Сравнительная характеристика экзо- и эндотоксинов

Характеристика токсина	Тип токсина
экзотоксины	эндотоксины
Химический состав
Чувствительность к температуре
Действие на клетку
Иммуногенность
Превращение в анатоксин

Подпись преподавателя ________________

Занятие №15

Контрольное занятие №2.

Тема: «Генетика микроорганизмов. Антимикробная терапия. Экология микроорганизмов»

I. Тестовый контроль знаний.

II. Практический контроль

1. Определить чувствительность стафилококков к антибиотикам методом стандартных дисков.

2. Установить минимальную ингибирующую концентрацию (мкг/мл) антибиотика в отношении исследуемой культуры Staphylococcus aureus методом серийных разведений в МПБ.

3. Определить ОКБ пробы питьевой воды централизованного водоснабжения методом мембранных фильтров и дать микробиологическую оценку качества исследуемой воды.

4. Определить общее микробное число (КОЕ/мл) питьевой воды централизованного водоснабжения и дать микробиологическую оценку ее качества.

5. Определить общее микробное число воздуха операционной хирургического блока седиментационным методом до проведения операции, и дать микробиологическую оценку чистоты воздуха.

6. Определить фенотипическое проявление факторов патогенности Staphylococcus aureus на специальных средах (кровяной агар, желточно-солевой агар, цитратная плазма крови) и охарактеризовать их.

7. Промикроскопировать препарат из культуры Klebsiella pneumoniae, окрашенный по Бурри-Гинсу, выявить и охарактеризовать фактор патогенности этого микроорганизма.

III. Вопросы для устного опроса

1. Материальные основы наследственности микроорганизмов. Организация генетического материала у прокариотов, эукариотов, вирусов. Генотип и фенотип. Виды изменчивости. Модификации. Механизм. Фенотипические проявления.

2. Мигрирующие генетические элементы бактерий: транспозоны, is-последовательности, плазмиды. Характеристика. Свойства плазмид. Роль плазмид в детерминировании патогенных признаков и лекарственной устойчивости.

3. Мутации, их классификации. Мутагены физические, химические, биологические. Молекулярный механизм мутаций (делеция, дупликация, инверсия). Репарации и их значение. Роль мутаций в эволюционном процессе.

4. Генетические рекомбинации у бактерий. Трансформация. Трансдукция. Конъюгация. Их роль в эволюции микроорганизмов.

5. Микробиологические основы генетической инженерии и биотехнологии. Конструирование генно-инженерных штаммов с заданными свойствами, их использование в получении вакцин, гормонов и других биологических препаратов.

6. Генотипические методы исследования в диагностике инфекционных болезней и в идентификации микроорганизмов. Молекулярная зондовая гибридизация нуклеиновых кислот. Полимеразная цепная реакция.

7. Антибиотики. История открытия (А. Флеминг). Классификация антибиотиков по происхождению, химическому составу, механизму, спектру и характеру антимикробного действия. Единицы измерения их активности.

8. Лекарственная устойчивость микроорганизмов. Генетические и биохимические механизмы приобретенной резистентности. Методы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам. Пути преодоления лекарственной устойчивости.

9. Противовирусные химиотерапевтические препараты. Классификация по механизму противовирусного действия.

10. Антифунгальные препараты. Классификация по механизму действия.

11. Санитарная микробиология, ее задачи. Санитарно-показательные микроорганизмы. Критерии достоверности выбора санитарно-показательных микроорганизмов.

12. Микрофлора воды. Эпидемиологическое значение воды как фактора распространения некоторых патогенных микроорганизмов. Микробиологическое исследование воды: микробное число, ОКБ и ТКБ.

13. Микрофлора воздуха. Патогенные микроорганизмы, передающиеся через воздух. Микробиологическое исследование воздуха. Показатели оценки санитарно-гигиенического состояния воздуха в лечебных учреждениях.

14. Микрофлора тела здорового человека. Характеристика основных микробиоценозов организма. Роль микроорганизмов в физиологических процессах и патологии. Гнотобиология.

15. Основные физиологические функции естественной микрофлоры организма человека, участие ее в колонизационной резистентности.

16. Дисбиоз (дисбактериоз) и причины его возникновения. Эубиотики. Пробиотики.

17. Инфекция (инфекционный процесс). Инфекционная болезнь. Основные факторы, обусловливающие возникновение инфекционного процесса.

18. Роль микроорганизмов в инфекционном процессе. Патогенность. Вирулентность, единицы измерения (DLM, LD50), методы определения. Инфекционная доза (ID).

19. Факторы патогенности, обеспечивающие адгезию, колонизацию, инвазию и агрессивность микроорганизмов.

20. Классификация бактериальных токсинов. Сравнительная характеристика токсинов протеиновой и липополисахаридной природы.

21. Классификация и характеристика бактериальных протеиновых токсинов по механизму действия на эукариотические клетки (мембранотоксины, цитотоксины, функциональные блокаторы). А- и В- субъединицы молекулы токсина, их функция.

22. Механизмы и пути передачи возбудителей инфекционных болезней от источника (резервуара) инфекции восприимчивому человеку.

23. Микробиологическая и иммунобиологическая характеристика периодов инфекционной болезни. Характеристика особенностей инфекционных болезней: специфичность, контагиозность, цикличность течения, формирование иммунитета.

24. Пути проникновения патогенных микробов в организм человека и их распространение по организму. Динамика развития инфекционной болезни. Пути выведения патогенных микроорганизмов из организма во внешнюю среду.

25. Формы проявления инфекции, их характеристика. Персистенция патогенных микроорганизмов. Микробоносительство.

26. Факторы патогенности вирусов: адгезины, нуклеиновые кислоты, белки, ферменты. Патогенетические особенности вирусных инфекций. Острая и персистирующая инфекции.

Дата__________________

Занятие №16

Тема:Введение в иммунологию. Типы иммунитета и формы иммунного реагирования. Понятие об антигенах и антителах.

Вопросы для обсуждения:

1. Иммунитет. Виды и формы иммунитета

2. Естественный (врожденный) иммунитет.Факторы неспецифической защиты.

3. Характеристика приобретенного (специфического) иммунитета.

4. Факторы специфического иммунитета.

5. Антигены, их свойства.

6. Антигены микроорганизмов.

7. Антигены организма человека. (Изоантигены, аллоантигены). Молекулы МНС- I и МНС- II классов.

8. Иммуноглобулины (антитела). Структура. Классы.

9. Функции иммуноглобулинов.

10. Реакции антиген-антитело, их практическое применение.

11. Реакция агглютинации.

12. Реакция преципитации.

Практические задания:

1. Демонстрация незавершенного фагоцитоза. Промикроскопировать препараты из гнойного отделяемого уретры больного гонореей, окрашенные щелочным метиленовым синим и по Граму. Препараты зарисовать.

Рис. 1. Фагоцитоз гонококков. Рис. 2. Фагоцитоз гонококков.Окраска по Граму. Окраска щелочным метиленовым синим.

2. Нарисовать схему строения бактериальной клетки и указать антигены поверхностных структур клетки (капсульный, фимбриальный, жгутиковый, соматический).

Рис. 3. Схема строения бактериальной клетки.

3.Нарисовать схему строения молекулы IgG и указать ее структурные элементы: H- и L-полипептидные цепи, Fab- и Fc-фрагменты, антигенсвязывающие центры – паратопы.

Рис. 4. Схема строения молекулы IgG.

4. Поставить реакцию агглютинации (РА) на стекле исследуемой чистой культуры с диагностическими сальмонеллезными монорецепторными сыворотками, учесть и зарисовать полученные результаты. Определить вид исследуемой культуры с помощью табл. 1.

Антитела к антигенам сальмонелл	О - 9	О - 12	Vi	Hd	Hgm	0,85% NaCl (контроль)

Рис. 5. Результаты постановки РА на стекле.

Выводы: на основании полученных результатов постановки РА на стекле чистой культуры диагностическими сальмонеллезными монорецепторными сыворотками установлено, что исследуемая культура бактерий относится к _________________________________.

Таблица 1.

Классификация сальмонелл по антигенной структуре (сокращенный вариант).

Серогруппа, вид или серовар	О-антиген	Н-антиген Фаза-1	Н-антиген Фаза-2
Серогруппа А S. paratyphi A	1, 2, 12	a	(1,5)
Серогруппа B S. schottmuеlleri S. typhimurium	1,4,(5),12 1,4,(5),12	b i	1,2 1,2
Серогруппа C S. cholerаesuis	6,7	с	1,5
Серогруппа D S. typhi S. enteritidis S. dublin S. moscow	9,12,Vi 1,9,12 1,9,12 9,12	d g,m g,p b,g	- (1,7) - -

5. Произвести учет результатов развернутой реакции агглютинации для определения титра антител в сыворотке крови больного с подозрением на брюшной тиф, используя схему постановки реакции, зарисовать полученные результаты.

Таблица 2.

Схема постановки развернутой реакции агглютинации для выявления антител в сыворотке крови больного и определения их титра

Ингредиенты	Номер пробирки
					Контроль сыворотки	Контроль диагностикума
0,85% р-р NaСl, мл	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	-	1,0
Сыворотка крови больного в разведении 1:50, мл	1,0 →	1,0 →	1,0 →	1,0 →	1,0 →	1,0 →	-
Полученное разведение сыворотки крови больного	1:100	1:200	1:400	1:800	1:1600
Диагностикум, в каплях						1:100

Инкубация при 37º С в течение 2 часов, затем при комнатной температуре 18-20 часов.

Выводы: титр антител к О-антигену Salmonella typhi в сыворотке крови больного составляет 1:___.

6. Ознакомиться с методом постановки реакции кольцепреципитации для выявления термостабильного антигена возбудителя сибирской язвы. Зарисовать полученные результаты.

а б

Рис. 2. Реакция кольцепреципитации:

а – контроль, отрицательный результат; б – опыт, положительный результат.

Подпись преподавателя ________________

Дата__________________

Занятие №17

Тема:Серологические реакции, типы, механизмы. Использование в диагностике инфекционных заболеваний. Иммунопрофилактика и иммунотерапия.

Вопросы для обсуждения:

1. Реакция связывания комплемента (РСК). Практическое применение.

2. Иммунные реакции с метками: реакция иммунофлюоресценции (РИФ), иммуноферментный анализ (ИФА), иммунный блоттинг (ИБ). Практическое применение.

3. Вакцины. Группы вакцин по способу приготовления.

4. Гомологичные и гетерологичные иммунные сыворотки и иммуноглобулины. Получение. Серотерапия и серопрофилактика инфекционных болезней.

Практические задания:

1. Ознакомиться с учетом результатов РСК (демонстрация отрицательной и различной степени интенсивности положительной реакции (табл. 3).

Таблица 1.

Интенсивность реакции оценивают следующим образом:

“ ++++ “	- полная задержка гемолиза: жидкость над эритроцитами не окрашена, эритроциты в осадке;
“ +++ “	- неполная задержка гемолиза: жидкость над эритроцитами слабо-розового цвета, значительный осадок эритроцитов;
“ ++ “	- частичная задержка гемолиза: жидкость красная, небольшой осадок эритроцитов;
“ + “	- слабая задержка гемолиза: жидкость интенсивно красная, осадок эритроцитов незначительный;
“ – “	- полный гемолиз (лаковая кровь).

Таблица 2.