот) путем наложения пластины полиакриламидного геля на активированную бумагу или нитроцеллюлозу (электроблоттанг); выявления на подложкеискомых белков с помощью прямой или непрямой иммуноферментной реакции. Как диагностический метод иммуноблоттинг используют при ВИЧ-инфекции. Диагностическую ценность имеет обнаружение антител к одному из белков внешней оболочки вируса.

Серологические исследования применяют также в эпидемиологии и эпизоотологии для выявления источника инфекции, серотипа, путей её передачи, эффективности вакцинации и т. п. Реакция между антигенами и антителами лежит в основе серопрофилактики и серотерапии. Среди основных задач серологии — разработка методов получения специфических диагностических и лечебных сывороток, оценка их активности и выяснение механизма действия.

Хроматография: теоретические основы, принцип метода. Сорбенты и элюенты для хроматографического анализа. Методы проявления хроматограмм. Основные виды хроматографии: адсорбционная, ионообменная, гель-фильтрация, аффинная, ВЭЖХ. Аналитические характеристики, применение в клинике.

Хроматография (от греч. χρώμα — цвет) — метод разделения и анализа смесей веществ, а также изучения физико-химических свойств веществ. Основан на распределении веществ между двумя фазами — неподвижной (твердая фаза или жидкость, связанная на инертном носителе, сорбент) и подвижной (газовая или жидкая фаза, элюент). Название метода связано с первыми экспериментами по хроматографии, в ходе которых разработчик метода Михаил Цвет разделял ярко окрашенные растительные пигменты. Хроматограмма — результат регистрирования зависимости концентрации компонентов на выходе из колонки от времени.

Основные виды хроматографии. В зависимости от природы взаимодействия, обусловливающего распределение компонентов между элюентом и неподвижной фазой, различают следующие основные виды — адсорбционную, распределительную, ионообменную, эксклюзионную (молекулярно-ситовую) и осадочную.

Адсорбционнаяхроматография основана на различии сорбируемости разделяемых веществ адсорбентом (твёрдое тело с развитой поверхностью); распределительнаяхроматография — на разной растворимости компонентов смеси в неподвижной фазе (высококипящая жидкость, нанесённая на твёрдый макропористый носитель) и элюенте (следует иметь в виду, что при распределительном механизме разделения на перемещение зон компонентов частичное влияние оказывает и адсорбционное взаимодействие анализируемых компонентов с твёрдым сорбентом); ионообменнаяхроматография — на различии констант ионообменного равновесия между неподвижной фазой (ионитом) и компонентами разделяемой смеси; эксклюзионная (молекулярно-ситовая)хроматография — на разной проницаемости молекул компонентов в неподвижную фазу (высокопористый неионогенный гель). Эксклюзионная хроматография подразделяется на гель-проникающую (ГПХ), в которой элюент — неводный растворитель, и гель-фильтрацию, где элюент — вода. Осадочная Х, основана на различной способности разделяемых компонентов выпадать в осадок на твёрдой неподвижной фазе.

В соответствии с агрегатным состоянием элюента различают газовую и жидкостную Х. В зависимости от агрегатного состояния неподвижной фазы газовая Хбывает газо-адсорбционной (неподвижная фаза — твёрдый адсорбент) и газожидкостной (неподвижная фаза — жидкость), а жидкостная Х — жидкостно-адсорбционной (или твёрдо-жидкостной) и жидкостно-жидкостной. Последняя, как и газо-жидкостная, является распределительной Х. К твёрдо-жидкостной Х относятся тонкослойная и бумажная.

Различают колоночную и плоскостную Х. В колоночной сорбентом заполняют специальные трубки — колонки, а подвижная фаза движется внутри колонки благодаря перепаду давления. Разновидность колоночной Х — капиллярная, когда тонкий слой сорбента наносится на внутренние стенки капиллярной трубки. Плоскостная Х подразделяется на тонкослойную и бумажную. В тонкослойной Х тонкий слой гранулированного сорбента или пористая плёнка наносится на стеклянную или металлическую пластинки; в случае бумажной Х используют специальную хроматографическую бумагу. В плоскостной Х перемещение подвижной фазы происходит благодаря капиллярным силам.

При хроматографировании возможно изменение по заданной программе температуры, состава элюента, скорости его протекания и др. параметров.

В зависимости от способа перемещения разделяемой смеси вдоль слоя сорбента различают следующие варианты Х: фронтальный, проявительный и вытеснительный. При фронтальном варианте в слой сорбента непрерывно вводится разделяемая смесь, состоящая из газа-носителя и разделяемых компонентов, например 1, 2, 3, 4, которая сама является подвижной фазой. Через некоторое время после начала процесса наименее сорбируемый компонент (например, 1) опережает остальные и выходит в виде зоны чистого вещества раньше всех, а за ним в порядке сорбируемости последовательно располагаются зоны смесей компонентов: 1 + 2, 1 + 2 + 3, 1 + 2 + 3 + 4. При проявительном варианте через слой сорбента непрерывно проходит поток элюента и периодически в слой сорбента вводится разделяемая смесь веществ. Через определённое время происходит деление исходной смеси на чистые вещества, располагающиеся отдельными зонами на сорбенте, между которыми находятся зоны элюента. При вытеснительном варианте в сорбент вводится разделяемая смесь, а затем поток газа-носителя, содержащего вытеснитель (элюент), при движении которого смесь через некоторый период времени разделится на зоны чистых веществ, между которыми окажутся зоны их смеси . Ряд видов Х осуществляется с помощью приборов, называемых хроматографами, в большинстве из которых реализуется проявительный вариант Х.Хроматографы используют для анализа и для препаративного (в т. ч. промышленного) разделения смесей веществ. При анализе разделённые в колонке хроматографа вещества вместе с элюентом попадают через различные промежутки времени в установленное на вых