Оформление результатов работы. Используя ответы на контрольные вопросы, сформулируйте выводы по проделанной работе.

Используя ответы на контрольные вопросы, сформулируйте выводы по проделанной работе.

Контрольные вопросы

1. Сопровождается ли осаждение белков при нагревании денатурацией?

2. Что такое денатурация белка?

Лабораторная работа 18. Количественное определение белка в культуральной жидкости

Метод относится к числу пороговых и основан на том экспериментально установленном факте, что растворы, содержащие 0,0033 % белка, при наслаивании на концентриро­ванную азотную кислоту в конце второй минуты образуют на поверхности раздела жидкостей едва заметную белковую пленочку. При меньших концентрациях белка в растворе осаждения белка не происходит.

Пользуясь различными разведениями исследуемой куль­туральной жидкости, устанавливают максимальное разведе­ние, при котором белок может быть обнаружен при наслаи­вании на концентрированную азотную кислоту. Зная степень разведения, при которой концентрация белка равна 0,0033 %, вычисляют концентрацию белка в неразведенной культураль­ной жидкости.

1 Цель работы – определить количество белка в исследуемой жидкости, используя метод осаждения белка азотной кислотой

Приборы и материалы

Белок 1 %

Азотная кислота (конц.)

Дистиллированная вода

Исследуемая культуральная жидкость (задача)

Описание работы

Готовят ряд последовательных разведений. В семь про­бирок наливают по 2 мл дистиллированной воды. В 1-ю про­бирку наливают 2 мл исследуемого раствора культуральной жидкости и перемешивают. 2 мл смеси переносят во 2-ю пробирку и т. д. Из 7-й пробирки 2 мл смеси выливают. С со­держимым каждой пробирки проделывают реакцию наслаи­вания на азотную кислоту (см. лабораторную работу 15). Для этого в семь других пробирок наливают по 2 мл концен­трированной азотной кислоты. В 1-ю пробирку осторожно из пипетки наслаивают раствор белка из 1-й пробирки с белком и т.д. Пробирки не встряхивать.

Отмечают, при каком разведении появляется едва за­метное кольцо между 2-й и 3-й минутами.

Оформление результатов работы

Производят расчет содержания белка в 1 мл неразведенной культуральной жид­кости (задачи).

Контрольные вопросы

На чем основан данный метод определения белка в культуральной жидкости?

Лабораторная работа 19. Высаливание белков

Высаливанием называется процесс выделения белков из водных растворов нейтральными растворами концентрированных солей щелочных и щелочноземельных металлов: Na₂S0₄, (NH₄)₂S0₄, MgS0₄, NaCl и др.

При добавлении достаточно больших концентрации этих солей к раствору белка происходит дегидратация белковых частиц и снятие заряда; при этом белки выпадают в осадок. Степень выпадания белков в осадок зависит от ионной силы раствора осадителя, размера частиц белковой молекулы, ве­личины ее заряда, гидрофильности. Разные белки осажда­ются при различных концентрациях солей. Так, например, глобулины легче выпадают в осадок, чем альбумины. По­этому в осадках, полученных путем постепенного повышения концентрации солей, отдельные белки находятся в различ­ных фракциях. Для разделения белков этим методом широко используют сульфат аммония. Некоторые белки выпадают в осадок уже при концентрации соли, близкой к 1/10 от насы­щения, глобулины – при полунасыщении, альбумины – при полном насыщении. В насыщенном растворе сульфата аммо­ния все белки выпадают в осадок.

Высаливание белков является обратимым процессом, и после удаления соли белок вновь приобретает природные свойства. Поэтому в научно-исследовательской работе выса­ливанием пользуются при изолировании, очистке различных белков (ферменты, гормоны, и т. д.) из биологического ма­териала (клетки, растения, ткани), для получения некоторых белковых препаратов.

1 Цель работы – с помощью метода высаливания выделить яичный глобулин и альбумин

Приборы и материалы

Яичный белок

Сульфат аммония (насыщенный раствор, порошок)

Едкий натр 10 %

Сернокислая медь 1 %

Описание работы

В пробирку наливают 20 капель яичного белка, добав­ляют равный объем насыщенного раствора сульфата аммо­ния, содержимое перемешивают. Получается полунасыщен­ный раствор сульфата аммония, выпадает осадок яичного глобулина. Через пять минут осадок отфильтровывают, В фильтрате остается другой белок – яичный альбумин.

Для высаливания альбумина к фильтрату добавляют из­мельченный порошок сульфата аммония до полного насыще­ния, т. е. до тех пор, пока не прекратится растворение соли.

Выпавший осадок альбумина отфильтровывают и с фильтратом проделывают биуретовую реакцию. Отрицательная реакция указывает на отсутствие белка.