Количество реагентов при приготовлении ПААГ

Компоненты	На 15 мл	На 30 мл	На 40 мл	На 45 мл	На 50 мл
7% ПААГ
30% акриламид	3,5 мл	7 мл	9,3 мл	10,5 мл	11,7 мл
10хТВЕ	1,5 мл	3 мл	4 мл	4,5 мл	5 мл
ТЕМЕД	15 мкл	30 мкл	40 мкл	45 мкл	50 мкл
10% ПСА	133 мкл	266 мкл	355 мкл	400 мкл	443 мкл
Н₂0	до 15 мл	до 30 мл	до 40 мл	до 45 мл	до 50 мл
8% ПААГ
30% акриламид	4 мл	8 мл	10,7 мл	12 мл	13,3 мл
10хТВЕ	1,5 мл	3 мл	4 мл	4,5 мл	5 мл
ТЕМЕД	15 мкл	30 мкл	40 мкл	45 мкл	50 мкл
10% ПСА	133 мкл	266 мкл	355 мкл	400 мкл	443 мкл
Н₂0	до 15 мл	до 30 мл	до 40 мл	до 45 мл	до 50 мл
10% ПААГ
30% акриламид	5 мл	10 мл	13,3 мл	15 мл	16,7 мл
10хТВЕ	1,5 мл	3 мл	4 мл	4,5 мл	5 мл
ТЕМЕД	15 мкл	30 мкл	40 мкл	45 мкл	50 мкл
10% ПСА	133 мкл	266 мкл	355 мкл	400 мкл	443 мкл
Н₂0	до 15 мл	до 30 мл	до 40 мл	до 45 мл	до 50 мл

Приготовление 30% акриламида

Компоненты	На 100 мл	На 200 мл
Акриламид	29 г	58 г
Метиленбисакриламид	1 г	2 г

Приготовление буфера ТВЕх10

Компоненты	На 1 л	На 0,5 л
Трис	108 г	54 г
Борная кислота	55 г	27,5 г
0,5 М ЭДТА рН=8 (или сухой)	40 мл (9,3 г)	20 мл (4,65 г)

Приготовление буфера ТАЕх10

Компоненты	На 1 л	На 0,5 л
Трис	48,4 г	24,2 г
ЛУК	11,2 мл	5,6 г
0,5 М ЭДТА рН=8	20 мл	10 мл
рН доводим до 7,8 ледяной уксусной кислотой

Приготовление 0,09% растора AgNO₃

Реагент	Количество
AgNO₃	1,8 г
Н₂О	до 2000 мл

Приготовление формалин-щелочного раствора

Реагент	Количество
40% раствор формалина	15 мл
NaOH сухой	15 г
Н₂О	до 500 мл

Приложение 4

Рестриктазы и сайты узнавания

Фермент типа II	Сайт узнавания
Симметричный (N=6)
Bal I	TGG\|CCA
Bam HI	G\|GATCC
Bcl I	T\|GATCA
Bgl II	A\|GATCT
Eco RI	G\|AATTC
Hin dIII	A\|AGCTT
Hpa I	GTT\|AAC
Kpn I	GGTAC\|C
Pst I	CTGCA\|G
Pvu II	CAG\|CTG
Sma I	CCC\|GGG
Sac I	GAGCT\|C
Sac II	CCGC\|GG
Sal I	G\|TCGAC
Xba I	T\|CTAGA
Xho I	CTC\|GAG
Вырожденный симметричный (N=6)
Acc I	GT\|(A/C)(G/T)AC
Ava I	C\|PyCGPuG
Hae I	(A/T)GG\|CC(T/A)
Hae II	PuGCGC\|Py
Hgi AI	G(T/A)GC(T/A)\|C
Hin dII	GTPy\|PuAC
Симметричный (N=5)
Asu I	G\|GNCC
Ava II	G\|G(A/T)CC
Eco RII	\|CC(A/T)GG
Hin fI	G\|ANTC
Симметричный (N=4)
Alu I	AG\|CT
Fnu DII	CG\|CG
Hae III	GG\|CC
Hha I	GCG\|C
Hpa II	C\|CGG
Mbo I	\|GATC
Taq I	T\|CGA
Симметричный метилированный (N=4)
Dpn I	C^mATC
Msp I	C(^mC/C)GG

Приложение 5

Приготовление реактивов, неоходимых при проведении SSCP-анализа

Приготовление денатурирующей смеси для SSCP-анализа

Компонент	Количество
NaOH 5M	10 мкл
ЭДТА 0,5М	10 мкл
Н₂О	90 мкл

Денатурирующую смесь готовят непосредственно перед раскапыванием в эппендорфы для смешивания с ПЦР-продуктом. Необходимо как можно быстрее раскапать смесь, так как через 30 минут после приготовления у денатурирующей смеси резко снижается активность.

Приготовление ПААГ для SSCP (на 50 мл)

10% гель	8% гель
Компонент	Объем	Компонент	Объем
30% акриламид 29:1	16,7 мл	30% акриламид 29:1,3	13,3 мл
10хТВЕ	2,5 мл	10хТВЕ	2,5 мл
50% глицерин	5 мл	50% глицерин	5 мл
ТЕМЕД	50 мкл	ТЕМЕД	50 мкл
10% ПСА	443 мкл	10% ПСА	443 мкл
Н₂О	до 50 мл	Н₂О	до 50 мл

Приложение 6

Триплетный генетический код

	U	C	A	G
U	Phe(F) Phe(F) Leu(L) Leu(L)	Ser(S) Ser(S) Ser(S) Ser(S)	Tyr(Y) Tyr(Y) Term Term	Cys(C) Cys(C) Term Trp(W)	U C A G
C	Leu(L) Leu(L) Leu(L) Leu(L)	Pro(P) Pro(P) Pro(P) Pro(P)	His(H) His(H) Gln(Q) Gln(Q)	Arg(R) Arg(R) Arg(R) Arg(R)	U C A G
A	Ile(I) Ile(I) Ile(I) Met(M)	Thr(T) Thr(T) Thr(T) Thr(T)	Asn(N) Asn(N) Lys(K) Lys(K)	Ser(S) Ser(S) Arg(R) Arg(R)	U C A G
G	Val(V) Val(V) Val(V) Val(V)	Ala(A) Ala(A) Ala(A) Ala(A)	Asp(D) Asp(D) Glu(E) Glu(E)	Gly(G) Gly(G) Gly(G) Gly(G)	U C A G

Приложение 7

Биолоические базы данных

База данных	Интернет-сайт	Исследования
GenBank	www.ncbi.nlm.nih.gov/genebank	нуклеотидные последовательности
GeneCards	http://www.genecards.org/	гены человека
PubMed	www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed	Научные
Entrez Protein	www.ncbi.nlm.nih.gov/protein	последовательности белков
SWISS-PROT	web.expasy.org/groups/swissprot	последовательности белков
InterPro	www.ebi.ac.uk	белковые домены
OMIM	www.ncbi.nlm.nih.gov/omim/	наследственные заболевания
Pfam	www.pfam.sanger.ac.uk	семейства белков
PDB	www.rcsb.org/pdb	структуры белков
KEGG	www.kegg.jp	метаболические пути