Расчет полученных данных
Протеолитическая активность показыват, какое количество мг белка казеина переводится в растворимую форму одним миллиграммом ферментного препарата при 35 °С, рН 6,6, за определенный промежуток времени. Расчет протеолитической активности (Ер) производится по следующей формуле:
(16)
где: Ер – протеолитическая активность ферментного препарата;
С – концентрация ферментного препарата, мг;
А – количество растворимых продуктов гидролиза казеина за определенный промежуток времени, мг
, (17)????
где: В – количество продуктов гидролиза казеина в соответствующе измеренной экстинкции;
7,5 – объем пробы (2 мл субстрата, 0,5 мл ферментного препарата, 5 мл раствора ТХУ);
V – количество раствора, взятого для колориметрирования, мл.
Материалы и реактивы. Казеин (см. Приложение 1, п.7); реактив А, В, С (см. Приложение 1, п.17); реактив Фолина (см. Приложение 1, п. 8); ферментные препараты; 1,125 М раствор ТХУ; 0,75 М раствор едкого натра.
Оборудование. Складчатый фильтр; пробирки; пипетки на 1 и 2 мл с ценой деления 0,05 мл; ФЭК–60 или ФЭК–56М.
Эстеразы
Липаза или триацилглицероллипаза катализирует расщепление жиров (три-
ацилглицеринов) на глицерин и жирные кислоты. Реакция идет по схеме:
По существующей классификации ферментов липаза принадлежит к классу гидролаз и подклассу эстераз, действующих на сложноэфирные связи.
Как и в случае других гидролаз, радикалгис активного центра фермента служит для переноса протонов, радикалсер – для акцептирования ацильной группы, высвобождающейся в момент распада сложноэфирной связи в молекуле триглицерида. Радикал изолейцина взаимодействуют с углеводородным радикалом остатка высшей жирной кислоты и способствует закреплению молекулы триглицерида в активном центре фермента (см. рисунок 7).
Рисунок 9 – Механизм действия триацилглицероллипазы
Скорость расщепления зависит от длины цепи жирных кислот. Скорость реакции уменьшается в ряду: три–, ди–, и моноглицериды.
Источником для получения промышленных препаратов липазы являются поджелудочная железа, семена клещевины.
Активаторами липазы служат соли желчных кислот. Активирующий эффект основан на эмульгирующем действии.
рН–оптимум активности (и стабильности) у разных ферментных препаратов различен и зависит от источника фермента. Так, панкреатическая липаза имеет оптимум активности при рН = 8, липаза молока – при рН = 9, липаза из клещевины – при рН = 4,3, микробные липазы – при рН = 5–6. Из перечисленных липаз наиболее термостабильной является липаза молока.
Липазам принадлежит важная роль в технологии продуктов питания. В молоке слабая липазная активность способствует образованию аромати-зирующих веществ; липаза пшеницы и других злаковых культур способствуют порче муки. Наконец, микробные препараты липазы используются для гидролиза жира в тех случаях, когда необходимо омыление при сохранении биологически активных жирорастворимых веществ (например, токоферола).