Уважаемые члены приемной комиссии!

Тема моей ВКР: «Гепатопротекторная и желчегонная активость производных левопимаровой кислоты». (слайд 1). Прежде всего необходимо обосновать актуальность выбранной темы.

(Слайд 2)

В настоящее время наблюдаются существенные изменения в окружающей среде обитания - нарастают неблагоприятные факторы (как экологические, так и социальные), ухудшаются условия жизни, качество атмосферного воздуха, продуктов питания, питьевой воды. Увеличивается количество больных гепатитами токсической, алкогольной и лекарственной этиологий, а они являются причиной более 50% случаев циррозов печени. Ежегодно в мире регистрируется более 500 миллионов заболевших, в РФ количество больных с циррозом возрастает на 200 тысяч человек в год. Приведенные факты, с учетом потенциальной опасности постоянного их нарастания, охвата все большего количества, в первую очередь, трудоспособного населения, можно без преувеличения отнести не только к широко распространенным, но и к социально-значимым заболеваниям.

В этой связи профилактика и лечение заболеваний печени является актуальной проблемой в связи с ростом патологии. Вместе с тем, арсенал лекарственных препаратов, используемых в клинической практике для специфического лечения гепатитов весьма ограничен, при этом эффективность которых не всегда оказывается достаточной. В связи с вышеизложенным, проблема изучения гепатопротекторной и желчегонной активости производных левопимаровой кислоты, представляется важной и актуальной, что подтверждает и актуальность выбранной темы выпускной квалификационной работы.

(Слайд 3)

Цель выпускной квалификационной работы – изучить гепатопротекторную и желчегонную активности производных левопимаровой кислоты.

Предметом исследования в выпускной квалификационной работе явилась возможность использования производных левопимаровой кислоты при терапии гепатитов.

Объектом изучения в выпускной квалификационной работе выступили лабораторные показатели гепатопротекторной и желчегонной активности производных левопимаровой кислоты.

(Слайд 4).

Задачи исследования в выпускной квалификационной работе следующие:

- дать общую характеристику гепатопротекторной и желчегонной активности веществ.

- провести обзор современных лекарственных препаратов, обладающих желчегонной и гепатопротекторной активностью.

- описать методы получения производных левопимаровой кислоты.

- охарактеризовать биологические свойства производных левопимаровой кислоты.

- описать методы и материалы исследования; представить его результаты и сделать выводы.

На протяжении всей своей жизни человек контактирует с огромным количеством химических соединений, в т.ч. токсическими. При этом одним из наиболее часто поражаемых токсинами органов является печень, поскольку именно она осуществляет основные метаболические и биотрансформационные процессы.

Острые и хронические заболевания печени, вызываемые различными ксенобиотиками, называются токсическими гепатитами.

Спектр веществ, приводящих к развитию токсических гепатитов, достаточно широк. Это химические соединения, используемые в промышленности и сельском хозяйстве (галогенорганические, фосфороорганические, производные бензола и др.), и различные группы лекарственных средств (противотуберкулезные препараты, нестероидные противовоспалительные средства, антибиотики и т.д.), в том числе и алкоголь.

Лекарственные препараты в 40% случаев являются причиной развития гепатитов у пациентов старше 40 лет, а алкогольные гепатиты составляют 60-70 % от всех токсических повреждений печени.

Левопимаровая кислота относится к дитерепеноидам.

Известно, что эфирные масла и живица хвойных растений, благодаря высокому содержанию в них соединений терпенового ряда, являются важным источником получения биологически активных соединений. Живица (терпентин) представляет собой ароматное клейкое смолистое вещество, выделяющееся при повреждении коры хвойных деревьев (сосны, ели, пихты, кедра, лиственницы). Свежая живица представляет собой прозрачную светлую массу. На воздухе терпентиновое масло быстро испаряется, растворенные в нем смоляные кислоты выкристаллизовываются, и живица превращается в белую рыхлую кристаллическую массу. Жидкая смесь терпенов называется терпентиновым маслом или скипидаром. По химическому составу живица представляет собой раствор твердых смоляных кислот в смеси терпенов. Как показывают результаты хроматографии, анализируемые пробы живицы кедровой характеризуются несколько различающимся составом терпенов, что, по- видимому, в определённой степени связано с зоной заготовки и обусловленными этим морфологическими и биохимическими особенностями сосны кедровой сибирской.

Терпены активно используются в медицинской и фармацевтической промышленности. Как известно, соединения терпенового ряда обладают разносторонней физиологической активностью, сильным противовоспалительным, противовирусным, противогрибковым, антигельминтным, антибактериальным и ранозаживляющим свойством, но они обладают также и кровоостанавливающим и кроворазжижающим свойством, стимулирующим иммунологические процессы и влияющим на свёртываемость крови, значительно подавляющим во всём организме человека жизнедеятельность различной патогенной микрофлоры.

В последние годы левопимаровая кислота используется в качестве базового соединения для синтеза биологически активных веществ. Так, известно о противовоспалительной, противоязвенной, антифлогистической, антивирусной и противоопухолевой активности производных ЛПК.

Известно о высокой гепатопротекторной активности терпеноидов (производные бетулиновой и глицирризиновой кислот). Левопимаровая кислота участвует в антиокислительных процессах и стимулирует выработку печенью энзимов, обеспечивающих детоксикацию чужеродных веществ, что определяет перспективность поиска новых гепатопротекторов среди ее производных.

Исследование проводилось в лабораторных условиях. Субъектами исследования являлись лабораторные белые крысы линии Wistar.

(Слайд 5).

До начала эксперимента животных содержали в вентилируемом помещении при температуре 200С, при световом режиме 12/12 (освещение с 8.00 час.), на стандартном пищевом рационе вивария биологического факультета БашГУ, при свободном доступе к воде и пище, в соответствии с правилами, принятыми Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей.

Доклиническая оценка гепатопротекторов включает:

1.Первичный отбор соединений

2.Изучение специфической гепатозащитной активности и исследование механизма действия отобранных на первом этапе соединений

3.Оценка общетоксического действия и специфических видов токсичности (мутагенные, аллергогенные, иммунотоксические и тератогенные свойства).

(Слайд 7-8)

В исследовании использовались три производные левопимаровой кислоты: (5R, 9R, 13S, 18S) – 20 – изопропил - 5,9 – диметил - 17 {[(4метилфенил)сульфонил]имино} - 14оксопентацикло [10.6.2.01,10.04,9.013,18]икоза - 15,19 - диен-5-карбоновая кислоты (I); диметил (4bS,8R)-2-изопропил-3’,4b,8-триметил-2’,4’-диоксо-4,4а,4b,5,6,7,8,8a,9,10-декагидро-3Н-спиро[3,10a-этанофенантрен-11,5’-[1,3]-тиазолиден]-8,12-дикарбоксилата (II); натриевая соль 1-гидроксихинопимаровой кислоты (III).

Экспериментальные исследования гепатопротекторных и желчегонных свойств новых производных левопимаровой кислоты (I-III) проведены в соответствии с Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ (2012 г.). Для изучения гепатопротекторных и желчегонных свойств производных левопимаровой кислоты (I-III) была использована модель острого токсического гепатита, вызванного CCl4. Предварительно животные были поделены на 6 групп из 8 животных.

Токсический гепатит моделировали внутрибрюшинным введением 0,04 мл 50% масляного раствора CCl4 на 100 г массы животного, однократно в течение 3 суток. Изучаемые соединения и препарат сравнения Карсил (Carsil, Софарма АО, Болгария) вводили перорально по лечебно-профилактической схеме: однократно в дозе 50 мг/кг в течение 5 дней до воспроизведения гепатита и 10 дней после, начиная с первого дня введения гепатотоксина (всего 15 дней). Интактным животным и группе негативного контроля (не леченные) вводили внутрижелудочно эквиобъемные количества дистиллированной воды.

Уровень билирубина и маркерных ферментов печени (аланинаминотрансферазы (АЛТ) и аспартамаминотрансферазы (АСТ)) определяли в сыворотке крови с помощью реактивов фирмы "Lachema" (Чешская Республика). Желчегонную активность оценивали по скорости секреции и общему количеству выделенной за 3 часа желчи [3]. О степени выраженности воспалительных процессов в печени судили по отношению массы печени к массе тела. Статистическую обработку полученных результатов проводили по [4], при Р˂0,05 вероятность различий считали достоверной.

Приведем полученные результаты исследования.

(Слайд 9)

Введение CCl4 приводит к цитолизу гепатоцитов и нарушению функциональной активности печени, что сопровождается повышением уровня маркерных трансаминаз и билирубина в крови, а также снижению ее желчеобразовательной и желчегонной активности. Все изучаемые соединения увеличивали общее количество и скорость секреции желчи по сравнению с контролем (гепатит). В группе животных, которым вводили соединения (I) и (III) общее количество желчи, выделившейся за 3 ч, было выше на 46 и 38% соответственно по сравнению с группой контроля и было на уровне группы интактных животных (Р˃0,05).

(Слайд 10)

Соединения I и II понижали уровни ферментов трансаминаз по сравнению с контролем. Так, уровень АЛТ в этих группах был снижен на 31 и 28% (Р˂0,001), а уровень АСТ на 17 и 24% соответственно. Соединение (III) не оказывало влияния на уровень АЛТ и незначительно снижало уровень АСТ по сравнению с группой контроля.

Цитолитический синдром при острых поражениях печени сопровождается более выраженным повышением активности АЛТ по сравнению с активностью АСТ [5]. Соотношение показателей активности АСТ/АЛТ (коэффициент де Ритиса) у интактных животных (1,1±0,2) снижалось на фоне гепатита (0,77±0,98), что свидетельствует об остром характере воспаления. Введение соединений I и II повышало коэффициент де Ритиса, по сравнению с группой нелеченного контроля (Табл. 2). В группе соединения I коэффициент де Ритиса был близок к таковому у интактных животных.

Уровень билирубина во всех группах изучаемых соединений I-III оставался высоким, по сравнению с группами карсила и интактных животных, но был незначительно ниже, чем в группе контроля.

Относительная масса печени во всех группах была выше, по сравнению с интактным контролем, что косвенно свидетельствовало о течении воспалительных процессов в органе (Табл. 3.1).

Выводы по проведенному исследованию:

1.Проведено изучение гепатопротекторной и желчегонной активности новых производных левопимаровой кислоты на модели острого токсического гепатита у крыс.

2. Производные левопимаровой кислоты понижают уровень ферментов трансаминаз на модели острого гепатита и не влияют на уровень билирубина

3. Соединения I и III повышают общее количество выделенной желчи по сравнению с нелеченными животными

4. Среди изученных новых производных левопимаровой кислоты, наибольшей желчегонной и гепатопротекторной активностью обладает соединение I.

Спасибо за внимание!

(слайд 11)