Гистоны. Структура нуклеосом
Два напр-ия: полинемическое (мн. ДНК в сл. жел- мухи). Плотно упак. р-ны, гены не раб-т. Если им нужно работать, этот р-н взд-ся, начинается транскрипция. Рис считал, что хромосома из 2 хроматид, каждая из 2 хромонем (из 2 фибр. нитей и 2 ДНК). Но тогда не было з-ном Менделя не было бы мутаций. Состав из гистонов и ДНК. Гистоны H1 – лизин, Н2а и Н2в, Н3– аргинин, Н4 – и тем и другим. Они образуют нуклеосому (8 гистонов) они формируют шар. 140 нк ДНК контактирует с нуклеосомой. Свободное про-во 60 нк.
Уровни упаковки хромосом эукариот. Конденсация хроматина.
Первый уровень – форма спирали. А – 2,3 нм; 11осн.(самая закруч) В – 1,9нм; 10осн. С – 1,9нм; 9осн (правост) Z – 1,8нм; 12осн (левост, там, где одна цепь). Второй уровень – нуклеосомный. H1 над нуклеосомой формируется нить = 11нм. Третий: нукл. нить в 6 нуклеосом (солнышко) 30нм. Четвертый – петли 1 порядка. 20к нк с замками из негистоновых белков. Пятый петли второго порядка, шапки. Шестой хроматид. В центре метапротеины, ламповые щетки. Встречаются во время деления (от 10мк до 2см).
Приготовление хромосомных препаратов. Использование колхицина. Гипотония, фиксация и окрашивание.
Делящиеся клетки, 10% спирт (анН2О), во 10% в час; ксилол; с парафином, все пропиталось; микротомом нарезали; и всё в обратном порядке; окрашивали. Трудно было считать. Тио и Леван 1953 абортированный материал в трипсин, взвесь клеток; пит. среда 199 компонентов; колхицин на метафазе; гипотон. р-р, набухание, увел. Хр. отходят др. от др. H2О на спирт, замораживали, поджигали. Кл-ки лопались и равномерно распр-сь по стеклу. Все получилось. Потом 1969 Мурхет. Лейкоциты кровь 5мл с фитогенаглютинином, потом все так же как Леван и Тио.
Характеристика хромосомного набора человека. Денверовская номенклатура.
1961 г Денвер. Абс. и отн. длина в мкн; центромерный индекс (короткое к длинному) .
Метацентрики 1,3,16,19 и 20. Акроцентрики 13,15,21,22. Остальные субметацентрики. Сателлиты у акроцентриков (10). Они имеют рибосомальные гены, хромосомы будто совещаются со своими спутниками, формируется ядрышко, оно делает рРНК (рибосомы). Втор. перетяжки. У обезьян 48 у человека 46. Нет 2 есть 2 акроцентрика. Если их соед. получается 2. Т.е. транслокация.
Дифференциальное окрашивание хромосом, применение этого метода.
1970 Париж. Трудно было отличать, Касперсон флуоресцентными красителями. Первый – акридиновый краситель, внедряется м/у ДНК, разр. связи м/у А-Т. Хр. полосатые. Нед: быстрое выцветание. Японцы – м-д Гинзы. 2 красителя- синий азур2 и эозин. Убирают белки; xр. окр-ся в синий, эухроматин слабо. Пл. уч-ки стали называть сегменты Q. Все хр. м.б. отличить. Касперсона не забыли. Темные сегменты Q. Дальн. исследование позволило приурочить каждому сегменту опр. гены. Каждый сегмент свой номер. R— используется акридиновый оранжевый, окрашиваются нечувствительные к G-.С— применяется для анализа центромерных районов хромосом, содержащих конститутивный гетерохроматин и вариабельной дистальной части Y-хромосомы. Т применяют для анализа теломерных р-ов.
Классиф. мутаций по изм. силы и напр-сти действия мутантного аллеля.
По происх: спонтанные и индуцированные. По месту возникновения: генеративные (пол.клетки) и соматические (мозаики). Ядерные и цитоплазматические. Морф, физиол. и биохим. Летальные, полулетальные, условно летальные. Стерильные Нейтральные, усиливающие. Геномные, хромосомные, генные. Гипо, гипер, а, нео, антиморфные.
Геномные мутации. Полиплоидии и анеуплоидии, причины их возникновения.
Изменения набора хромосом. Нормальные – эуплоиды. При полиплоидии аутополиплоиды. Разные наборы, их много – аллоплоиды. Два диплоидных набора – амфиплоиды. Три причины: удвоение без деления, слияние ядер или клеток, нарушение мейоза. Можно колхицином семена, тоже будет. Бывает сбалансированная и несбалансированная (в мейозе, неплодовитость). Анеуплоидия – отдельные хромосомы. Моносомия, полисомия. Трисомия, нуллисомия.
29. Структурные перестройки хромосом: виды, механизмы образования.