Данные для построения калибровочного графика

ПВК, мкг	Dоп - Dк
	0,08 0,14 0,29 0,45 0,60 0,78

Расчетсодержания ПВК в суточной моче (на диурез 1500 мл):

= мг/сутки

Для пересчета содержания ПВК (в мг) в единицы количества вещества (мкмоль) надо умножить соответствующие величины на 11,4 (коэффициент пересчета).

Норма:10-25 мг/сутки или 114-284 мкмоль/сутки пировиноградной кислоты.

Выводы

Тестовые задания по теме: «Аэробный обмен углеводов»

1) Ответить на каждый вопрос однозначно: «да» или «нет»

1. Скорость ЦТК регулируется аллостерическими ферментами - цитратсинтазой и изоцитрадегидрогеназой.

2. Положительный баланс ЦТК составляют 15 молекул АТФ.

3. Сукцинил-КоА является макроэргическим соединением.

4. В окислительном декарбоксилировании пировиноградной и a-кетоглутаровой кислот участвует КоА.

5. Доля окисления пирувата в общем энергообмене организма незначительна.

6. Все ферменты ЦТК находятся в митохондриях.

7. Зависит ли скорость цикла трикарбоновых кислот от концентрации АТФ в клетке?

8. Катализирует ли сукцинатдегидрогеназа окисление янтарной кислоты?

9. Происходит ли в ЦТК субстратное фосфорилирование?

10. Все ли атомы глюкозы окисляются в ЦТК до СО₂?

11. Образуется ли НАДФН(Н⁺)в цикле трикарбоновых кислот?

12. Может ли цитрат из митохондрий попадать в цитоплазму?

2) Выбрать один правильный ответ

В цикле трикарбоновых кислот не участвует фермент: 1. аконитаза 2. транскетолаза 3. сукцинатдегидрогеназа 4. фумараза 5. малатдегидрогеназа

В отсутствие окислительного фосфорилирования выход АТФ в ЦТК составляет (число молекул на 1 оборот цикла): 1. 0 2. 1 3. 2 4. 3 5. 12

3) Найти соответствие процесса и регуляторного фермента, участвующего в нём

А. гликолиз Б. ЦТК

1. пируваткиназа 2. цитратсинтаза 3. фосфофруктокиназа 4. α-кетоглутаратдегидрогеназа 5. гексокиназа

Тестовые задания по теме: «Пентозофосфатный путь окисления глюкозы. Нарушения обмена углеводов»

1) Ответить на каждый вопрос однозначно: «да» или «нет»

1. Пентозофосфатный путь превращения глюкозы является поставщиком НАДФН(Н⁺) для восстановительных синтезов.

2. Передозировка инсулина вызывает у больного сахарным диабетом гипогликемию.

3. Фруктозо-6-фосфат - аллостерический регулятор гликолиза.

4. Рибоза должна поступать в организм с пищей.

5. Все ферменты гликолиза и пентозофосфатного пути находятся в цитоплазме.

6. При полном окислении одной молекулы глюкозы максимально может образоваться 38 молекул АТФ.

7. Является ли нормой содержание глюкозы в цельной крови 3,3 - 5,5 мкмоль/л ?

8. Связана ли болезнь Гирке (гликогеноз I типа) с наследственным дефектом синтеза глюкозо-6-фосфатазы в печени?

9. Содержится ли сахароза в крови?

10. Является ли галактоземия наследственным заболеванием?

11. Может ли пентозофосфатный путь окисления глюкозы давать энергию?

12. Является ли НАД⁺ коферментом транскетолазы?

2) Выбрать один правильный ответ:

Какова основная функция пентозофосфатного пути в эритроцитах? 1. образование НАДФН(Н+) 2. образование рибозо-5-фосфата 3. расщепление пентозофосфатов 4. синтез АТФ 5. восстановление Н2О2 до двух молекул воды

Метаболитом пентозофосфатного пути превращения глюкозы не является: 1. рибозо-5-фосфат 2. ксилулозо-5-фосфат 3. фруктозо-6-фосфат 4. глицеральдегидфосфат 5. глюкозо-1-фосфат

3) Найти соответствие процесса и субстрата, участвующего в нём

А. Гликолиз Б. Пентозофосфатный путь превращения глюкозы

1. фруктозо-1,6-бисфосфат 2. рибозо-5-фосфат 3. пируват 4. глицеральдегид-3-фосфат 5. рибулозо-5-фосфат

Итоговые тестовые задания по теме: «Химия и обмен углеводов»

1) Ответить на каждый вопрос однозначно: «да» или «нет»

1. Пируваткарбоксилаза - один из ферментов глюконеогенеза.

2. Адреналин индуцирует синтез гликогенсинтазы.

3. Гликоген мышц может поставлять глюкозу в кровь.

4. Глюкокортикоиды индуцируют синтез ферментов глюконеогенеза.

5. Адреналин и глюкагон усиливают синтез гликогена в мышцах.

6. Глицерин может быть субстратом глюконеогенеза.

7. Может ли наблюдаться гипергликемия при опухолях коры надпочечников?

8. Образуется ли молочная кислота в тканях мозга?

9. Присутствует ли глюкокиназа в мышечных клетках?

10. Является ли фосфофруктокиназа аллостерическим ферментом?

11. Происходит ли гликолиз в эритроцитах?

12. Связана ли галактоземия новорожденных с недостатком гексозо-1-фосфатуридинтрансферазы?

2) Выбрать один правильный ответ

Лактат, поступающий в кровоток, может снова превращаться в глюкозу в: 1. печени 2. сердечной мышце 3. эритроцитах 4. жировой ткани 5. мозге

Непереносимость молока связана с недостатком фермента: 1. амилазы 2. альдолазы 3. лактазы 4. енолазы 5. глюкокиназы

3) Найти соответствие процесса и субстрата, участвующего в нём

А. Гликолиз Б. Глюконеогенез

1. оксалоацетат 2. малат 3. лактат 4. 2-фосфоглицерат 5. пируват

4.4 Коллоквиум IV по теме: «Метаболизм. Биоэнергетика клеток. Химия и обмен углеводов»

Вопросы, для самостоятельной подготовки

1. Общие принципы обмена веществ и энергии. Катаболизм и анаболизм - основные процессы метаболизма. Роль НАДФН(Н⁺) и АТФ. «Метаболическая воронка».

2. Моносахариды, олигосахариды. Важнейшие представители моносахаридов и олигосахаридов животного организма. Химическое строение, биологическая роль.

3. Полисахариды. Гликоген, его строение и свойства, распространение и роль в организме. Синтез гликогена и его регуляция.

4. Анаэробное расщепление углеводов в организме, его биологическое значение. Энергетический эффект. Понятие о субстратном фосфорилировании.

5. Гликолиз. Регуляция. Энергетический эффект анаэробного распада углеводов.

6. Глюконеогенез. Энергетический эффект процесса. Регуляция.

7. Окислительное декарбоксилирование пировиноградной кислоты. Ферменты и коферменты, участвующие в этом процессе.

8. Цикл трикарбоновых кислот. Его биологическое значение. Регуляция.

9. Связь ЦТК с процессами биологического окисления.

10. Окислительное фосфорилирование. Хемиосмотическая теория П.Митчелла. Синтез АТФ.

11. Энергетический эффект анаэробного и аэробного путей распада углеводов.

12. Пентозофосфатный путь окисления глюкозы в тканях и его биологическая роль.

13. Механизмы регуляции содержания глюкозы в крови. Явления гипо- и гипергликемии. Сахарный диабет. Диагностическое значение сахарных кривых.

14. Синтез и распад гликогена в печени. Гликогенолиз в мышцах. Регуляция этих процессов.

15. Регуляция и нарушения углеводного обмена.

16. Возможные пути превращения глюкозо-6-фосфата в печени.

Варианты письменной части коллоквиума

1. Написать формулу: I. лактозы II. седогептулозы III. D-глюкуроновой кислоты IV. 5-фосфорибозил-1-пирофосфата (ФРПФ) 2. Охарактеризовать фермент: I. ФФК-1 II. изоцитратдегидрогеназу III. транскетолазу IV. АТФ-синтазу 3. Указать пути регуляции: I. цикла трикарбоновых кислот II. гликолиза III. глюконеогенеза IV. распада и синтеза гликогена

4. В каком атоме ацетил-КоА и почему будет радиоактивный 14С из: I. 14С1-глюкозы? II. 14С3-глюкозы? III. 14С4-глюкозы? IV. 14С5-глюкозы? 5. В чем принципиальное отличие: I. субстратного и окислительного фосфорилирования? II. гликолитического и пентозофосфатного путей окисления глюкозы? III. гликолиза и гликогенолиза? IV. аэробного и анаэробного путей распада глюкозы? 6. Сколько молекул АТФ максимально можно получить и каким путем при полном окислении 1 молекулы: I. фруктозо-6-фосфата? II. ДАФ? III. ФЕП? IV. фруктозо-1,6-бисфосфата?

Варианты заданий на компьютерном тестировании

Инструкция к тесту: выбрать все правильные ответы

1. Содержание глюкозы в цельной крови в норме составляет 1. 3–5 г/л 2. 0,6–1,0 г/л 3. 3,3–5,5 ммоль/л 4. 60–100 мг/дл ни одно из вышеперечисленных 2. Конечный продукт анаэробного гликолиза 1. пируват 2. лактат 3. оксалоацетат 4. этанол 5. ацетил-КоА 3. Врожденная непереносимость молока связана с отсутствием в кишечнике фермента из класса 1. оксидоредуктаз 2. трансфераз 3. гидролаз 4. лиаз 5. изомераз 4. Фермент, лимитирующий скорость гликолиза 1. глицеральдегидфосфатдегидрогеназа 2. енолаза 3. фосфофруктокиназа 4. фосфоглицераткиназа 5. триозофосфатизомераза 5. Сколько молекул АТФ может максимально образоваться при полном окислении до CO2 и H2O одной молекулы пирувата? 1. 24 2. 12 3. 38 4. 15 5. 72 6. Количество пировиноградной кислоты в крови увеличивается при недостатке витамина 1. А 2. С 3. D 4. B1 5. B6 7. Какова основная функция пентозофосфатного пути в эритроцитах? 1. образование НАДФН(H+) 2. образование рибозо-5-фосфата 3. расщепление пентозофосфатов 4. синтез АТФ 5. восстановление H2O2 до двух молекул воды 8. Инсулиннезависимый сахарный диабет наступает при 1. нарушении регуляции гликолиза 2. повышенной секреции инсулина 3. повышенной секреции глюкагона 4. пониженной секреции инсулина 5. нарушении инсулин-зависимого поглощения глюкозы 9. Общая стадия глюконеогенеза и гликолиза, катализируемая одним и тем же ферментом 1. фруктозо-6-фосфат ® глюкозо-6-фосфат 2. глюкозо-6-фосфат ® глюкоза 3. оксалоацетат ® фосфоенолпируват 4. фруктозо-1,6-бисфосфат ® фруктозо-6-фосфат 10. Какие продукты могут образоваться непосредственно из глюкозо-6-фосфата? 1. фруктозо-6-фосфат 2. глюкоза 3. 6-фосфоглюконо-d-лактон 4. глюкозо-1-фосфат 5. фруктозо-1-фосфат 11. В присутствии O2 (эффект Пастера) в дрожжевой клетке не образуется 1. пировиноградная кислота 2. рибулозо-5-фосфат 3. сукцинил-КоА 4. этиловый спирт 5. УДФ-глюкоза 12. Гипергликемия наблюдается при 1. стероидпродущирующих опухолях коркового вещества надпочечников 2. гиперфункции щитовидной железы 3. поражении почек 4. сахарном диабете 13. При гидролизе лактозы образуются 1. галактоза 2. фруктоза 3. манноза 4. сахароза 5. глюкоза 14. Ферменты практически необратимых реакций гликолиза 1. триозофосфатизомераза 2. альдолаза 3. фосфофруктокиназа 4. лактатдегидрогеназа 5. гексокиназа 15. Сахароза в организме может расщепляться только в 1. мозге 2. печени 3. мышцах 4. кишечнике 5. селезенке 16. Наибольшее содержание гликогена в организме человека (по массе) в 1. печени 2. мышцах 3. мозге 4. почках 5. жировой ткани 17. Аллостерические регуляторы гликолиза 1. АМФ 2. АТФ 3. фруктозо-6-фосфат 4. цитрат 5. пируват 18. Субстратное фосфорилирование происходит в 1. гликолизе 2. гликогенолизе 3. глюконеогенезе 4. пентозофосфатном пути 5. ЦТК 19. Реакция гидратации в ЦТК происходит при превращении 1. a-кетоглутарата в сукцинил-КоА 2. L-малата в оксалоацетат 3. сукцината в фумарат 4. фумарата в L-малат 5. изоцитрата в a-кетоглутарат 20. Количество глюкозы увеличивается в крови при 1. сахарном диабете 2. потреблении большого количества сахара 3. гиперфункции щитовидной железы 4. введении инсулина 21. Передозировка инсулина вызывает у больного сахарным диабетом 1. глюкозурию и гипергликемию 2. галактоземию 3. гипергликемию 4. гипогликемию 5. креатинурию 22. Какой фермент принимает участие в образовании глюкозо-1-фосфата из гликогена? 1. амилаза 2. фосфорилаза 3. фосфоглюкоизомераза 4. фосфоглюкомутаза 5. глюкокиназа 23. В отсутствие окислительного фосфорилирования выход АТФ в ЦТК составляет (число молекул на один оборот цикла) 1. 0 2. 1 3. 2 4. 38 5. 12 24. Активность ферментов пентозофосфатного пути наименьшая в 1. молочной железе 2. эмбриональной ткани 3. жировой ткани 4. скелетной мышце 5. печени 25. При гидролизе сахарозы образуются 1. галактоза 2. манноза 3. фруктоза 4. глюкоза 5. сорбоза 26. Глюкоза может образоваться в организме из 1. ацетил-КоА 2. пирувата 3. лактата 4. глицерина 5. лейцина

27. Ферменты биосинтеза гликогена из глюкозы 1. амилаза 2. фосфорилаза 3. гликогенсинтаза 4. фосфоглюкомутаза 5. гексокиназа 28. Скорость гликолиза в мышечной ткани уменьшается при добавлении 1. АДФ 2. АТФ 3. цитрата 4. АМФ 29. Из пирувата в одну стадию могут образоваться 1. цитрат 2. оксалоацетат 3. лактат 4. ацетил-КоА 5. глицерин 30. Фруктозо-6-фосфат образуется в 1. гликолизе 2. гликогенолизе 3. пентозофосфатном пути 4. ЦТК 5. глюконеогенезе 31. Фермент присутствующий и в печени и в мышцах 1. глюкозо-6-фосфатаза 2. гексокиназа 3. фруктозо-1,6-бисфосфатаза 4. глюкокиназа 32. Сколько молекул АТФ может синтезироваться при окислительном декарбоксилировании трех молекул пирувата при условии сопряжения этой реакции с окислительным фосфорилированием? 1. 3 молекулы АТФ 2. 6 молекул АТФ 3. 9 молекул АТФ 4. 12 молекул АТФ 5. 38 молекул АТФ 33. Гликогеноз 1 типа (болезнь Гирке) связан с отсутствием в печени фермента 1. глюкокиназы 2. гексокиназы 3. глюкозо-6-фосфатазы 4. фосфофруктокиназы 5. фосфорилазы 34. Недостаточность инсулина сопровождается 1. гипергликемией 2. глюкозурией 3. кетонемией 4. кетонурией 5. гипогликемией 35. Лактат из кровотока превращается в глюкозу в 1. печени 2. сердечной мышце 3. эритроцитах 4. жировой ткани 5. мозге 36. Макроэргические соединения 1. 3-фосфоглицерат 2. ГАФ 3. 1,3-бисфосфоглицерат 4. ацетил-КоА 5. сукцинил-КоА 37. Дисахариды 1. лактоза 2. мальтоза 3. фруктоза 4. крахмал 5. сахароза 38. Через какие атомы углерода связаны остатки глюкозы в молекуле гликогена? 1. 1– 1 2. 1 – 2 3. 1 – 4 4. 1 – 5 5. 1 – 6 39. Дефицит глюкозо-6-фосфатазы в печени приводит к 1. накоплению гликогена в печени 2. гипергликемии 3. увеличению количества лактата в крови 4. глюкозурии 40. Первым продуктом расщепления гликогена в мышцах является 1. УДФ-глюкоза 2. глюкозо-1-фосфат 3. глюкозо-6-фосфат 4. фруктозо-6-фосфат 5. глюкоза 41. Коферменты окислительного декарбоксилирования пировиноградной кислоты 1. НАД+ 2. ТПФ 3. КоА 4. ФАД 5. НАДФ+ 42. ТПФ участвует в 1. гликолизе 2. пентозофосфатном пути 3. окислительном декарбоксилировании пирувата 4. ЦТК 5. Глюконеогенезе 43. Фосфофруктокиназа 1 1. активируется АМФ 2. активируется фруктозо-1,6-бисфосфатом 3. активируется НАДН(H+) 4. инактивируется АМФ 44. Первый фермент пентозофосфатного пути превращения глюкозы 1. альдолаза 2. транскетолаза 3. фосфорилаза 4. трансальдолаза 5. глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа 45. Реакции окисления в цикле Кребса происходят при превращении 1. a-кетоглутарата в сукцинил-КоА 2. L-малата в оксалоацетат 3. сукцината в фумарат 4. фумарата в L-малат 5. изоцитрата в a-кетоглутарат 46. В синтезе гликогена из глюкозы в печени участвуют 1. глюкокиназа 2. гликогенсинтаза 3. фосфорилаза 4. фосфоглюкомутаза 5. глюкозо-1-фосфат-уридилтрансфераза 47. Рибулозо-5-фосфат представляет собой 1. фосфокетогексозу 2. фосфокетопентозу 3. альдопентозу 4. фосфотетрозу 5. фосфокетокислоту 48. Фермент, присутствующий в печени и отсутствующий в мышцах 1. глюкозо-6-фосфатаза 2. гексокиназа 3. пируваткиназа 4. фосфорилаза 49. Кофермент сукцинатдегидрогеназы 1. ФАД 2. ФМН 3. НАД+ 4. НАДФ+ 5. ТПФ 50. Аллостерический фермент в цикле трикарбоновых кислот Кребса 1. аконитаза 2. фумараза 3. сукцинатдегидрогеназа 4. фосфофруктокиназа 5. изоцитратдегидрогеназа 51. Ферменты, отсутствующие в мышцах 1. глюкозо-6-фосфатаза 2. гексокиназа 3. пируваткиназа 4. фосфорилаза 5. глюкокиназа 52. Аминокислота – основной предшественник глюконеогенеза в печени 1. аланин 2. метионин 3. цистеин 4. аргинин 5. серин

Правильные ответы

1.2, 3, 4 2.2 3.3 4.3 5.4 6.4 7.1 8.5 9.1 10.1, 2, 3, 4 11.4 12.1, 2, 4 13.1, 5 14.3, 5 15.4 16.2 17.1, 2, 4

18.1, 2, 5 19.4 20.123 21.4 22.2 23.2 24.4 25.3, 4 26.2, 3, 4 27.3, 4, 5 28.2, 3 29.2, 3, 4 30.1, 2, 3, 5 31.2 32.4 33.3 34.1, 2, 3, 4

35.1 36.3, 4, 5 37.1, 2, 5 38.3, 5 39.1 40.2 41.1, 2, 3, 4 42.2, 3, 4 43.1 44.5 45.1, 2, 3, 5 46.1, 2, 4, 5 47.2 48.1 49.1 50.5 51.1, 5 52.1

Раздел 5: Обмен липидов и его регуляция

Введение

Роль липидов в организме человека и млекопитающих определяется их энергоёмкостью (запас легко высвобождаемой химической энергии) и участием в образовании клеточных мембран. Источником липидов являются в основном пищевые животного и растительного происхождения жиры. Кроме того, вместе с жирами в пищеварительный тракт поступают жирорастворимые витамины и незаменимые жирные кислоты: линолевая, линоленовая и арахидоновая.

Расщепление жиров до глицерина и свободных высших жирных кислот (ВЖК) происходит под действием липазы и конъюгированных (парных) желчных кислот в двенадцатиперстной кишке. В клетках кишечника всосавшиеся мицеллы, содержащие продукты гидролиза жиров, вступают в процесс ресинтеза, образуя жиры, свойственные данному организму. Транспорт липидов кровью к органам и тканям (вследствие их нерастворимости в воде) осуществляется сывороточными липопротеинами (ЛП). В данном разделе студентам предлагается определить кинетику действия липазы и влияние на этот процесс желчных кислот.

Жирные кислоты во многих тканях (особенно в печени и миокарде) вовлекаются в катаболический процесс – β-окисление - протекающий в митохондриях. Все превращения жирных кислот начинаются с их активации, т.е. с образования ацил-КоА. Биосинтез жирных кислот происходит в цитозоле и включает ряд последовательных стадий, завершающихся синтезом пальмитиновой кислоты. Центральную роль в обмене липидов занимает ацетил-КоА.

В синтезе сложных липидов в качестве строительных блоков используются жирные кислоты, глицерин, церамиды, аминоспирты и др. компоненты. В данном разделе предлагается лабораторная работа по определению сложных липидов – фосфатидилхолинов - по фосфору.

Биосинтез холестерина осуществляется преимущественно в печени из ацетил-КоА; важнейшими промежуточными соединениями при этом являются β-гидрокси-β-метилглутарил-КоА (ГМГ-КоА), сквален и ланостерин. Холестерин в составе липопротеинов сыворотки крови переносится к другим органам и тканям, где входит в состав клеточных мембран и служит предшественником для синтеза стероидных гормонов. В данном разделе представлена практическая работа по количественному определению холестерина в сыворотке крови.

Под действием активных форм кислорода и свободных радикалов липиды, входящие в состав клеточных мембран, подвергаются пероксидному окислению, конечным продуктом которого является токсичный продукт – малоновый диальдегид (МДА), количественное определение которого предлагается провести в этом разделе.

Кинетика действия липазы.

Липаза – фермент поджелудочной железы, катализирующий гидролиз сложноэфирных связей в молекуле триацилглицеролов (ТАГ) в тонком кишечнике. Наиболее активно панкреатическая липаза катализирует гидролиз первой и третьей сложноэфирных связей ТАГ с образованием ди- и моноацилглицеролов (ДАГ и МАГ), затем осуществляется гидролиз 2-моноацилглицеролов. В кишечнике могут всасываться только продукты гидролиза ТАГ: глицерин, высшие жирные кислоты, ДАГ и МАГ.

Существенно облегчают процесс переваривания и всасывания липидов желчные кислоты: холевая и хенодезоксихолевая, а также их конъюгаты с глицином и таурином. Сочетание в химической структуре гидрофобной (стероидная часть) и гидрофильной частей придает парным желчным кислотам свойства поверхностно активных веществ (детергентов), которые, образуя микроэмульсию, активируют субстрат липазы и диффузию продуктов липолиза в эпителиальные клетки ворсинок кишечника. При этом фермент и субстрат находятся в разных фазах (несмешивающиеся жидкости) и взаимодействуют только на границе раздела фаз.

Величина поверхности контакта фермента и субстрата определяет скорость гетерогенного катализа: чем больше поверхность, тем выше скорость ферментативной реакции. Детергентное действие желчных кислот приводит к уменьшению силы поверхностного натяжения на границе раздела фаз и крупная капля жира распадается на множество мелких капель, доступных действию фермента.

Дефицит липазы чаще всего связан с заболеваниями поджелудочной железы и сопровождается панкреатической стеатореей (высокое содержание ТАГ в кале без изменения его окраски)

Нарушение экскреторной функции поджелудочной железы при перекрытии её протока (закупорка камнем, воспалительный процесс) при панкреатитах или непосредственном повреждении ткани железы (опухоль, атеросклероз сосудов, кровоизлияние и др.) существенно сказывается на жировом обмене. При стеаторее организм теряет воду и электролиты, затрудняется всасывание жирорастворимых витаминов.

Цель работы

Оценить кинетику действия липазы, определить характер влияния желчи на активность панкреатической липазы.

Принцип метода

В качестве источника нейтрального жира (ТАГ) используют молоко. Действие фермента оценивают по скорости образования кислых продуктов расщепления (свободных ВЖК). Для этого от общего объема смеси жира с липазой через определенные промежутки времени отбирают для титрования равные части. Титрование кислых продуктов гидролиза осуществляют раствором гидроксида натрия (индикатор – фенолфталеин):

R-COOH + NaOH → R-COONa + H₂O

Результаты выражают в миллилитрах пошедшего на титрование раствора щелочи и представляют в виде графика зависимости содержания ВЖК в пробе от времени инкубации пробы.

Выполнение работы

В два стаканчика наливают по 10 мл разбавленного водой (1:1) молока. В один из стаканчиков вносят 1 мл желчи (проба 1), в другой – 1 мл Н₂О (проба 2). Из каждой пробы отбирают в колбу для титрования по 2 мл образовавшейся смеси и титруют 0,01 М раствором NaOH в присутствии фенолфталеина до появления розового окрашивания. Затем в каждую пробу добавляют по 1 мл раствора липазы (вытяжка из поджелудочной железы). Быстро перемешивают струей из пипетки и отмечают время начала реакции. Повторные титрования проводят через каждые 5 минут.

Значение титрования без липазы (время реакции «0») вычитают из величины последующих титрований. В этом случае полученные графики пройдут через начало координат, так как вычитается исходное количество органических кислот, присутствующих в молоке (исходная кислотность молока). Полученные результаты оформляют в виде графика, показывающего динамику отщепления свободных ВЖК во времени под действием липазы в присутствии и в отсутствие желчи.

Пример графика динамики отщепления свободных ВЖК во времени под действием липазы в присутствии (кривая 1) и в отсутствие (кривая 2) желчи.

Схема определения

I. Приготовление исходной смеси (в стаканчиках)
Реактивы и этапы	Проба 1	Проба 2
1. Молоко, разбавленное водой (1:1) 2. Вода 3. Желчь	10 мл - 1 мл	10 мл 1 мл -
II. Определение исходной кислотности молока
	Колба для титрования 1	Колба для титрования 2
1. Исходная смесь (отбирают аликвоту из стаканчика в колбу для титрования) 2. Фенолфталеин (добавляют в каждую колбу) Титруют пробы раствором NaOH (до розового цвета). Значения записывают в таблицу результатов (V0 и V0 ’).	2 мл   1-2 кап	2 мл   1-2 кап
III. Отбор смеси и титрование в присутствии липазы
К оставшейся исходной смеси в оба стаканчика быстро добавляют по 1мл липазы и отмечают время. Через каждые 5 минут отбирают аликвоты в колбы для титрования
	Колба для титрования 1	Колба для титрования 2
1. Аликвота 2. Фенолфталеин Быстро титруют раствором NaOH (до розового цвета). Значения записывают в таблицу результатов (V и V ’) Повторные титрования проводят через каждые 5 минут и результаты заносят в следующую таблицу.	2 мл 1-2 кап	2 мл 1-2 кап

Оформление результатов

t, мин	проба № 1 (с желчью)	проба № 2 (без желчи)
V(NaOH), мл	V-V0	V’(NaOH),мл	V’-V0 ’
0 (определение исходной кислотности молока)	V0 =		V0 ’=
	V =		V’=
		по полученным данным строят кинетическую кривую № 1		по полученным данным строят кинетическую кривую № 2

Выводы

Тестовые задания по теме: «Проверка знаний материала предыдущего семестра»

1) Ответить на каждый вопрос однозначно: «да» или «нет»

1. Смесь свободных аминокислот дает положительную нингидриновую реакцию.

2. Гидрофобность серина выше, чем валина.

3. Специфичность действия ферментов определяется коферментом.

4. Витамины А, В и С относятся к группе водорастворимых витаминов.

5. Все гормоны имеют белковую природу.

6. Глюкокортикоиды стимулируют глюконеогенез.

7. Является ли ТПФ коферментом реакций карбоксилирования?

8. Контролируется ли активность фосфорилазы путем фосфорилирования и дефосфорилирования?

9. Происходит ли разрыв пептидных связей при тепловой денатурации белка?

10. Относится ли тимидин к пуриновым основаниям?

11. Все ли белки имеют четвертичную структуру?

12. Может ли глицерин в печени превращаться в глюкозу?

2) Выбрать один правильный ответ

Белки не могут выполнять функцию: 1. каталитическую 2. транспортную 3. структурную 4. коферментную 5. защитную

При гидролизе лактозы образуются: 1. глюкоза и галактоза 2. манноза и глюкоза 3. галактоза и фруктоза 4. глюкоза и фруктоза 5. две молекулы галактозы

3) Найти соответствие процесса и фермента, участвующего в нём