Лабораторная работа № 3.5. Исследование пищеварительного лейкоцитоза

Цель работы - овладеть техникой подсчета лейкоцитов и выяснить влияние еды с аппетитом на число лейкоцитов.

Оборудование:

Стерильные перчатки, скарификаторы, спирт, вата, камера Горяева. Объект исследования - человек.

Ход работы:

1.Подготовить для исследований 2 группы студентов (по 5 человек): в состоянии натощак и плотно позавтракавших.

2.Произвести забор капиллярной крови и посчитать число лейкоцитов в камере Горяева в каждой группе студентов.

Контрольные вопросы для самостоятельного изучения

1.Строение и функции лейкоцитов.

2.Основные виды лейкоцитов.

3.Понятие о лейкоцитарной формуле.

4.Агранулоциты и их функции.

5.Гранулоциты и их функции.

6.Лейкоцитозы и лейкопении.

7.Изменения количества лейкоцитов и особенности лейкоцитарной формулы

у детей.

1. Развитие Т- и В- звеньев специфического иммунитета.

Лабораторная работа 3.6. Подсчет количества эритроцитов в крови (в счетной камере Горяева)

Цель работы- Овладеть техникой подсчета эритроцитов и усвоить их физиологические функции

Оборудование:микроскоп, смеситель, счетная камера Горяева, покровное стекло, спирт, вата, скарификатор, разводящая жидкость (3% раствор хлорида натрия).

ХОД РАБОТЫ

Поместить камеру Горяева под микроскоп и рассмотреть сетку.

I

Рис. 16 Подсчет эритроцитов в счетной камере Горяева

I-устройство камеры: 1-предметное стекло; 2-средний брусок; 3-боковые бруски; 4-предметное стекло.

II-порядок подсчета эритроцитов (обозначен стрелками).

III-сетка счетной камеры с эритроцитами при большом увеличении.

А-смеситель;

Б-схема счетной камеры: отшлифованное толстое плоское предметное стекло с тремя наклеенными площадками. Средняя из них расположена ниже боковых на 0,1 мм. На ней нанесена сетка. Над средней площадкой к боковым возвышениям предметного стекла притирают покровное стекло;

В- сетка камеры. Обычно пользуются камерой с двумя сетками, разграниченными глубокой поперечной канавкой. Сетка Горяева состоит из 225 больших квадратов (15х15). Большие квадраты, расчерченные вертикально и горизонтально на 16 малых квадратов, чередуются с квадратами, разделенными только вертикальными или горизонтальными линиями, и квадратами чистыми без линий. Большие квадраты, состоящие каждый из 16 малых, служат при счете ориентирами.

2. Слегка увлажнив дыханием покровное стекло, кладут его на боковые площадки счетной камеры и движением больших пальцев притирают его до появления цветных колец Ньютона. Пальцами можно нажимать только над боковыми площадками, так как при надавливании на середину покровного стекла, то есть непосредственно над сеткой, оно ломается.

3. Налить в пробирку 4 мл 3% раствора хлорида натрия.

4. Ватным тампоном протереть мякоть 4-го пальца левой руки и скарификатором проколоть палец, отступив от середины на 1-2 мм влево.

5. Первую каплю крови стереть сухим тампоном. Во вторую каплю погрузить кончик смесителя, держа его вертикально. Набрать 0,02 мл крови до метки. Выдуть кровь из смесителя в пробирку с раствором хлорида натрия и промыть его три раза дистиллированной водой.

6. Кровь тщательно перемешать с раствором, вращая пробирку между ладонями в течение 2-х минут.

7. Каплю разведенной крови внесите пипеткой или стеклянной палочкой под притертое покровное стекло камеры, держа конец пипетки или палочки около края покровного стекла. После заполнения камеру оставьте на 1-2 минуты в покое для оседания форменных элементов, затем приступайте к подсчету при малом увеличении микроскопа в затемненном поле зрения.

8. Эритроциты считайте в 5 больших квадратах сетки, разграфленных на 16 малых и расположенных по диагонали. Поскольку распределение клеток в камере может быть неравномерным, необходимо под микроскопом отыскать левый верхний разграфленный большой квадрат, подсчитайте количество находящихся в нем эритроцитов, затем по диагонали вниз и направо найдите следующий разграфленный квадрат и т.д.

9. Найденное в каждом квадрате число эритроцитов заносите в протокол опыта.

1 квадрат 2 квадрат 3 квадрат 4 квадрат 5 квадрат

10. Во избежание повторного подсчета одних им тех же эритроцитов руководствуйтесь следующим правилом: подсчитывайте все эритроциты, находящиеся внутри малого квадрата; на разграничительных линиях подсчитывают их только тогда, когда они большей своей половиной заходят внутрь квадрата. Клетки, пересеченные разграничительной линией пополам, подсчитывайте лишь на двух сторонах квадрата – левой и верхней; клетки, выходящие большей своей половиной за пределы разграничительных линий, совсем не считайте. Результаты подсчета эритроцитов в каждом из 5 больших квадратов записывайте отдельно и суммируйте

11. Определите количество эритроцитов в 1 мкл цельной крови. Для этого полученное число эритроцитов (Э) делим на 80 (в 1 большом квадрате находится 16 маленьких: 5х16=80). Объем пространства над одним маленьким квадратом равен 1/4000 мм³. Умножая полученное число на 4000, получаем количество эритроцитов в 1 мм³ разведенной крови; умножая на 200 (кратность разведения), получаем количество эритроцитов в 1 мм³ цельной крови. Итоговая формула для исчисления следующая:

Э х 4000 х 200

Число эритроцитов в 1 мкл = ―――――――

где Э – найденная сумма эритроцитов в 5 больших квадратах (80 маленьких) квадратах.

Для получения боле точного результата произведите подсчет в двух сетках и используйте для подсчета средний арифметический результат.

Оформление протокола

1. Произведите подсчет эритроцитов, согласно инструкции, в 1 мкл крови.

2. Зарисуйте камеру Горяева.

3. Занесите результаты собственных исследований в таблицу 11.

Таблица 11 -Результаты собственных исследований

Клетки крови	Пол	Количество ед/мкл
Полученные значения	Норма
Эритроциты	М		4,0-5,0 млн. в 1 мкл крови
Ж		3,7-4,7 млн. в 1 мкл крови

4. Сделайте заключение о соответствии полученных результатов нормативным.

Контрольные вопросы для самостоятельного изучения

1.Особенности строения эритроцитов.

2.Физиологические функции эритроцитов.

3.Устройство счетной камеры Горяева.

4.Методика подсчета эритроцитов.

5.Нормативная концентрация эритроцитов у мужчин и женщин, причины понижения и повышения.

6.Автоматизированные методы подсчета эритроцитов.

7.Изменения количества эритроцитов у детей. Физиологическая желтуха.

Автоматизированные методы подсчета форменных элементов крови:

1.Фототметрический метод широко используется в современных лабораториях. Основан на измерении степени погашения света определенных длин волн взвесью эритроцитов в приборе фотоэлектроколориметре (ФЭК – 1). Процент задержанного света прямо пропорционален числу эритроцитов. Снимают показания прибора и определяют количество эритроцитов по специальной таблице.

2. Электронно – автоматический метод. В основе лежат два принципа:

-Импульсивный принцип – основан на разнице электропроводности частиц крови и жидкости, используемой для разбавления («Целлоскоп» и «Кальтер»). Эритроциты, взвешенные в изотоническом растворе хлорида натрия, всасываются в специальный капилляр с платиновыми электродами. Скачкообразные повышения сопротивления, возникающие при прохождении частиц крови через капилляр, вызывают электрические импульсы, амплитуда которых пропорциональна количеству частиц.

- электронно – автоматический метод. Подсчет лейкоцитов в современных счетчиках частиц производят по тому же принципу, что и эритроцитов. Предварительно кровь размешивают и смешивают с каким –либо лизирующим эритроциты реактивом. В автоанализаторе «Техникон» в качестве такового применяют раствор уксусной кислоты, а в аппаратах «Кальтер» и «Целлоскоп» - сапонин и сапоглобин.