Иммунофлюоресцентный метод.

План занятия:

1. Реакция агглютинации: механизм, роль ингредиентов, варианты, методы постановки, практическое значение.

2. Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) и реакция обратной не­прямой гемагглютинации (РОНГА).

3. Метод выявления неполных антител (реакция Кумбса).

4. Реакция преципитации: механизм, ингредиенты, варианты постановки, разновидности (кольцепреципитация, преципитация в агаре, иммуноэлектрофорез, реакция флокуляции). Практическое применение.

5. Иммунофлюоресцентный метод Кунса: прямой и непрямой варианты, практическое использование.

ВВОДНЫЕ ЗАМЕЧАНИЯ

Методы выявления и идентификации специфических антигенов и специфических антител нашли широкое применение в диагностике инфекционных и неинфекционных болезней.

В основе их лежат реакции специфического взаимодействия антигена с антителом. Поскольку антигены идентифицируют с применением антителиммунных сывороток, эти методы получили названиесерологических (от лат. «serum» - сыворотка).

В зависимости от характера антигена и условий постановки различают следующие иммунологические реакции: реакции прямой и непрямой агглютинации, преципитации, иммунного лизиса (реакция связывания комплемента - РСК), нейтрализации токсина и реакции с применением меченых антител или антигенов (реакция иммунофлюоресценции, радиоиммунный анализ - РИА и иммуноферментный анализ - ИФА). В зависимости от диагностической чувствительности все эти реакции можно условно раз­делить на три уровня. К первому уровню (наименьшему) относятся реакции прямой агглютинации, преципитации, РСК. Ко второму - реакции непрямой агглютинации, нейтрализации токсина, иммунофлюоресценции. К третьему - твердофазные реакции (ИФА и РИА): так они называются потому, что, в отличие от всех предыдущих, один из компонентов специфического взаимодействия - антиген или антитело (в зависимости от цели исследования) - прочно фиксируется на твердой основе, и лишь второй подвижен в поисках соответствующей мишени. В последние годы разработаны и постоянно совершенствуются еще более чувствительные методы индикации специфического взаимодействия антиген-антитело с помощью лазерного луча, основанные на изменении в этих условиях поляризационных свойств среды (метод биочипов).

Реакция агглютинации - это склеиваниекорпускулярных антигенов под действием специфических антител с образованием зернышек или хлопьев, которые выпадают в осадок. В качествеантигена (корпускулярного!) в этой реакции выступают: бактериальные клетки, клетки крови, индифферентные нерастворимые частицы или клетки с адсорбированными на них антигенами.

Разновидности реакция агглютинации: бактериальная агглютинация, гемагглютинация, лейкоагглютинация, тромбоагглютинация, непрямая агглютинация (непрямая реакция гемагглютинации, реакция Кумбса, латекс-агглютинация, коагглютинация).

Поскольку родственные бактерии могут агглютинироваться одной и той же диагностической агглютинирующей сывороткой, это затрудняет их идентификацию. Поэтому из агглютинирующих сывороток удаляют групповые антитела путем адсорбции их родственными бактериями (реакция Кастеллани). В таких сыворотках сохраняются антитела, специфичные только для одного вида микроорганизмов. Полученные таким способом сыворотки называют монорецепторными адсорбированными диагностическими сыворотоками.

Реакцию агглютинации применяют для:

• определенияантигенных свойств выделенного микроба. В этом случае нужно иметь агглютинирующую диагностическую сыворотку с известными антителами. Положительная реакция указывает, что изучаемый микроб специфичен антителу (агглютинину иммунной сыворотки);

• обнаружения антител в сыворотке больного к микробу-возбудителю, вызвавшему заболевание (серологический метод диагностики инфекционного заболевания). В этом случае в качестве антигена берут известные бактериальные диагностикумы. Положительная реакция указывает на то, что в сыворотке больного появились специфические антитела соответствующие определенным микробным антигенам, что свидетельствует о развили специфического иммунного ответа организма. Нарастание титра специфических антител в сыворотке больного говорит об инфекционном заболевании.

Бактериальная агглютинация на стекле (капельный метод) широко используется для идентификации микроорганизмов с помощью диагностических агглютинирующих сывороток.

Бактериальная агглютинация в пробирке (развернутый метод) ставится с разными разведениями исследуемой сыворотки для определения титра антител. Это реакции титрования иммунной сыворотки, реакция Видаля для диагностики брюшного тифа, реакция Райта для диагностики бруцеллеза и др.

Реакцияагглютинации для определения групп крови (системы АВО).

С помощью реакции агглютинации эритроцитов, используя антитела к группам крови А (II), В(III), определяют группы крови.