Контроль исходного уровня знаний.

Кафедра микробиологии им. доц. Б.М. Зельмановича

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

ДЛЯ ОБУЧАЮЩИХСЯ

по дисциплине «микробиология»

для специальности 060301 – Фармация (очная форма обучения)

К ЛАБОРАТОРНОМУ ЗАНЯТИЮ № 27

ТЕМА: «Бактерии - возбудители трансмиссивных инфекций:

возбудители туляремии, Лайм-боррелиоза»

Утверждены на кафедральном заседании

протокол № ____ от «___»____________ 20__ г.

Заведующая кафедрой микробиологии им. доц. Б.М. Зельмановича

к.б.н., доц. ___________________Перьянова О.В.

Составитель:

к.м.н., доц. ____________________Решетнёва И.Т.

к.б.н., доц. ____________________Осипова Н.П.

Красноярск

Занятие № 27.

Тема: «Бактерии – возбудители трансмиссивных инфекций: возбудители туляремии, Лайм-боррелиоза».

2. Форма организации учебного процесса: лабораторное занятие.

3. Значение темы: Туляремия и лаймборрелиоз – природно-очаговые заболевания Красноярского края. Туляремия является эндемичным заболеванием для Красноярского края, относится к особо опасным инфекциям группы зоонозов, имеющих природную очаговость. Основной источник инфекции – животные, человек является эпидемическим тупиком. В настоящее время регистрируются вспышки туляремии среди животных, единичные случаи заболеваний человека.

Лайм-боррелиоз относится к числу наиболее распространенным среди природно-очаговых заболеваний, наряду с вирусным клещевым энцефалитом. Клиническая диагностика Лайм-боррелиоза затруднена ввиду разнообразия клинических проявлений. Специфическая профилактика заболевания не разработана. Применение современных высокочувствительных методик серологического и молекулярно-генетического обследования (ИФА, ПЦР) позволяют надёжно подтвердить диагноз заболевание.

4. Цели обучения:

- общая цель: обучающийся должен обладать ОК-1, ОК-2, ОК-3, ОК-5, ПК-21, ПК-27, ПК-31, ПК-33, ПК-35, ПК-36, ПК-47, ПК-48, ПК-49.

На основе знаний биологии возбудителей туляремии, Лайм-боррелиоза, особенностей их взаимодействия с макроорганизмом уметь обосновывать тактику микробиологической диагностики, профилактику и терапию, вызываемых ими заболеваний.

- учебная: знать правила работы в микробиологической лаборатории, технику безопасности при работе с микроорганизмами, реактивами и приборами; роль микроорганизмов в биосфере; феномен паразитизма и биоэкологические заболевания; классификацию, морфологию и физиологию микроорганизмов; их биологические и патогенные свойства, влияние на здоровье населения; молекулярно-генетические основы патогенности и антибиотикорезистентности микроорганизмов, механизмы и методы их изучения; сущность микробиологических, молекулярно-генетических, иммунологических методов диагностики инфекционных заболеваний, области их применения, принципы интерпретации полученных результатов; применение основных антибактериальных, противовирусных и иммунобиологических препаратов;

Правила работы с возбудителями особо опасных инфекций, основные положения режима работы с ООИ.
Классификацию и морфобиологические особенности возбудителей туляремии и Лайм-боррелиоза.
Экологию, особенности патогенеза и иммунитета при туляремии и Лайм-боррелиозе.
Материал и методы микробиологической диагностики туляремии и Лайм-боррелиоза.
Неспецифическую профилактику и этиотропную терапию туляремии и Лайм-боррелиоза.
Специфическую профилактику и терапию туляремии.

- уметь пользоваться учебной, научной литературой, сетью Интернет для профессиональной деятельности; соблюдать технику безопасности и правила работы с материалом, представляющим биологическую опасность; пользоваться микробиологическим оборудованием; работать с увеличительной техникой; обосновать выбор материала и методов микробиологической диагностики с учетом биологии возбудителя, патогенеза и основных клинических проявлений заболевания; интерпретировать полученные результаты; использовать полученные знания по резистентности микроорганизмов для определения тактики антимикробной терапии; применить принципы экстренной профилактики и антитоксической терапии пациентов;

1. Учитывать и оценивать результаты ИФА при серодиагностике боррелиоза.

2. Провести экспресс-диагностику туляремии (РИФ).

3. Микроскопировать мазки-отпечатки из органов морской свинки или белой мыши, зараженных материалом от больных с подозрением на туляремию, интерпретировать результаты.

4. Учитывать и оценивать результаты РА с исследуемыми культурами и диагностическими сыворотками.

5. Учитывать и оценивать результаты РА с парными сыворотками обследуемых с подозрением на туляремию.

- владеть основными методами и способами дезинфекции, стерилизации и антисептической обработки рук, инструментария и оборудования во избежание инфицирования врача и пациента; основными навыками работы с современными приборами, применяемыми для диагностики инфекционных заболеваний; навыками интерпретации результатов микробиологических, молекулярно-генетических и иммунологических методов диагностики инфекционных заболеваний; навыками интерпретации определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам с целью выбора средств рациональной терапии; алгоритмом подбора иммунобиологических препаратов с целью профилактики и терапии инфекционных заболеваний.

План изучения темы

Контроль исходного уровня знаний.

Собеседование по контрольным вопросам:

1. Правила работы с возбудителями особо опасных инфекций, основные положения режима работы с ООИ.

2. Систематическое положение возбудителей туляремии, Лайм-боррелиоза.

3. Морфо-биологическая характеристика возбудителей туляремии, Лайм-боррелиоза.

4. Экология, эпидемиология, особенности патогенеза и иммунитета при туляремии, Лайм-боррелиозе.

5. Материалы и методы микробиологической диагностики туляремии, Лайм-боррелиоза.

6. Специфическая профилактика и терапия туляремии.

7. Неспецифическая профилактика и этиотропная терапия Лайм-боррелиоза.

Тестовые задания по теме.

Возбудитель туляремии относится к роду:

а) Yersinia

б) Salmonella

в) Pasteurella

г) Francisella

д) Shigella

1. Возбудитель туляремии относится к:

а) вирусам

б) прионам

в) бактериям

г) грибам

д) актиномицетам

2. Особенность возбудителя туляремии:

а) быстро растет

б) не дает роста при посеве материала от больного человека

в) оптимум Т-28°С

г) оптимум Т-41°С

д) растет только в темноте

3. Исследуемым материалом на туляремию не является:

а) пунктат бубона

б) спинномозговая жидкость

в) сыворотка крови

г) мокрота

д) отделяемое конъюнктивы

4. С возбудителем туляремии работают:

а) в лабораториях противочумных институтов и станций

б) в лабораториях крупных лечебных учреждений

в) в лабораториях районных центров Госсанэпиднадзора России

г) в лабораториях медицинских ВУЗов

д) в лабораториях медицинских училищ

5. С возбудителем туляремии работают:

а) в противогазах

б) в пижамах

в) в противочумных костюмах II типа

г) в обычных медицинских халатах

д) только в перчатках

6. Выделение культуры при микробиологическом исследовании на туляремию в лаборатории особо опасных инфекций возможно только при:

а) заражении мышей

б) прямом посеве на специальную среду Мак-Коя

в) заражении обезьян

г) заражении волонтеров

д) заражении культуры клеток ткани

7. Выберите результаты исследования парных сывороток, подтверждающие диагноз «туляремия»:

а) 1:100 ® 1:1600

б) 1:100 ® 1:100

в) 1:200 ® 1:200

г) 1:200 ® 1:100

д) 1:50 ® 1:50

8. Возбудитель туляремии человеку не передается:

а) через укус насекомых

б) при контакте с больными грызунами (ондатра, заяц и др.)

в) половым путем

г) перорально

д) аспирационным путем

9. Тулярин – это:

а) аттенуированный штамм

б) диагностикум

в) взвесь убитых микроорганизмов

г) РНК возбудителя туляремии

д) иммуноглобулин

10. Красноярский край эндемичен по:

а) холере

б) чуме

в) проказе

г) лихорадке Эбола

д) туляремии

11. Специфическая профилактика туляремии осуществляется:

а) живой вакциной EV

б) убитой вакциной

в) живой вакциной СТИ

г) соблюдением личной гигиены

д) живой вакциной Гайского-Эльберта

12. Возбудители Лайм-боррелиоза в России:

а) Borrelia burgdorferi, B. garinii

б) Borrelia recurrentis, B. burgdorferi

в) Borrelia latyschewii, B. afzelii

г) Borrelia latyschewii, B. garinii

д) Borrelia afzelii, B. garinii

13. Основной путь передачи при Лайм-боррелиозе:

а) воздушно-капельный

б) алиментарный

в) трансмиссивный

г) трансплацентарный

д) половой

14. Основной метод микробиологической диагностики Лайм-боррелиоза:

а) микроскопический

б) бактериологический

в) биологический

г) серологический

д) аллергический

Правильный ответ: г

д) контакте с больным человеком

Исполнитель: зав.каф., доц. Перьянова О.В

Основные понятия и положения темы

Возбудитель туляремии отнесен к роду Francisella, виду F. tularensis. Это мелкие неподвижные коккобактерии, не образующие спор, продуцируют капсулообразное вещество. Грамотрицательны. Факультативные анаэробы. Возбудитель туляремии, особенно в первых генерациях, не растет на искусственных питательных средах, что является одним из существенных признаков при его идентификации. Для поддержания лабораторных культур используют специальные (с добавлением желтка или цистина) среды, на которых через 2-5 суток формируются мелкие колонии с ровными краями беловатого цвета.

Ферментативная активность туляремийного микроба не выражена.

Возбудитель туляремии имеет Vi-и О-антигены.

F. tularensis – внутриклеточный паразит. Вирулентность связана со способностью развиваться в фагоцитах и подавлять их киллерную активность, образовывать капсулу, эндотоксин, нейраминидазу. Антигены клеточной стенки обладают свойствами аллергенов, что ведет к сенсибилизации инфицированного организма и усугубляет действие других факторов вирулентности.

Естественные хозяева возбудителя – грызуны, водные крысы, домовые мыши. Заражение людей происходит при прямом контакте с больными животными, их трупами, через объекты внешней среды и пищевые продукты, инфицированные выделениями больных грызунов. Возможен и трансмиссивный путь передачи через укусы кровососущих членистоногих. От больных людей заболевание не передается.

Возбудитель может проникать в организм через слизистые оболочки верхних дыхательных путей, глаз, желудочно-кишечного тракта и даже через неповрежденную кожу. Это определяет разнообразие клинических форм инфекции: легочная, бубонная, генерализованная и другие.

Постинфекционный иммунитет напряженный, гуморально-клеточный.

Для микробиологической диагностики используют методы серодиагностики, постановку аллергической диагностической пробы с тулярином. В специализированных лабораториях проводят биологический метод (материал для исследования определяется клинической формой болезни). Культуру выделяют, заражая лабораторных животных.

Для лечения туляремии используют антибиотики.

Специфическая профилактика осуществляется живой туляремийной вакциной. Создана и химическая вакцина, приготовленная из протективного антигена.

Болезнь Лайма–системный клещевой боррелиоз, природно-очаговое, трансмиссивнооое, передающиеся клещами заболевание. Методы микробиологическойдиагностики: бактериологический, серологический, экспресс-диагностика - ПЦР. Лабораторная диагностика основана на выявлении боррелий в биоптатах кожи, в крови, спинномозговой жидкости после импрегнации серебром. Возможно выделение чистой культуры посевами исследуемого материала на жидкие среды. Наиболее часто используют серодиагностику (ИФА, РИФн. иммуноблоттинг). Реакции ставят в парных сыворотках с интервалом 20-30 дней. Высокие титры антител (1:80 и выше) появляются, как правило, поздно, через несколько месяцев от начала болезни. Длительное сохранение высоких титров IgG свидетельствует о продолжающемся инфекционном процессе и развитии хронических форм заболевания. Важно учитывать тот факт, что возбудитель Лайм-боррелиоза имеет перекрестно-реагирующие АГ с др. патогенными спирохетами (возбудителем сифилиса, клещевыми возвратными тифами и др.).

5.3. Самостоятельная работа по теме:

1.Провести микробиологическое исследование материалов от больного «А» с клиническим диагнозом «туляремия»:

1.1. Ознакомиться с муляжом бубонной формы туляремии.

1.2. Учесть и оценить результаты РИФ с материалом от больного «А». Сделать вывод.

1.3. Промикроскопировать мазок-отпечаток из органов морской свинки, зараженной материалом от больного «А». Сделать вывод.

1.4. Промикроскопировать мазок из чистой культуры, выделенной от того же больного. Сделать вывод.

1.5. Учесть и оценить результаты развернутой РА с исследуемой культурой, выделенной от больного «А» и агглютинирующей туляремийной сывороткой. На основании полученных результатов сделать вывод.

2.Провести микробиологическое исследование материалов от больных «Б» и «С» с клиническим диагнозом «туляремия»:

2.1. Учесть и оценить результаты развернутой РА с сыворотками обследуемых «Б» и «С» и туляремийным диагностикумом. На основании полученных результатов сделать вывод.

3. Учесть и оценить ИФА с сывороткой обследуемого для определения АТ к возбудителям Лайм-боррелиоза (B. garinii, B. Afzelii).

4. Описать биопрепараты: Вакцина туляремийная живая сухая, Аллерген туляремийный для внутрикожного применения (Тулярин).

Методические указания к выполнению исследовательского задания:

1. Проведите микробиологическое исследование материалов от больного «А» с клиническим диагнозом «туляремия»:

1.1. Ознакомьтесь с муляжом бубонной формы туляремии.

Клинически туляремия сходна с чумой (син.: чумоподобная болезнь, малая чума); одна из основных форм – бубонная. Бубоны бывают одиночными и множественными. Работа с материалом ведется с соблюдением всего комплекса противоэпидемических мероприятий для особо опасных инфекций в специализированных лабораториях в противочумном костюме II типа(отличается от костюма I типа отсутствием очков).

1.2. Учтите и оцените результаты РИФ с материалом от больного «А». Сделать вывод.

В случае положительной РИФ при люминесцентной микроскопии выявляют светящиеся коккобактерии. Это позволяет выдать предварительный положительный ответ.

1.3. Промикроскопируйте мазок-отпечаток из органов морской свинки, зараженной материалом от больного «А». Сделайте вывод.

Отличительной особенностью бактерий туляремии является неспособность к росту при прямом посеве исследуемого материала на питательные среды. Поэтому основным методом выделения культуры при микробиологической диагностике туляремии является биологический. При наличии в исследуемом материале бактерий туляремии в мазках-отпечатках из органов белых мышей обнаруживается большое количество грамотрицательных коккобактерий, окруженных капсулой. Параллельно проводится высев на соответствующие питательные среды для выделения и идентификации культуры.

1.4. Промикроскопируйте мазок из чистой культуры, выделенной от того же больного. Сделайте вывод.

1.5. Учтите и оцените результаты развернутой РА с исследуемой культурой, выделенной от больного «А» и агглютинирующей туляремийной сывороткой. На основании полученных результатов сделайте вывод.

Для выполнения задания смотрите протокол практического занятия №___.

2. Проведите микробиологическое исследование материалов от больных «Б» и «С» с клиническим диагнозом «туляремия»:

2.1. Учтите и оцените результаты развернутой РА с сыворотками обследуемых «Б» и «С» и туляремийным диагностикумом. На основании полученных результатов сделайте вывод.

Для выполнения задания смотрите протокол практического занятия №___.

При оценке результатов необходимо учесть, что реакция может быть положительной не только у больных, но у переболевших и вакцинированных

3. Учтите и оцените ИФА с сывороткой обследуемого для определения АТ к возбудителям Лайм-боррелиоза (B. garinii, B. afzelii).

Для выполнения задания смотрите протокол практического занятия №___.

На основании полученных результатов сформулируйте вывод; заполните бланк-направление и бланк-ответ из бак. лаборатории.

4. Ознакомьтесь и опишитебиопрепараты, указав, что содержат, для чего и как применяются: Вакцина туляремийная живая сухая, Аллерген туляремийный для внутрикожного применения (Тулярин).

5.4. Итоговый контроль знаний:

- ответы на вопросы по теме занятия:

1. Критерии принадлежности туляремии к ООИ.

2. Классификация и морфобиологические особенности возбудителей туляремии и Лайм-боррелиоза.

3. Экология, особеннсти эпидемиологии, патогенеза и иммунитета при туляремии и Лайм-боррелиозе.

4. Правила забора и транспортировки материала при диагностике туляремии

5. Методы экспресс-диагностики туляремии.

6. Методы микробиологической диагностики туляремии и Лайм-боррелиоза.

7. Специфическая профилактика и лечение туляремии.

8. Назовите патогномоничный признак Лайм-боррелиоза на 1-м этапе развития заболевания и обоснуйте патогенез его развития.

9. Назовите причины хронизации процесса при Лайм-боррелиозе.

10. Назовите Ваши действия в случае укуса клещом с целью профилактики развития Лайм-боррелиоза.

- решение ситуационных задач:

ЗАДАЧА №1. Женщина 45-ти лет обратилась в поликлинику с жалобами на повышение температуры до 38,5°С, недомогание, гиперемию, отёк на коже живота в месте укуса клеща. Со временем размеры гиперемии увеличились, в центре кожа посветлела. После осмотра поставлен предварительный диагноз: болезнь Лайма.

1. Назовите таксономическое положение возбудителя.

2. Перечислите источники инфекции и механизмы передачи

3. Укажите методы исследования, которые помогут подтвердить диагноз.

ЗАДАЧА №2.

В лаборатории ООИ лаборанту необходимо приготовить фиксированные препараты из полученной культуры, выросшей на среде Мак-Коя. Окрасить по Граму. Промикроскопировать.

1. С какой целью проводим микроскопию?

2. Какую микроскопическую картину предполагаем увидеть?

3. Каковы дальнейшие действия?

ЗАДАЧА №3.

При серодиагностике туляремии поставили развернутую РА с парными сыворотками обследуемого. Получили титр 1:200 в первой сыворотке и 1:400 во второй. КС прозрачный, в КА обнаружена агглютинация на +++. Оценить полученные результаты.

ЗАДАЧА №4.

От больного с выраженным бубоном на шее была произведена пункция узла. Полученный таким образом материал был засеян на кровяной агар и яично-желточную среду. Кровь в количестве 10 мл от этого же больного была посеяна в сахарном бульоне. В течение 7 дней наблюдения рост не появлялся.

1. Ваше заключение.

2. В чем заключается дальнейшее исследование?

Домашнее задание для уяснения темы занятия

(См. контрольные вопросы по теме занятия, тестовые задания, ситуационные задачи).

7. Рекомендации по выполнению НИРС, в том числе список тем, предлагаемых кафедрой:

1. Особенности биологии возбудителя Лайм-боррелиоза.

2. Эпидемиологическая обстановка по туляремии в Красноярском крае на современном этапе.

8. Рекомендованная литература по теме занятия:

· Основная:

1. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология: Учебник / Под ред. А.А. Воробьева. – М.: ООО «МИА», 2006.

· Дополнительная

1. Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии: Учебное пособие для студентов медицинских вузов / Под ред. А.А. Воробьева, А.С. Быкова – М.: МИА, 2003.

2. Борисов Л. Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология: Учебник. – М.: ООО “МИА”, 2005.

3. Поздеев О. К. Медицинская микробиология / Под ред. В.И. Покровского. – 2-е изд., испр. М.: ГЭОТАР-Медицина, 2004.

4. Маянский А.Н. Микробиология для врачей. – Н. Новгород: изд-во НГМА, 1999.

· Учебно-методические пособия

1. Перьянова, О.В. Общая и частная микробиология (тестовые задания для студентов специальности 060108 – фармация) / О.В. Перьянова, А.И.Степанова, О.Е.Хохлова. – Красноярск: типография КрасГМА, 2008.

· Электронные ресурсы:

1. Электронный каталог КрасГМУ

2. БД Гении медицины

3. БД Медицина

4. БД MedArt

5. Ресурсы Интернет

Электронные ресурсы:

6. Электронный каталог КрасГМУ

7. БД Гении медицины

8. БД Медицина

9. БД MedArt

10. Ресурсы Интернет