Определение количества билирубина

· Приготовьте пробы согласно таблице.

Реактивы.	Общий билирубин, мл.	Связанный билирубин, мл.	Раствор сравнения, мл.
Сыворотка крови.	0,25	0,25	0,25
Кофеиновый реактив.	2,00	-	2,00
Физиологический раствор.	-	2,00	-
Диазореактив.	0,25	0,25	0,25

· Смеси аккуратно перемешать.

· Оставить стоять связанный билирубин на 10 минут, общий билирубин на 20 минут.

· Измерить оптическую плотность общего (Еобщ) и связанного (Есвяз) билирубина против раствора сравнения при длине волны 540 нм в кювете на 5 мм.

Расчетрезультатов проводим по формулам:

Собщ = К * Еобщ (мкмоль/л).

Ссвяз = К * Есвяз (мкмоль/л).

Ссвоб = Собщ – Ссвяз (мкмоль/л).

Норма билирубина в плазме крови:

· общий - 3,4-20,5 мкмоль/л.

· непрямой 1,7-17,1 мкмоль/ л.

· прямой 0,86-5,3 мкмоль/л.

Клинико-диагностическое значение

Определения уровня билирубина в крови.

Одним из важнейших пигментов и продуктов распада гемоглобина является билирубин. Уровень общего, прямого и связанного билирубина показывает работу печени и почек, а также уровень распада эритроцитов в крови. Определение общего билирубина и его производных в крови, моче и кале производят для дифференциальной диагностики различных видов желтух.

Общий билирубин состоит из 2 фракций:

Непрямой (свободный, комплекс с альбуминами).

Прямой (конъюгированный, связанный с глюкуроновой кислотой).

Увеличение содержания билирубина сопровождается желтушной окраской слизистых оболочек и кожных покровов. Легкая форма желтухи до 86 мкмоль/л, среднетяжелая 87-159 мкмоль/л, тяжелая 160 мкмоль/л.

Содержание непрямого (свободного) и общего билирубина в крови возрастает при:

· повышенном распаде эритроцитов (гемолитическая анемия);

· физиологической желтухе новорожденных;

· врожденных и приобретенных нарушениях превращения свободного билирубина в связанный в печени (синдром Жильберта).

Концентрация прямого (связанного) билирубина в крови увеличивается при воспалительных процессах в печени (гепатит).

Содержание прямого и общего билирубина в крови увеличивается при механической желтухе.

Содержание общего билирубина увеличивается также при приеме лекарств, увеличивающих гемолиз (н-р аспирин, тетрациклин).

Уровень прямого билирубина может увеличиваться под действием лекарств, задерживающих желчь в печени (холестаз) н-р пиницилин, эритромицин, пероральных контрацептивов, никотиновой кислоты.

Ответьте на вопросы:

1. Нарисуйте схему распада и синтеза гемоглобина.

2. Расскажите о причинах и лабораторной диагностике гемолитической желтухи.

3. Расскажите о причинах и лабораторной диагностике паренхиматозной желтухи.

4. Расскажите о причинах и лабораторной диагностике механической желтухи.

5. Какие заболевания могут сопровождаться желтухами? Почему?

Практическая работа

«Тимоловая проба».

Цели практической работы:

· закрепить знания о функциях печени;

· изучить понятие о функциональных пробах печени;

· научиться проводить и анализировать тимоловою пробу.

Задания для самостоятельной работы:

1. Перепишите в тетрадь принцип и методику проведения практической работы.

2. Оборудуйте рабочее место для практической работы.

3. Выполните практическую работу.

4. Сделайте необходимые расчеты.

5. Заполните бланк анализа. Оцените полученные результаты.

6. Сделайте вывод по работе и рисунки.

7. Ответьте на дополнительные вопросы.

Принцип:

При взаимодействии сыворотки с тимоловым буфером появляется мутность вследствие образования комплекса «глобулин-тимол-липоид». Интенсивность помутнения зависит от количества взаимного соотношения отдельных белковых фракций.

Реактивы: Тимоловый реактив. Физиологический раствор. Сыворотка крови. Раствор сульфата бария. Раствор серной кислоты 0,2М.

Оборудование: 1. ФЭК с кюветой на 1 см. 2. Штатив с пробирками. 3.Пипетки на 1, 5 мл. 4.Стеклограф. 5.Фильтровальная бумага.

Ход работы:

· Провести исследование согласно таблице.

Реактивы.	Опыт, мл.	Контроль 1, мл.	Контроль 2, мл.
Сыворотка крови.	0,05	-	0,05
Тимоловый реактив.	3,00	3,00	-
Физраствор.	-	0,05	3,00

· Смеси перемешать и оставить стоять на 30 минут.

· Смеси вновь перемешать и измерить оптическую плотность опытно пробы против контроля 1.

· Если сыворотка хилезная измерить оптическую плотность пробы против контроля 2.

· Измерение проводить при длине волны 620-690 нм в кювете на 5 мм.

Расчет:

Расчет проводят по калибровочному графику, для постороения которого готовят серию растворов согласно таблице.

№ пробы.	Раствор серной кислоты, мл.	Раствор сульфата бария, мл.	Единицы помутнения, S – Н.
	4,5	1,5
	3,0	3,0
	1,5	4,5
	-	6,0

Растворы смешивают и ровно через 30 минут измеряют оптическую плотность против дистиллированной воды при длине волны 620-690 нм в кювете на 1 см. Перед измерением пробы еще раз перемешивают.

Норма тимоловой пробы 0 – 4 единиц SН (единиц помутнения Shank-Hoagland). Предельные величины – 4-5 ед.SН, патология – свыше 5 ед. SН.

Примечание:

· Для получения правильных результатов необходимо исключить алиментарную гиперлипидемию.

· Сыворотку хранят при температуре 21 – 27 С – несколько дней.

· При охлаждении сыворотки крови получают завышенные результаты, при более высоких температурах – заниженные.

· Результаты пробы завышаются при употреблении минеральных сульфатных вод, гемолизе, липемии, высокой билирубинемии, приеме лекарственных средств (цефалотин, индометацин, линкомицин идр.).

· Результаты пробы завышаются при анализе оксалатной плазмы, употреблении глицина, гепарина, желчные кислоты.