Лабораторная работа № 3.7. Определение скорости оседания эритроцитов

Таблица 12 -Нормативная величина СОЭ

Новорожденные	Мужчины и дети старше 1 года	Женщины	Беременные женщины	Пожилые обоего пола
1-2 мм/ч	1-10 мм/ч	2-15 мм/ч	50-60 мм/ч	15-20 мм/ч

Цель работы-Определить скорость оседания эритроцитов у человека методом Панченкова

Оборудование:прибор Панченкова, лимоннокислый натрий, скарификатор, донорская кровь или образцы крови.

ХОД РАБОТЫ

Прибор Панченкова представляет собой штатив, в котором строго в вертикальном положении закреплены специальные капилляры. Определение производится в специальных градуированных капиллярных пипетках, имеющих просвет 1 мм и длину 100 мм. Они градуированы в миллиметрах (мм). Метка «0» находится на расстоянии 100 мм от нижнего конца; метка «К» (кровь) располагается на уровне «0», метка «Р» (реактив) – на уровне 50 мм (рис. 17).

Рис. 17 Прибор Панченкова

а – общий вид; б) – капилляр с метками; К – кровь; Р - реактив

1. Капилляр предварительно промыть 3,7% раствором цитрата натрия. Затем набрать цитрат натрия до метки «Р» и выдуть его на часовое стекло.

2. В тот же капилляр двукратно набрать кровь до метки «К»). Количество цитрата и крови может быть разное – 25 мкл цитрата и 100 мкл крови, 50 мкл цитрата и 200 мкл крови, но соотношение их должно быть обязательно 1:4.

3. Смешать обе порции крови с цитратом на часовом стекле. Смесь набрать в капиллярную пипетку до метки «0».

4. Капилляр с цитратной кровью поставьте в штатив вертикально между двумя резиновыми прокладками и оставьте на 1 час. Через час определите величину оседания по столбику плазмы над осевшими эритроцитами: деление капиллярной пипетки, соответствующее границе плазмы и эритроцитов, запишите как величину СОЭ, выраженную в мм/ч.

5. Важно поддерживать определенную температуру в помещении – 18-22⁰С (при более низкой температуре оседание замедляется, при более высокой ускоряется).

Оформление протокола

1.Занесите данные исследования в таблицу 13.

Таблица 13 -Результаты собственных исследований

Пол	СОЭ, мм/ч
Полученное значение	Нормативное значение
Мужчины		1-10 мм/ч
Женщины		2-15 мм/ч

2.Сравните полученные результаты с нормативными.

3.Сделайте вывод.

Контрольные вопросы для самостоятельного изучения

1. Суспензионные свойства крови.

2. Что такое СОЭ? Нормативные показатели СОЭ у мужчин и женщин.

3. Какие факторы оказывают влияние на СОЭ?

4. Причины повышения СОЭ.

5. Причины понижения СОЭ.

6. Какова роль вязкости крови в реакциях оседания эритроцитов

7. Каково влияние количества форменных элементов крови на величину СОЭ?

8. Какой реактив и с какой целью используют для определения СОЭ

9. Особенности СОЭ у детей.

Лабораторная работа 3.8. Изучение различных видов гемолиза

Оборудование:штатив, восковой карандаш,5 пробирок, физиологический раствор, дистиллированная вода, 5% раствор аммиака, 0.1. % раствор НСl и цитратная кровь любого животного.

ХОД РАБОТЫ

1. Пронумеруйте 5 пробирок восковым карандашом.

2. Добавьте:

В 1-ю пробирку – 3 мл физиологического раствора;

Во 2-ю пробирку – 3 мл дистиллированной воды;

В 3-ю пробирку – 3 мл 0.1 % раствор НCl

В 4-ю пробирку - 3 мл 5% раствора аммиака.

В 5-ю пробирку – 5мл цитратной крови.

3. Во все 4 пробирки вносят пипеткой по 2 капли из 5-й пробирки.

4. Оставшуюся в 5-й пробирке кровь помещают на 1 час в морозильную камеру холодильника. Затем пробирку вынимают и оттаивают в стакане с горячей водой.

5.Рассматривая содержимое всех 5-ти пробирок, определяют наличие или отсутствие гемолиза в каждой пробирке.

6. Запишите результаты исследования в таблицу 14.

Таблица 14 -Результаты гемолиза

№/№	Содержимое пробирок	Наличие «+» или Отсутствие «-» гемолиза	Вид гемолиза
	Физиологический раствор (3 мл)
	Дистиллированная вода (3 мл)
	0.1. % раствор НСl (3мл)
	5% раствор аммиака (3мл).
	Цитратная кровь

7. Объясните полученные результаты.

Контрольные вопросы для самостоятельного изучения

1. Понятие о гемолизе эритроцитов.

2. Виды гемолиза.

3. Причины осмотического гемолиза.

4. Причины химического гемолиза.

5. Как выглядит гемолизированная кровь?

6. Какие виды гемолиза могут быть в организме?

Лабораторная работа 3.9. Определение границ осмотической резистентности эритроцитов

Оборудование:8 пробирок, штатив, восковой карандаш, растворы NaCl убывающей концентрации, кровь, микроскоп, предметные и покровные стекла.

ХОД РАБОТЫ

1.Приготовление растворов поваренной соли NaCl различной концентрации.Возьмите 8 пробирок и пронумеруйте их восковым карандашом. В каждую пробирку налейте дистиллированную воду и 0,9% раствор NaCl в количествах, указанных в таблице 15.

Таблица15 -Получение раствора хлорида натрия разной концентрации

Номер пробирки	Раствор NaCl 0,9%, мл	Вода дистиллированная, мл	Полученная концентрация раствора NaCl, %	Степень гемолиза
	-	-	0,9
	4,5	0,5	0,8
	4,0	1,0	0,7
	3,5	1,5	0,6
	3,0	2,0	0,5
	2,5	2,5	0,4
	2,0	3,0	0,3
	1,5	3,5	0,2

Степень гемолиза: «–» - отсутствует; «+» - частичный, выражен слабо, «++» - частичный, выражен хорошо, «+++» - полный.

2. В каждой из 8 пробирок, находящихся в штативе, получится по 5 мл раствора NaCl разной концентрации: 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%.

3. Внесите в каждую пробирку по 5 капель крови.

Опыт 1.

На 4 предметных стекла поместите по капле раствора NaCl убывающей концентрации: 0,9%, 0,6%, 0,4%,0,2% с добавленной кровью. Накройте капли покровными стеклами и поместите препараты под окуляр микроскопа (большое увеличение). Изучите форму и размер эритроцитов в растворах разной концентрации.

Опыт 2.

Через 5-10 минут определите, в каких пробирках произошел гемолиз. Начало гемолиза выглядит как легкое порозовение раствора, а полный – по интенсивной алой окраске раствора. Полностью гемолизированная кровь прозрачна («лаковая кровь»), что указывает на предел максимальной резистентности эритроцитов. В норме минимальная осмотическая резистентность колеблется между 0,48-0,46%, максимальная – между 0,34-0,32%.

Оформление протокола.

1. Занесите данные таблицы 9 в рабочую тетрадь. Зарисуйте пробирки, отметьте гемолиз.

2. Постройте график кривой осмотической резистентности эритроцитов по полученным данным.

3.Сделайте вывод о механизмах наблюдаемого гемолиза в каждом конкретном случае.