II. Определение целлюлолитической активности
Техника. Исследуемые бактериальные культуры засевают «медальонами» на поверхность минимальной глюкозо-солевой среды, содержащей 0,2% растворимой целлюлозы. После 48 часов инкубирования при 28оС чашки Петри со средой заливают 3-4 мл 0,1% раствора Конго красного и выдерживают около 30 мин. После этого краситель сливают, а среду промывают 8% раствором NaCl. Наличие светлых неокрашенных пятен в месте роста и вокруг “медальонов” бактерий свидетельствует о продукции ими целлюлолитических ферментов.
III. Определение пектолитической активности
Техника. Исследуемые бактериальные культуры засевают «медальонами» на поверхность полноценной питательной агаризованной среды, содержащей ионы Са2+, с нанесенным на нее полипектатным гелем. После инкубирования в течение 24 часов при 28оС продукцию пектолитических ферментов регистрируют по образованию лунок на поверхности полипектатного геля.
Задача 2
Факультативные анаэробные спорообразующие бактерии рода Bacillus
1 занятие
Цель занятия: определение особенностей морфологии клеток и колоний бактерий рода Bacillus, выявление эндоспор у исследуемых бактерий.
Штаммы: в работе используют бактерии рода Bacillus (B.subtilis, B.cereus , B.megaterium, B.brevis, B.mycoides, B.polymyxa).
Среды: полноценная питательная агаризованная среда.
Красители и реактивы: 0,5% карболовый раствор генцианового фиолетового, раствор Люголя, 1% водный раствор фуксина, 96о этиловый спирт, 5% раствор малахитового зеленого, 0,5% раствор сафранина, 0,1% раствор Конго красного, 8% раствор NaCl.
Оборудование: бактериологическая петля, спиртовка, предметные стекла, световой биологический микроскоп Биолам.
Задание на занятие:
1) учет результатов по выявлению продукции пектолитических, протеолитических и целлюлолитических ферментов у бактерий рода Erwinia;
2) выявление эндоспор у бактерий рода Bacillus по методу Шефера-Фултона;
3) окраска бактерий рода Bacillus по методу Грама;
4) рассев бактерий рода Bacillus методом истощающего штриха на ППА;
5) оформление таблицы “Особенности морфологии клеток бактерий разных видов рода Bacillus” (форма клеток, сочетание клеток, наличие эндоспор, результат окрашивания по методу Грама).
Ход работы:
I. Окраска эндоспор по методу Шефера-Фултона
Техника. 1. Фиксированный мазок покрывают кусочком фильтровальной бумаги, на него наносят 5-6 капель раствора малахитового зеленого и нагревают 2-3 раза до появления паров, держа стекло над пламенем спиртовки.
2. Бумажку снимают, препарат промывают водой и в течение 30 сек докрашивают раствором сафранина.
3. Препарат промывают водой, высушивают фильтровальной бумагой и микроскопируют, пользуясь иммерсионной системой.
В результате споры окрашиваются в зеленый цвет, а клетка - в красный.
II. Окраска бактерий по методу Грама
Техника окраски приведена выше.
III. Посев бактерий методом истощающего штриха
с целью получения изолированных колоний
Техника посева приведена выше.
2 занятие
Цель занятия: изучение морфологии колоний, формируемых разными видами Bacillus на ППА.
Штаммы: в работе используют бактерии рода Bacillus (B.subtilis, B.cereus , B.megaterium, B.brevis, B.mycoides, B.polymyxa).
Оборудование: стереоскопический бинокулярный микроскоп.
Задание на занятие:
1) визуальная и стереомикроскопическая оценка морфологии выросших на ППА колоний бактерий рода Bacillus;
2) оформление таблицы “Особенности морфологии колоний, сформированных на ППА разными видами бактерий рода Bacillus”.
Ход работы:
Оценить визуально и описать морфологию колоний бактерий рода Bacillus, выращенных на ППА. Выявить существующие видовые отличия характера формирования колоний на агаризованной среде. На основании результатов визуального контроля оформить таблицу.
Задача 3
Актиномицеты
1 занятие
Цель занятия: выявление особенностей роста и спорообразования актиномицетов на агаризованных питательных средах.
Штаммы: в работе используют представителей родов Actinomyces, Streptomyces, Nocardia, Rhodococcus.
Среды и красители: полноценная питательная агаризованная среда (ППА), крахмало-аммиачный агар, среда Чапека, дистиллированная вода или 1% водный раствор метиленового синего.
Оборудование: бактериологическая петля, спиртовка, предметные и покровные стекла, стереоскопический бинокулярный микроскоп, световой биологический микроскоп Биолам.
Задание на занятие:
1) изучение характера роста актиномицетов и образования ими мицелия на различных агаризованных средах и выявление существующих отличий;
2) исследование формы спор и спороносцев у исследуемых бактерий методом “отпечатков”;
3) оформление таблицы “Особенности роста и спорообразования актиномицетов на агаризованных средах”.
Ход работы:
I. Рост актиномицетов на средах различного состава
Определить различия характера роста и формирования мицелия на агаризованных средах различного состава. Выявить наличие «атипичного роста» на ППА. Определить плотность и консистенцию колоний в зависимости от питательной среды.