Методы выявления геликобактеров(Л.И.Аруин.Хронический гастрит.Амстердам,1993,с.298

12а Метод Вартин-Старри

Фиксация в 10% формалине,проводка парафин.

Приготовление растворов:

1.Подкисленная вода-трижды дистиллированной воды 1000 мл

лимонной кислоты 10 г

2.Раствор нитрата серебра:нитрат серебра 2,0 г

подкисленная вода 100,0 мл

Для приготовления 1%-го раствора добавить равный объем подкисленной воды

3.Раствор гидрохинона:гидрохимнон 0,15г

подкисленная вода 100 мл

4.Раствор желатина:особо чистый желатин 10,0 г

подкисленная вода- 200 мл

5.Проявитель: 2% раствор нитрата серебра-1,5 мл

5% раствор желатина -3,75 мл

0,15% раствор гидрохинона -2,0 мл

растворы подогреть до 50-60 град.С,смешать в указанном порядке,использовать немедленно

Окраска:

1.Депарафинированные срезы довести до подкисленной воды

2.1% раствор нитрата серебра при 55-60 град.С-30 мин.

3.Проявитель-3-5 мин(срезы ставновятся коричневыми)

4.Промыть в теплой воде(55-60 град),затем в дистиллированной воде

5.Обезвоживание,просветление,бальзам.

РЕЗУЛЬТАТЫ:Геликобактеры черные,хорошо видна их изогнутая форма,фон-желтовыатый или кориневый

12б 2-й метод Вартин-Старри

1.Депарафинированные срезы помещают в раствор,содержащий 20,0 мл 5 г на л

азотнокислого серебра в ацетатном буфере рН 4 и облучают 1 мин микроволновым

процессором.

2.Без отмывания срезы переносят в свежеприготовленный проявитель(10 20 г на литр азотнокислого серебра + 50 г желатины+14 мл 1,5 г на литр гидрохинона в ацетатном

буфере в ацетатном буфере при рН 4 при 60 град.С,промывают в ацетатном буфере при 60 град.и в дистиллированной воде

3.Фиксируют в 30г на литр тиосульфата натрия

4.Промывают,фиксируют,обезвоживают,заключают в бользам

РЕЗУЛЬТАТЫ:геликобактеры окрашиваются в черный цвет

12в Метод Гимзы:

Растворы:

1 Основной раствор:Краска Гимзы-1,0г,глицерин-54 мл,спирт 96%-84 мл(профильтровать)

2.Рабочий раствор:основной раствор-1,0 мл,дистилл.вода -38,0 мл,0,1% раствор углекислого калия-2,0 мл

ОКРАШИВАНИЕ:

1.Депарафинированные срезы в дистилл.воду на 10-15 мин

2.Рабочий раствор 20 мин

3.Промывка в дистиллир.воде.Обезвоживание,просветление,бальзам

РЕЗУЛЬТАТЫ6геликобактеры окрашиваются в синий цвет

12г Метод с карболовым фуксином:

Реактивы:

Основной фуксин 0,4 г+фенол кристалл. 2,0 г,+абсолютный спирт 4,0 мл,+дистилл.воды 100,0 мл

Окрашивание:

1.Депарафинированные срезы в краситель на 5 мин

2.Ппромыть в проточной воде

3.Промыть в ацетоне

Срезы можно не заключать и просматривать под иммерсией

РЕЗУЛЬТАТЫ:геликобактеры темно-красные

12д Окраска толуидиновым синим:

Реактивы:

Натрия ацетат 1,943 г,натрия барбитурат 2,943 г,дистиллированной воды до 100 мл(основной раствор)

К 10 мл основного раствора добавить 22 мл М:10 раствора соляной кислоты,

18 мл дистиллированной воды и 1 мл 1%-го толуидинового синего О

А-двуосновной ацетат натрия(№ НСО )-9,465 г

дистиллир.воды до 1 л

Б-кислый фосфат калия(КН РО )-9,08

дистилл.воды до 1 л

К 25 мл раствора А добавить 25 мл раствора Б и 1 мл 1% толуидинового синего.

Продолжительность окрашивания 10-15 мин

РЕЗУЛЬТАТЫ:геликобактеры и ядра клеток в т.ч.,ПМЯ лейкоцитов окрашиваются в темно-синий цвет,фон слабый.