Тесты 1 и 2 уровня для оценки звеньев иммунитета

Лабораторное обследование иммунного статуса при подозрении на иммунодефицит должно включать изучение количества и функциональной активности основных компонентов иммунной системы, играющих главную роль в противоинфекционной защите организма. К ним относятся фагоцитарная система, система комплемента, Т- и В-системы иммунитета. Методы, применяемые для оценки функционирования этих систем, условно разделены академиком РАН и РАМН Петровым Р. В. с соавторами на тесты 1-го и 2-го уровней. Тесты 1-го уровня являются ориентировочными и направлены на выявление грубых дефектов в иммунной системе; тесты 2-го уровня являются функциональными и направлены на идентификацию конкретной “поломки” в иммунной системе.

К тестам 1-го уровня для оценки фагоцитоза относится определение:

· абсолютного числа нейтрофилов и моноцитов;

· интенсивности поглощения микробов нейтрофилами и моноцитами;

· способности фагоцитов убивать микробы.

Процесс фагоцитоза состоит из нескольких этапов: хемотаксиса, адгезии, поглощения, дегрануляции, киллинга и разрушения объекта. Их изучение имеет определенную значимость в оценке фагоцитарного процесса, так как существуют иммунодефициты, связанные с наличием поломок практически в каждом этапе. Главным итогом работы нейтрофила и моноцита является киллинг и разрушение микроба, т. е. завершенный фагоцитоз. Для оценки киллинга можно рекомендовать определение образования активных форм кислорода в процессе фагоцитоза. Если нет возможности определять активные формы кислорода с помощью хемолюминесценции, об образовании супероксидного радикала можно судить по восстановлению нитросинего тетрозолия (НСТ-тест). Но в данном случае следует помнить, что киллинг микробов в фагоците осуществляется с помощью как кислородозависимых, так и кислородонезависимых механизмов, т. е. определение активных форм кислорода не дает полной информации об этом процессе.

К тестам 2-го уровня оценки фагоцитоза можно отнести определение:

· интенсивности хемотаксиса фагоцитов;

· экспрессии молекул адгезии (CD11a, CD11b, CD11c, CD18) на

Поверхностной мембране нейтрофилов.

Определение уровня иммуноглобулинов — это по-прежнему важный и надежный метод оценки функции B-системы иммунитета. Его можно считать главным методом диагностики всех форм иммунодефицитов, связанных с нарушением биосинтеза и секреции антител.

К тестам 1-го уровня оценки B-системы иммунитета можно отнести

определение:

· иммуноглобулинов IgG, IgA, IgM в сыворотке крови;

· определение процента и абсолютного количества B-лимфоцитов

(CD19, СD20) в периферической крови.

К тестам 2-го уровня оценки В-системы иммунитета можно отнести определение:

· субклассов иммуноглобулинов, особенно IgG;

· секреторного sIgA;

· иммуноглобулина IgE в сыворотке крови;

· соотношения κ(каппа)- и λ (лямбда)-цепей;

· специфических антител к белковым и полисахаридным антигенам;

· способности лимфоцитов давать пролиферативный ответ на B-(стафилококк, липополисахарид энтеробактерий) и T-B-(митоген лаконоса) митогены.

Определение субклассов IgG представляет определенную диагностическую ценность, так как при нормальном уровне IgG могут быть дефициты по субклассам иммуноглобулинов. У таких людей в ряде случаев наблюдаются иммунодефицитные состояния, проявляющиеся в повышенной инфекционной заболеваемости. Так, IgG2 является субклассом иммуноглобулинаIgG, который преимущественно содержит антитела против полисахаридов инкапсулированных бактерий (Haemophiluls influlenzae, Steptococculs pneulmoniae). Поэтому дефицит, связанный с IgG2, а также с IgA, ведет к повышенной заболеваемости респираторными инфекциями. Нарушения в соотношении субклассов IgA и в соотношении каппа- и лямбда-цепей также могут быть причиной иммунодефицитных состояний. Важную информацию о состоянии гуморального иммунитета дает определение антител к бактериальным белковым и полисахаридным антигенам, так как степень защиты организма от данной конкретной инфекции зависит не от общего уровня иммуноглобулинов, а от количества антител к ее возбудителю. Особенно наглядно демонстрируют это данные, свидетельствующие о том, что развитие хронических синуситов и отитов зависит только от дефицита у таких больных IgG3-антител к Moraxella catarrhalis. Другим наглядным примером важности определения специфических антител могут служить данные, доказывающие, что у лиц, страдающих частыми инфекционными процессами дыхательных путей, при нормальном уровне всех классов иммуноглобулинов существенно понижен титр антител к Haemophiluls influlenzae.

Ценную информацию о состоянии гуморального иммунитета можно получить не только при определении уровня иммуноглобулинов, их субклассов или антител к определенным антигенам, но и путем изучения их функциональных свойств. К ним в первую очередь следует отнести такое свойство антител, как авидностьи аффинность, от которого в значительной степени зависит прочность взаимодействия антител с антигеном. Продукция низкоавидных антител может вести к развитию иммунодефицитного состояния. Так у лиц, часто и длительно страдающих заболеваниями дыхательного тракта, при нормальном уровне иммуноглобулинов, несколько повышенном уровне антител к пептидогликану St.aulreuls, Str.pneulmoniae, Br.catarrhalis, авидность антител к этим микробам существенно снижена. Аналогичные дефекты авидности антител являются принципиальными при непрерывно рецидивирующих формах фурункулеза.

Содержание общего и специфических иммуноглобулина IgE в сыворотке крови позволяет диагносцировать аллергические заболевания, включая определение конкретных аллергенов.

Важным функциональным свойством антител является опсонизирующая активность иммуноглобулинов. Как уже отмечалось, нейтрофил — это центральная фигура в защите организма от внеклеточных микробов. Однако выполнение им этой функции в значительной степени зависит от опсонизирующей активности сыворотки крови, где иммуноглобулинам и комплементу принадлежит ведущая роль .Например, при бактериемии, вызванной грамотрицательными бактериями, способность нейтрофилов к киллингу E.coli снижается. Единственной причиной этого является неспособности сыворотки крови больных к опсонизации, так как добавление к нейтрофилам этих больных сыворотки здоровых доноров полностью восстанавливало способность нейтрофилов к киллингу E.coli.

При оценке B-системы иммунитета целесообразно в качестве тестов 1-го уровня определение числа B-лимфоцитов, а также и уровня иммуноглобулинов. Так как последние являются главным конечным продуктом B-клеток, то это позволяет оценить B-систему иммунитета как с количественной, так и с функциональной стороны. Такой подход пока трудно осуществить в отношении T-системы иммунитета, так как главным конечным продуктом Т-лимфоцитов являются цитокины, а системы для их определения пока еще мало доступны практическим лабораториям клинической иммунологии. Тем не менее оценка функциональной активности T-системы иммунитета представляет задачу исключительной важности, так как она может быть понижена, иногда даже существенно, при нормальном количестве T-клеток и их субпопуляций. Методы оценки функциональной активности T-лимфоцитов достаточно сложны.

К тестам 1-го уровня оценки T-системы иммунитета можно отнести определение:

· общего числа лимфоцитов ;

· процента и абсолютного числа зрелых T-лимфоцитов (CD3) и двух основных их субпопуляций: хелперов (CD4) и цитотоксических лимфоцитов (CD8);

К тестам 2-го уровня для оценки T-системы иммунитета мы относим определение:

· пролиферативного ответа на основные T-митогены: фитогемагглютинин и конканавалин A.

· продукции цитокинов (интерлейкина-2, (ИЛ-2), ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-6, гамма-интерферона, фактора некроза опухоли (ФНО) и др.);

· активационных молекул на поверхностной мембране T-лимфоцитов (CD25, HLA-DR); молекул адгезии (CD11a, CD18);

· пролиферативного ответа на специфические антигены, чаще всего на дифтерийный и столбнячный анатоксины;

· аллергической реакции с помощью кожных тестов с рядом микробных антигенов.

Методом оценки функциональной активности T-лимфоцитов является реакция бласт-трансформации с применением двух основных T-митогенов: фитогемагглютинина (ФГА) и конканавалина А( КонA). Пролиферативный ответ T-лимфоцитов на митогены понижен практически при всех хронических инфекционно-воспалительных процессах, злокачественных заболеваниях, при всех видах иммунодепрессивной терапии, при СПИДе и при всех первичных T-клеточных иммунодефицитах.

Идентификация цитокинов в ряде случаев позволит более точно установить диагноз заболевания и механизм иммунного нарушения. Важным является и определение таких провоспалительных цитокинов, как ФНО-α ,IL -1 и гамма-интерферон. Велика их роль в этиопатогенезе различных острых и хронических воспалительных процессов как инфекционной, так и аутоиммунной природы. Их повышенное образование является главной причиной септического шока. При сепсисе уровень ФНО в крови может достигать 1 нг/мл. Накапливаются данные о роли провоспалительных цитокинов в этиопатогенезе неспецифического язвенного колита, рассеянного склероза, ревматоидного артрита, инсулинзависимого диабета и др.

Важным для иммунодиагностики является изучение экспрессии активационных молекул и молекул адгезии на поверхности T-лимфоцитов. Как указывает само название, идентификация активационных молекул дает важную информацию о степени активации T-клеток. Нарушения экспрессии рецептора для IL-2 наблюдаются при многих злокачественных заболеваниях крови — T-клеточной лейкемии, волосатоклеточной лейкемии, лимфогрануломатозе и др. — и аутоиммунных процессах: ревматоидном артрите, системной красной волчанке, апластической анемии, склеродермии, болезни Крона, саркоидозе, инсулинзависимом диабете и др.

Особым является вопрос о применении кожных проб в диагностике T-клеточных иммунодефицитов. Как уже отмечалось, по рекомендации зарубежных специалистов и в соответствии с рекомендациями экспертов ВОЗ они применяются в качестве скриннирующих тестов для оценки T-системы иммунитета. Это связано с двумя обстоятельствами. Во-первых, кожные пробы — это простейшие и в то же время информативные тесты, позволяющие оценить функциональную активность T-лимфоцитов. Положительные кожные тесты с некоторыми микробными антигенами с большой степенью вероятности позволяют исключить наличие у больного T-клеточного иммунодефицита. Во-вторых, рядом западных фирм разработаны системы для постановки кожных проб, которые включают основные антигены для определения T-клеточного иммунитета. Это позволяет в строго контролируемых условиях оценить функциональную активность T-системы иммунитета. К сожалению, такие системы в России отсутствуют и, следовательно, практически не применяются для исследования T-клеточного иммунитета.