Тема: Лабораторная диагностика парагриппа-3 крупного рогатого скота

Цель занятия:Освоить РТГА при ретроспективной диагностике парагриппа крупного рогатого скота.

Задание:Индикация вируса парагриппа-3 в культуре клеток и его идентификация в РЗГАд.

Оборудование и материалы:Доски с луночками из плексиглаза, мерные пипетки на - 1, 2, 5 мл., резиновые баллончики с наконечником, изотонический раствор натрия хлорида, антиген ПГ-3, испытуемые сыво­ротки крови, 1%-ная взвесь эритроцитов морских свинок, набор сухих диагностикумов для диагностики парагриппа-3 крупного рогатого скота, банки с дезраствором, таблицы.

Содержание занятия:

Парагрипп крупного рогатого скота - острое контагинозное заболевание телят, чаще 2-3 месячного возраста, характеризующееся поражением респираторного тракта. Возбудителем является вирус, имеющий близкое антигенное родство с вирусом парагриппа человека 3-то типа. Парагриппозные вирусы человека и животных входят в семейство и род парамиксовирусов. Они состоят из оболочки и внутреннего компонента, представляющего однонитевую рибонуклеопротеидную спираль, свернутую в клубок (РНП). Оболочка покрыта многочис­ленными шипами, расположенными радиально. Они представляют специфические белки, обеспечивающие гемагглютинирующие, гемолизирующие свойства и нейраминидазную ак­тивность вирусов. Кроме того в оболочке содержится фактор Ф, вызывающий симпластообразование в клеточных культурах, а также аденозинтрифосфатаза, белковые и липидные компоненты клетки хозяина.

род: Paramyxovirus

Cемейство: Paramyxoviridae

РНК- геномный вирус

Предварительная клинико-эпизоотологичес-кая диагностика представляет большие трудности, так как симптомы этой болезни имеют сходство с аденовирусной инфекцией, ринотрахеитом, вирусной диареей крупного рогатого скота и др. Кроме того, парагрипп часто протекает в виде смешанной инфекции совместной бактериями и микоплазмами. Поэтому точный диагноз можно установить только с помощью лабораторных методов исследования, основных по идентификации вируса парагриппа - 3 с помощью набора сухих диаг­ностикумов.

Парагрипп у крупного рогатого скота диагностируют комплексно на основании эпизоотологических, клинических, патологоанатомических данных и результатов обязательного лабораторного исследования. Клинико-эпизоотологические и патологоанатомические признаки служат лишь основанием для постановки предположительного диагноза, поскольку сходные с парагриппом симптомы отмечаются при ряде других болезней. Окончательный диагноз устанавливают только после результатов вирусологических и серологических исследований.

Взятие и подготовка вируссодержащего материала:

1 Носоглоточная слизь. Взятие слизи производят в начале болезни путем протирания носовых ходов и задней стенки глотки сухим стерильным тампоном.

2 Кусочки слизистых оболочек носовых раковин, трахеи, глотки, легочной ткани.

Данный материал лучше брать от больных животных, убитых с диагностической целью. За­мораживание и хранение материала быстро инактивируют вирус парагриппа - 3, поэтому рекомендуется испытуемый материал помешать в термос с обычным льдом и немедленно доставлять в лабораторию. Вируссодержащую суспензию готовят по общепринятой методи­ке.

Порядок исследования:

Лабораторная диагностика включает:

1) обнаружение антигена в патологическом материале (мазках, отпечатках, срезах), полученном от больных животных, в РИФ;

2) выделение возбудителя из патологического материала в культуре клеток и его идентификацию в РТГА, РНГАд, РИФ и др.;

3) выявление антител в сыворотке крови больных и переболевших животных (ретроспективная диагностика) в РТГА.

1 Обнаружение специфического антигена в эпителиальных клетках слизистой носоглотки методом иммунофлуоресценции.

2 Выделение вируса из патматериала и его идентификации в РТГА, РЗГАД.

3 Ретроспективная диагностика.

Иммунофлуоресценция. Вирусы парагриппа созревают на поверхности клетки и медленно освобождаются от нее, поэтому отторгаемые в ходе воспалительного процесса эпителиальные клетки содержат специфический вирусный антиген или зрелые вирионы. При подготовке препаратов сухим тампоном собирают слизь со слизистой носоглотки больных животных и делают мазки на предметных стеклах, которые обрабатывают люминесцирующей специфической сывороткой по общепринятой методике. При парагриппозной инфекции свечение антигена наблюдают в цитоплазме клетки.