Корневища и корни родиолы розовой
Качественные реакции.В колбу вместимостью 20 мл помещают 1 г измельченного сырья (см. раздел «Количественное определение), прибавляют 10 мл метилового спирта и нагревают на водяной бане при температуре 650С в течение 20 минут с обратным холодильником. Извлечение фильтруют через бумажный фильтр. На линию старта пластинки «Силуфол УФ-254» микропипеткой наносят 0,002 мл полученного фильтрата. Пластинку с нанесенной пробой помещают в камеру, которую предварительнонасышают не менее 24 ч смесью растворителей: хлороформ-метиловый спирт-вода (26-14-3), и хроматографируют восходящим способом.
Когда фронт растворителей пройдет около 13 см, пластинку вынимают из камеры, сушат на воздухе в течение 5 мин и просматривают в УФ-свете при длине волны 254 нм. На хроматограмме должно обнаруживаться доминирующее пятно фиолетового цвета с Rf, около 0,4 (розавин); допускается наличие других пятен.
Хроматограмму опрыскивают 10% раствором нартия карбоната, помещают в сушильный шкаф и выдерживают при температуре 1100С в течение 2 мин, затем опрыскивают диазотированным сульфацилом и нагревают при температуре 1100С в течение 2 минут. На хроматограмее должно появиться пятно красного цвета с Rf около 0,42 (салидрозид); допускается наличие других пятен.
Примечание. Подготовка пластинок: пластинки «Силуфол УФ-254» 15х15 см разрезают поперек линий накатки на 3 части размером 15х5 см и перед нанесением извлечения высушивают в сушильном шкафу при 1100С в течение 1 ч.
Количественное определение.Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 2 мм. Около 0,5 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 10 мл воды и нагревают на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 15 минут.
Затем извлечение фильтруют через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 50 мл, избегая попадания частиц сырья на фильтр. Экстракцию повторяют еще 3 раза по 10 мл воды, нагревая каждый раз в течение 10 минут и фильтруя в ту же мерную колбу.
К охлажденному фильтрату прибавляют 6 мл 10 % раствора свинца ацетата, 2 мл насыщенного раствора натрия сульфата, тщательно перемешивают, доводят объем раствора водой до метки и фильтруют через бумажный фильтр. Первые 15 мл фильтрата отбрасывают.
В мерную колбу вместимостью 25 мл переносят 5 мл полученного фильтрата, прибавляют 2,5 мл 2 % раствора натрия карбоната, 2,5 мл диазотированного сульфанила, доводят объем раствора водой до метки, перемешивают и через 5 минут измеряют оптическую плотность на спектрофотометре при длине волны 486 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм, используя в качестве раствора сравнения воду.
Содержание салидрозида в пересчете на абсолютно сухое сырье в процентах (Х) вычисляют по формуле:
Где D – оптическая плотность анализируемого раствора; 253 – удельный показатель поглощения (Е1%1см) салидрозида; m – масса сырья в граммах; W – потеря в массе при высушивании сырья в процентах.
Примечания. Приготовление диазотированного сульфацила: 7 г сульфацил-натрия растворяют в 50 мл воды в мерной колбе вместимостью 100 мл, прибавляют 9 мл концентрированной хлористоводородной кислоты и доводят объем раствора водой до метки; 1 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, ставят на лед, прибавляют 50 мл воды, 0,2 мл 10 % раствора натрия нитрита, перемешивают и доводят объем раствора водой до метки. Раствор применяют свежеприготовленным.
Приготовление насыщенного раствора натрия сульфата: 60 г натрия сульфата заливают 100 мл воды и оставляют при частом взбалтывании на 24 ч.
Содержание салидрозида должно быть не менее 0,8 %.
FRUCTUS AMMI MAIDIS
ПЛОДЫ АММИ БОЛЬШОЙ
Качественная реакция. К 2 мл извлечения, полученного согласно методике, описанной в пазделе «Количественное определение», прибавляют 1 мл 10% раствора гидроксида калия в 95% спирте, появляется желтое окрашивание, затем прибавляют 3 капли диазореактива, появляется вишнево-красное окрашивание (фурокумарины).
Количественное определение. Около 2 г (точная навеска) измельченных плодов, отобранных из аналитической пробы, помещают в колбу вместимостью 100мл (с притертой пробкой), прибавляют 50 мл 95% спирта. Колбу закрывают пробкой и взвешивают (с погрешностью до 0,01 г), затем присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 2 часов. Колбу с содержимым охлаждают до комнатной температуры, взвешивают (с погрешностью до 0,01 г) и доводят массу колбы 95% спиртом до первоначальной. Полученное извлечение перемешивают, переносят пипеткой 25 мл в круглодонную колбу вместимостью 50 мл и отгоняют до объема 1-2мл. Затем приливают 0,5 мл хлороформа, смывая со стенок колбы осадок, прибавляют 2 мл 95% спирта, перемешивают и количественно переносят в пикнометр вместимостью 5 мл. Далее промывают ещё раз колбу 95% спиртом, переносят в пикнометр, объем раствора доводят тем же растворителем до метки и перемешивают (раствор А).
Далее анализ проводят одним из следующих методов:
1. На хроматографические пластинки наносят микропипеткой полосы длиной по 2 см полученного извлечения (по 0,01 мл), три полосы раствора стандартного образца аммифурина (по 0,03 мл) и одну полосу оставляют для контрольного опыта.
Пластинки высушивают на воздухе в течение 30 мин. Хроматографирование проводят при температуре 23-25ºС в предварительно насыщенной вертикальной камере в течение 30 минут. Подвижная фаза – петролейный эфир-этилацетат (1:1).
Когда фронт смеси растворителей пройдёт 17 см, пластинки вынимают и сушат на воздухе в течение 40 минут, затем просматривают в УФ свете при 360 нм и отмечают зоны, содержащие фурокумарины на уровне зон стандартного образца аммифурина. Силикагель с отмеченных зон и зоны контрольного опыта количественно переносят в колбы вместимостью 25-30 мл, приливают по 10 мл 95% спирта и содержимое колбы перемешивают в течение 1 часа.
Элюаты фильтруют через беззольные фильтры с синей полосой или через хроматографическую бумагу марки «С». Оптическую плотность растворов измеряют на спектрофотометре при длине волны 352 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм на фоне контрольного опыта. Содержание суммы фурокумаринов (изопимпинеллина, бергаптена и ксантоксина) в процентах (Х) в пересчете на абсолютно сухое сырье вычисляют по формуле:
где D - усредненное значение оптической плотности элюата зоны испытуемого раствора; D0 – усредненное значение оптической плотности элюата зоны раствора стандартного образца аммифурина; m – масса стандартного образца аммифурина; m1 – масса сырья в граммах; W – потеря в массе сырья при высушивании в процентах.
Примечание
Приготовление раствора стандартного образца аммифурина. Около 0,2 г аммифурина (точная навеска) в пересчете на 100% вещество растворяют в 15 мл хлороформа в мерной колбе вместимостью 25 мл. Затем доводят объем раствора хлороформом до метки и перемешивают. Раствор годен для применения в течение 1 месяца.
Приготовление хроматографических пластинок. 6 г силикагеля марки ЗСЛ – 254 5/40 для тонкослойной хроматографии с люминесцентным индикатором – 13% гипса перемешивают с 20 мл воды в фарфоровой ступке и ровным слоем наносят на стеклянную пластинку размером 18×20 см, которую после этого сушат на воздухе в течение суток.
2. 2-3 мкл раствора А вводят в хроматограф с пламенно-ионизационным детектором и получают хроматограмму 1. К 2 мл раствора А прибавляют 1 мл раствора стандартного образца ксантотоксина (раствор Б), 2-3 мкл раствора Б хроматографируют при тех же условиях и получают хроматограмму 2. Хроматографирование проводят на стеклянной колонке (длина 1200 мм, внутренний диаметр 3 мм), наполненной твёрдым носителем – хроматоном N –AW – HMDS с размером частиц 0,16 – 0,20 мм, содержащим в качестве жидкой фазы 10% лукопрена G 1000 (от массы твердого носителя); при температуре испарителя 240ºС при скорости газа-носителя азота 40 мл/мин, водорода 40 мл/мин, воздуха 500 мл/мин, скорость протяжки диаграммной ленты самописца 1 см/мин; шкала усилителя 1:100. Температурный режим колонки при получении хроматограмм 1 и 2 вначале изотермический при 200ºС. После выхода пика изопимпинеллина устанавливают температуру 240ºС и выдерживают примерно 12 минут, дожидаясь выхода из колонки высоколетучих веществ. После этого выключают обогрев термостата, открывают дверцу и охлаждают его до 170ºС. Вновь устанавливают начальный изотермический режим (200ºС). Таким способом хроматографируют поочередно обе пробы не менее 3 раз каждую.
Вначале определяют относительное содержание ксантотоксина в процентах от общей суммы фурокумаринов в сырье. Для этого на хроматограммах с помощью линейки измеряют высоту пика (Н) и время выхода (1) определяемых компонентов с погрешностью +0,5 мм и находят произведение (Н×1) каждого компонента с учетом поправочного компонента. При этом за высоту каждого пика принимают расстояние от максимума пика до его базовой линии, а за время выхода принимают расстояние от точки ввода до максимума пика. Поправочные коэффициенты для ксантотоксина и бергаптена равны 1, а для изопимпинеллина 1,073.
Используя параметры (Н и 1) хроматограммы 1 находят относительное содержание ксантотоксина в процентах (Хкс) в сумме фурокумаринов по формуле:
где Н – высота пика компонента на хроматограмме в миллиметрах; 1 – время выхода компонента в миллиметрах; 1,073 – коэффициент пересчета для изопимпинеллина.
Индексы «кс», «б», «из» относятся соответственно к величинам для ксантотоксина, бергаптена и изопимпинеллина.
Используя параметры пиков (Н и 1) ксантотоксина и изопимпинеллина на хроматограммах 1 и 2 также с учетом попоравочных коэффициентов находят содержание суммы фурокумаринов(изопимпинеллина, бергаптена и ксантотоксина) в сырье в процентах (Х) по формуле:
где m – масса стандартного образца ксантотоксина, взятая для приготовления раствора, в г; m1 – масса сырья, в г; Хкс – относительное содержание ксантотоксина в процентах от общей суммы фурокумаринов в сырье; r1 – отношение (Н×1)кс полученное на хроматограмме 1; r2 – отношение (Н×1)кс полученное на хроматограмме 2; W – потеря в массе при высушивании, в процентах.
Примечание
Приготовление раствора стандартного образца ксантотоксина. Около 0,04 г (точная навеска) ксантотоксина – стандарта растворяют в 95% спирте в мерной колбе вместимостью 100 мл, доводят объем раствора тем же растворителем до метки и перемешивают. Хранят раствор в темном месте в колбе с притертой пробкой. Раствор годен для применения в течение одного месяца.
Числовые показатели. Суммы фурокумаринов (изопимпинеллина, бергаптена и ксантотоксина) не менее 0,6 %; влажность не более 10%; золы общей не более 8%; органической примеси не более 5%; минеральной примеси не более 1%.
Зрелые плоды амми большой семейства сельдерейных Apiaceae используются в качестве лекарственного сырья для получения препаратов «Аммифурин», который представляет собой сумму фурокумаринов – изопимпинеллина, бергаптена и ксантотоксина.
FRUCTUS PSORALEAE
ПЛОДЫ ПСОРАЛЕИ
Качественная реакция.К 2 мл извлечения (см. «Количественное определение») прибавляют 5 мл 0,1 н спиртового раствора гидроксида калия. Колбу с раствором нагревают на водяной бане и приливают 1 мл свежеприготовленного диазореактива; постепенно появляется вишнево-красное окрашивание (фурокумарины).
Количественное определение. Количественное определение псоралена и ангелицина в плодах псоралеи костянковой проводится хроматоколориметрическим методом.
Аналитическую пробу плодов псоралеи измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 0,5 мм. Около 1 г (с погрешностью до 0,01 г) измельченных плодов помещают в коническую колбу с притертой пробкой вместимостью 100 мл, заливают 25 мл петролейного эфира с температурой кипения 40-70ºС встряхивают на механическом встряхивателе в течение 30 минут и дают отстояться в течение 1 часа. Петролейно-эфирное извлечение осторожно декантируют. Обработку петролейным эфиром повторяют до полного обезжиривания (проба 0,1 мл извлечения на фильтровальной бумаге). Колбу с содержимым оставляют в вытяжном шкафу в течение 4 часов до исчезновения запаха петролейного эфира. Затем к содержимому в колбе приливают 10 мл 60% водного ацетона, закрывают колбу притертой пробкой и непрерывно встряхивают в течение 4 часов и 15 часов настаивают. Извлечение отфильтровывают через складчатый фильтр.
Пластинку «Silufol» размером 150×150 мм делят на четыре части. На стартовую линию двух частей наносят в виде полосы размером 30 мм по 0,05 мл полученного извлечения, на третью часть 0,1 мл (25 мкг) раствора А стандартного образца псоралена, четвертая часть пластинки служит контролем при спектрофотометрировании. Пластинку с нанесенными пробами высушивают на воздухе в течение 20 минут, затем помещают в камеру со смесью растворителей петролейный эфир – этилацетат (2:1) и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей дойдёт до конца пластинки (30 мин), её вынимают из камеры, сушат на воздухе до исчезновения запаха растворителей (1 час), просматривают в УФ-свете при 254 нм и отмечают пятно фиолетового свечения псоралена на уровне пятна свидетеля (стандартного образца псоралена) и выше пятно изопсоралена того же свечения. Отмечают так же равную по площади зону чистого сорбента для контроля. Затем отмеченные зоны сорбента переносят в колбы со шлифом вместимостью 100 мл, заливают 20 мл 95% спирта, закрывают пробкой и элюируют в термостате при температуре 55 - 60ºС в течение 3 часов.
После охлаждения элюат отфильтровывают через складчатый бумажный фильтр и измеряют его оптическую плотность на спектрофотометре при длине волны 246 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм по сравнению с элюатом из контрольной зоны.
Параллельно измеряют оптическую плотность раствора Б стандартного образца псоралена. В качестве раствора сравнения используют 95% спирт.
Содержание псоралена (или изопсоралена) в процентах (Х) в пересчете на абсолютно-сухое сырье вычисляют по формуле:
где D1 – оптическая плотность исследуемого раствора; D0 – оптическая плотность раствора Б стандартного образца псоралена; 0,000005 – концентрация раствора стандартного образца псоралена, в граммах на миллилитр; m – масса сырья в граммах; v1 – объем ацетона, взятый для извлечения в мл; v2 – объем извлечения, нанесенный на хроматограмму, в мл;
v3 – объем спирта, взятый для элюирования, в мл; W – потеря в массе при высушивании сырья, в процентах.
Суммарное содержание фурокумаринов (псоралена и изопсоралена) определяют их арифметическим сложением.
Примечание:
Приготовление раствора стандартного образца псоралена. 0,0500 г (точная навеска) стандартного образца псоралена растворяют при энергичном встряхивании в 95% спирте в мерной колбе вместимостью 200 мл и доводят объем раствора тем же спиртом до метки (раствор А). 0,5 мл раствора А вносят в мерную колбу вместимостью 25мл и доводят объем раствора 95% спиртом до метки. Растворы хранят в темном месте в колбе с притертой пробкой. Срок хранения 6 месяцев. 1 мл полученного раствора содержит 0,000005 г псоралена.
Приготовление 60% водного раствора ацетона. Смешивают 600 мл ацетона и 400 мл воды.
Числовые показатели.Содержание суммы фурокумаринов (псорален и изопсорален) не менее 0,9%; влажность не более 10%; золы общей не более 8%; поврежденных и недоразвитых плодов не более 5%; других частей растения (стебли, листья, оси соцветий) не более 10%; органической примеси не более 4%; минеральной примеси не более 2%.
Плоды псоралеи костянковой семейства бобовых используются в качестве лекарственного сырья для получения препарата «Псорален», представляющего собой смесь псоралена и ангелицина и относится к фотосенсибилизирующим средствам.
FOLIA FICUS CARICAE
ЛИСТЬЯ ИНЖИРА
Количественное определение. Около 5 г (с погрешностью до 0,01 г) листьев инжира, измельченных и просеянных сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм, помещают в коническую колбу с притертой пробкой вместимостью 250 мл; заливают 50 мл 60% водного ацетона и интенсивно встряхивают в течение 3 часов на вибрационном аппарате и настаивают 15 часов. Извлечение отфильтровывают через складчатый бумажный фильтр.
Стеклянную пластинку размером 13×18 см с незакрепленным слоем нейтрального оксида алюминия (II) делят на 4 части. На стартовую линию двух частей наносят в виде полосы по 0,1 мл полученного извлечения: на третью – 25 мл раствора стандартного образца псоралена (раствор А); четвертая часть служит фоном (контрольная проба) при спектрофотометрировании. Пластинку с нанесенными пробами высушивают на воздухе в течение 10 мин, а затем помещают в камеру с этиловым эфиром и хроматографируют восходящим методом. Когда фронт растворителя дойдет до конца пластинки, её вынимают из камеры, сушат на воздухе до исчезновения запаха этилового спирта (1-2 часа) и просматривают в УФ свете при 254 нм. Псоберан проявляется в виде голубого пятна на уровне пятна стандартного образца псоралена. Отмеченную зону сорбента с псобераном переносят в колбу со шлифом вместимостью 50 – 100 мл, заливают 20 мл 95% этиловым спиртом, закрывают пробкой и элюируют в термостате при t = 40 - 50ºС в течение 3 часов.
После охлаждения элюат отфильтровывают через воронку со стекляннм фильтром №4 (элюат должен быть прозрачным) и определяют его оптическую плотность на спектрофотометре при длинах волн 246, 268 и 298 нм в кювете с толщиной слоя 1 см по отношению к элюату (95% этиловый спирт) с равным по площади оксидом алюминия, хроматографированного в тех же условиях без вещества (контрольная проба).
Параллельно при тех же длинах волн измеряют оптическую плотность раствора стандартного образца псоралена.
Процентное содержание псоберана Х в пересчете на абсолютно сухую массу вычисляют по формуле:
где D1 – оптическая плотность испытуемого раствора при 298 нм; D0 – оптическая плотность раствора стандартного образца псоралена при 298 нм; А – концентрация раствора стандартного образца псоралена, г/мл; m – масса навески, г; V – общий объем извлечения, мл; V1 – объем извлечения, нанесенного на хроматограмму, мл; V2 – объем элюата, мл; W – потеря в массе при высушивании,%.
Процентное содержание псоралена Х в пересчете на абсолютно сухую массу вычисляют по формуле:
где D1246 и D1268 – оптическая плотность испытуемого раствора при длинах волн 246 и 268 нм; D246 и D268 – оптическая плотность раствора стандартного образца псоралена при длинах волн 246 и 268 нм; А – концентрация раствора стандартного образца псоралена, г/мл; m – масса навески сырья, г; V – общий объем извлечения, мл; V1 – объем извлечения, нанесенного на хроматограмму, мл; V2 – объем элюата, мл; W – потеря в массе сырья при высушивании, %.
Содержание псорабена не менее 0,7%. Содержание псоралена не менее 0,42%.
Примечание:
Приготовление стандартного образца псоралена. 0,05 г (точная навеска) стандартного образца псоралена растворяют при энергичном встряхивании в 95% этиловом спирте в мерной колбе вместимостью 200 мл и доводят объем раствора тем же спиртом до метки (раствор А). 0,6 мл раствора А вносят в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят объем раствора 95% этиловым спиртом до метки (раствор В). Раствор хранят в темноте в колбе с притертой пробкой. Срок хранения 6 месяцев, 1 мл раствора стандартного образца содержит 0,000006 г псоралена.
Приготовление 60% водного раствора ацетона. Смешивают 600 мл ацетона и 400мл воды.
Листья культивируемого кустарника или дерева смоковницы обыкновенной (инжира) семейства тутовых (Moraceae) используются в качестве лекарственного сырья для получения препарата «Псоберан», представляющего собой смесь псоралена и бергаптена. Количественное определение псоралена и бергаптена проводится хроматоспектрофотометрическим методом.