Определение изоэлектрической точки белков

*Определение изоэлектрической точки желатина по минимуму набухания

1. В три пробирки вносят по 0.2 г порошка желатина.

2. В первую пробирку наливают 1 мл буферного раствора с рН 1.0, во вторую – с рН 4.7, а в третью – с рН 9.0.

3. Пробирки осторожно встряхивают и оставляют на 1 ч.

4. Затем определяют высоту геля в пробирках.

5. Зарисовывают результаты, делают вывод о численном значении изоэлектрической точки желатина.

*Определение изоэлектрической точки желатина по мутности (по коагуляции)

1. В три пробирки наливают по 0.5 мл буферных растворов с рН 3.7, 4.7, 5.7.

2. Затем в пробирки добавляют по 0.5 мл 0.5% раствора желатина.

3. Далее во все пробирки приливают по 1 мл этилового спирта.

4. Наблюдают коагуляцию желатина (образование мутности) в одной из пробирок.

5. Записывают и объясняют результаты.

*Определение изоэлектрической точки казеина по мутности (по коагуляции)

1. В три пробирки наливают по 1 мл буферных растворов с рН 3.7, 4.7, 5.7.

2. Затем в пробирки добавляют по 1 мл золя казеина.

3. Через 10 мин наблюдают максимальную коагуляцию казеина (наибольшее помутнение) в одной из пробирок.

4. Сравнивают полученные результаты с изоэлектрической точкой желатина.

5. Делают вывод о факторах, обеспечивающих устойчивость казеина.

Реакции осаждения белков

*Осаждение белков при нагревании

1. В пять пробирок наливают по 2 мл 1% раствора яичного белка.

2. Содержимое 1-ой пробирки нагревают.

3. Во 2-ую пробирку добавляют каплю 1% CH₃COOH и нагревают.

4. В 3-ю пробирку добавляют 0,5 мл 10% CH₃COOH и нагревают.

5. В 4-ую пробирку добавляют 0,5 мл 10% CH₃COOH, несколько капель насыщенного раствора NaCl и нагревают.

6. В 5-ую пробирку добавляют 0,5 мл 10% раствора NaOH и нагревают.

7. Наблюдают, записывают и объясняют результаты.

*Осаждение белков концентрированными минеральными кислотами

1. В три сухие пробирки наливают по 2 мл концентрированных азотной, соляной и серной кислот.

2. Наклонив каждую пробирку, осторожно по стенке приливают в нее по 0,5 мл 1% раствора яичного белка так, чтобы он не смешивался с кислотой.

3. Наблюдают появление белого аморфного осадка на границе двух жидкостей.

4. Все пробирки встряхивают.

5. Наблюдают, записывают и объясняют результаты.

*Осаждение белков органическими кислотами

1. В пробирку наливают 2 мл раствора белка и добавляют несколько капель 5% раствора трихлоруксусной кислоты (ТХУ).

2. Наблюдают, записывают и объясняют результат.

*Осаждение белков спиртом

1. В пробирку наливают 1 мл раствора белка, добавляют 2 мл C₂H₅OH и взбалтывают.

2. Наблюдают, записывают и объясняют результат.

*Осаждение белков ацетоном

1. В пробирку наливают 1 мл раствора белка, добавляют осторожно по стенке пробирки 0.5 мл ацетона.

2. Наблюдают, записывают и объясняют результат.

*Осаждение белков фенолом и формалином

1. В две пробирки наливают по 1 мл раствора белка.

2. Далее в первую пробирку добавляют 1 мл насыщенного водного раствора фенола, а во вторую – 1 мл формалина.

3. Наблюдают, записывают и объясняют результаты.

*Осаждение белков солями тяжелых металлов

1. В две пробирки наливают по 1 мл раствора белка.

2. Далее в первую пробирку медленно, по каплям при встряхивании добавляют раствор сульфата меди, а во вторую – раствор ацетата свинца.

3. Наблюдают появление осадков.

4. Затем в каждую пробирку добавляют соответствующий раствор в избытке.

5. Наблюдают, записывают и объясняют результаты.

*Осаждение белков реактивами на алкалоиды

1. В три пробирки наливают по 1 мл раствора белка.

2. Растворы подкисляют 2 каплями 1% раствора уксусной кислоты (в каждую пробирку).

3. В первую пробирку добавляют 5 капли насыщенного раствора пикриновой кислоты.

4. Во вторую – 5 капли 10% раствора таннина.

5. В третью – 3 капли 5% раствора HCl, а затем 5 капель 5% раствора гексацианоферриата калия, взбалтывая после добавления каждой капли.