Результаты и их обсуждения

Содержание

Введение

1. Литературный обзор

1.1 Характеристика бактерий рода Bacillus

1.2 Характеристика видов Bacillus

1.3 Цели и задачи исследования

2. Экспериментальная часть

2.1 Объекты исследования

2.2 Методы исследования

2.3 Результаты и их обсуждение

Выводы

Список использованной литературы

Введение

Актуальность исследования. Микроорганизмы рода Bacillus широко распространены в природе, вызывающих порчу пищевых продуктов и способных вызывать пищевые отравления, основана бактериологических исследованиях. Применение бактерий идентификации вытекает из их специфичности действия, которая может быть настолько выражена, что позволяет дифференцировать не только отдельные виды, но и серологически неотличимые тех местах, где есть чувствительные к ним бактерии. Чем богаче тот или иной субстрат (почва, вода, выделения человека и животных и т. д.) микроорганизмами, тем в большем количестве в нем встречаются соответствующие фаги [2].

Идентификация бактерий представляет собой процедуру, включающую определение биологических свойств штамма, который идентифицируют, с использованием устройства для анализа биологических свойств, и затем, в соответствии с результатами определения биологических свойств штамма, определение его рода и вида с использованием способа идентификации с помощью устройства для идентификации или средств поиска на основе идентификации кодирования. В настоящее время существуют две разновидности способа идентификации бактерий: способ идентификации с двойным ветвлением и способ количественной идентификации

В работе были использованы классические микробиологические методы идентификации бактерии рода Bacillus.

Литературный обзор

1.1 Характеристика бактерий рода Bacillus

Род Bacillus. Этот род, насчитывающий 77 видов [13], объединяет обширную группу строго аэробных или факультативно анаэробных грамположительных хемооргофных микроорганизмов палочковидной формы, образующих термоустойчивые эндоспоры. Род Bacillus обычно связан с почвой, но его представителитакже выделяется из воды, пылии воздуха. Эти бактерии могут вызывать порчу продуктов питания – картошки, хлеба, молока. Терморезистентные споры бацилл создают проблемы в производстве сухого молока, которые не погибают в процессе обезвоживания и попадают в готовые продукты. Представители Bacillus отличаются высоким и разнообразным спектром биологической активности. Часто обладая явным антагонизмом к патогенным микроорганизмам, они продуцируют целый ряд ферментов, лизирующих крахмал, пектины, целлюлозу, жиры, белки, производят различные аминокислоты и антибиотики [42–44] В отношении кишечного тракта человека виды Bacillus являются аллохтонными микроорганизмами, которые попадают туда в результате либо случайного поедания, либо осознанного употребления в пищу ферментированных продуктов питания.

1.2 Характеристика видов Bacillus

- Bacillus subtilis

- Bacillus licheniformis

- Bacillus coagulans

Bacillus subtilis — вид грамположительных спорообразующих аэробных бактерий, представителей рода бациллы (Bacillus).

Bacillus subtilis — один из наиболее хорошо изученных микроорганизмов.

Палочковидная бактерия, размер 3-5x0,6 мкм. Споры овальные, не превышающие размер клетки, расположены центрально. Перитрихиальное расположение жгутиков, подвижная. Колонии сухие, мелкоморщинистые, бархатистые, бесцветные или розовые. Край колонии волнистый. Растёт на МПА, МПБ, а также на средах, содержащих растительные остатки, простых синтетических питательных средах для гетеротрофов. Хемоорганогетеротроф, аммонифицирует белки, расщепляет крахмал, гликоген.

B. subtilis является важным продуцентом протеаз, амилаз, аминокислот и некоторых полисахаридов. В частности, протеаза используется как компонент моющих средств и для удаления жира и белков при выделке шкур. Также является продуцентом полипептидных антибиотиков.

Bacillus licheniformis - грамположительная палочка, способная образовывать споры. Размеры вегетативных клеток 3-5 мкм. Споры одиночные, центральные или овальные, подвижные. Тип жгутикования - перитрихиальный.

Вегетативные клетки Bacillus licheniformis хорошо растут на богатых питательных средах - мясопептонный агар (МПА), мясопептонный бульон (МПБ) и полужидкий агар (ПЖА) при температурах 37-50°С, рН 5,0-8,0. На МПА образует колонии белого цвета. Пигмент в среду не выделяет. Наблюдается рост до 8% NaCl.

Bacillus licheniformis культивируют в целях получения протеазы для использования в биологических стиральный порошок .

Bacillus coagulans является молочная кислота - формирование бактериальных видов в пределах рода Bacillus B. coagulans является грамположительных стержня (по 0.9μm 3.0μm 5.0μm чтобы по размеру); каталазы положительные спорообразующие, подвижны, факультативные анаэробные Оптимальная температура для роста 50°C, диапазон температур переносится на 30°C - 55°C.

Используется в ветеринарии, в частности в качестве пробиотика у свиней, крупного рогатого скота, птицы. Споры активируется в кислой среде желудка, и начинают прорастать и пролиферации в кишечнике.

1.3 Цели и задачи исследования.

Цель курсовой работы:

- идентификация бактерий рода Bacillus

- исследование морфологических и культуральных свойств культуры бактерий рода Bacillus.

Задачи исследования:

- определить принадлежность штамма хемоорганотрофных бактерий к крупному таксону;

- определить видовую принадлежность бактерий рода Bacillus.

Глава 2. Экспериментальная часть.

2.1 Объекты исследования

Объектом исследования являлся штамм бактерий, выращенных на мясо-пептонном агаре (МПА).

Методы исследования

· Окраска клеток по Граму.

Сущность метода заключается в том, что в клетках одних видов микроорганизмов образуется нерастворимое в спирте соединение йода с основным красителем, у других видов это соединение появляется временно и после обработки спиртом растворяется. Первые микроорганизмы называются грамположительными, вторые - грамотрицательными.

· Раздавленная капля.

Сущность метода заключается в определении подвижности клеток.

· Окраска клеток по Трухильо.

Метод применяется для выявления спор бактерий

· Тест на каталазу.

Сущность теста заключается в способности клеток бактерий образовывать в процессе роста фермент каталазу, количество которой различно у разных видов бактерий. Каталаза разлагает перекись водорода на воду и молекулярный водород.

· Отношение к кислороду

Сущность метода заключается в определении типа дыхания у бактерий. Аэробные бактерии растут только на поверхности среды, не залитой парафином; анаэробные бактерии - только на прогретой среде, залитой парафином, а факультативные анаэробы растут на среде в двух пробирках.

· Определение способности бактерий к дыханию и (или) брожению.

Сущность данного метода заключается в изменении рН среды, вследствие способности сбраживать углеводы.

Определение видовой принадлежности бактерий рода Bacillus.

· Культуральные признаки

Ø Характерные признаки колоний - сущность метода заключается в описании колоний 5-7 суточной культуры при росте на МПА.

Ø Особенности роста в жидкой среде – сущность метода заключается в следующем: рост в жидкой среде сопровождается помутнением среды, образованием пленки, хлопьев или осадка. Для этого используют 5-7 суточную культуру, выросшую на МПБ или глюкозо-пептонной среде.

· Физиолого-биохимические признаки.

Ø Образование кислоты из глюкозы;

Ø Образование кислоты из арабинозы, ксилозы, маннита;

Ø Образование ацетоина (реакция Вогес-Проскауэра);

Ø Гидролиз крахмала – обнаруживают по зоне просветления среды вокруг колонии.

Ø Гидролиз казеина - выявляют по просветление среды вокруг штриха;

Ø Гидролиз желатина – отмечают по его разжижению; учитывают интенсивность и форму разжижения;

Ø Гидролиз мочевины – выявляют по изменению цвета индикатора: от оранжево-желтого (при рН 6,8-6,9) до малиново-красного (при рН 8,4).

Ø Восстановление нитратов - о восстановлении нитратов до нитритов судят по положительной реакции на нитриты; о восстановлении нитратов до молекулярного азота свидетельствует пузырёк газа в поплавке. Нитриты определяют качественной реакцией с реактивом Грисса. Эта реакция основана на образовании в кислой среде в присутствии нитритов и ароматических аминов азосоединения, окрашиваемого в красно—розовый цвет.

Ø Использование органических кислот. Об образовании кислот судят по изменению цвета индикатором – бромтимолового синего до зеленого при рН 6.6-6.8 до синего при рН выше 7.0 или фенолового красного от оранжево-желтого при рН6,6-6,8 до малиново-красного при рН 8.4.

Ø Рост на среде с 7% NaCl. Способность к росту оценивать при появлении пленки или помутнении среды.

Ø Рост на среде при рН 5.7. О росте судят по появлению пленки и по помутнению среды.

Ø Отношение к температуре. Оптимальную температуру для роста определяют по интенсивности помутнения среды.

Результаты и их обсуждения

3.1 микроскопирование проводили с увелиением объектива

Бактерии имеют форму, окраску по Граму… перед микроскопированием

Морфологии колонии.. ( название…таблица и фото)

3.2 идентификации вида бактерий рода Б….

Выводы

Проведена идентификация бактерий рода Bacillus.

В результате исследований морфологических и культуральных свойств культуры бактерий рода Bacillus была выявлена культура Bacillus licheniformis