ПЦР — выявление возбудителей вирусных гепатитов
ПЛАН
Актуальность
· Интерпретация результатов ИФА на определение маркеров ВГ
· Интерпретация результатов ПЦР на определение маркеров ВГ
Заключение
Литература
Актуальность
Современный этап называют "золотой эрой" изучения проблемы вирусных гепатитов. Благодаря использованию методов вирусологии, молекулярной биологии, генной инженерии, в частности рекомбинантной технологии, раскрылись новые горизонты понимания проблемы и дальнейшего ее изучения. Удостоенное Нобелевской премии открытие "австралийского антигена" (Blurnberg B.S., 1965) было первым в цепи блестящих исследований, сделавших неизвестное известным. Были открыты возбудители вирусных гепатитов -А, В, С. D. Е. Воплотилась давняя мечта клиницистов о раздельной специфической диагностике вирусных гепатитов разной этиологии не путем исключения или косвенных признаков, а на основе прямых исследований с использованием высокоспецифичных и высокочувствительных тест-систем. Метод иммуноферментного анализа (ИФА) стал достоянием широкой клинической и эпидемиологической практики. Разработка метода полимеразной цепной реакции, также удостоенная Нобелевской премии (Mulhs К., 1993). сделала доступной индикацию минимальных количеств вирусной ДНК (РНК) и стала арбитражным методом диагностики вирусных гепатитов. Использование новых методов исследования показа-то, что "гепатитный алфавит" еще далеко не исчерпан. Остается ниша вирусных гепатитов ни А, ни В, ни С, ни D, ни Е, вызываемых иными возбудителями.
ИФА – определение маркеров вирусных гепатитов
ИФА означает «иммуноферментный анализ». На внедрение любого микроорганизма иммунная система человека вырабатывает специальные белки крови — антитела. Они специфичны, то есть подходят к каждому микробу, а точнее к антигену микроба (его опознавательному знаку), как ключ к замку. Иммуноферментные анализы на гепатиты и другие инфекции основаны на реакции антиген—антитело, в результате которой в сыворотке крови обнаруживаются либо антитела (с помощью стандартных антигенов), либо антигены (с помощью стандартных антител) микроба.
Чувствительность этих анализов у нас приближается к 100% поскольку они делаются с использованием самого современного оборудования и высококачественных реактивов. Ниже приводится перечень анализов на различные формы вирусных гепатитов методом ИФА, которые можно сделать в нашем медицинском центре.
| Вирус гепатита A (HAV) | ||
| Anti-HAV IgM | антитела | Антитела к вирусу гепатита A класса IgM |
| Anti-HAV IgG | антитела | Антитела к вирусу гепатита A класса IgG |
| Вирус гепатита B (HBV) | ||
| HBs-Ag | антиген | Поверхностный антиген вируса гепатита B Синоним: Австралийский антиген |
| Anti-HBs | антитела | Суммарные антитела к поверхностному антигену вируса гепатита B |
| HBe-Ag | антиген | Антиген оболочки вируса гепатита B |
| Anti-HBe | антитела | Суммарные антитела к антигену оболочки вируса гепатита B |
| HBc-Ag | антиген | Антиген ядра вируса гепатита B (core-антиген) |
| Anti-HBc | антитела | Суммарные антитела к антигену ядра вируса гепатита B |
| Anti-HBc IgM | антитела | Антитела к антигену ядра вируса гепатита В класса IgM |
| Вирус гепатита C (HCV) | ||
| Anti-HCV | антитела | Суммарные антитела к вирусу гепатита C |
| Anti-HCV IgM | антитела | Антитела к вирусу гепатита C класса IgM |
| Вирус гепатита D (HDV) | ||
| Anti-HDV | антитела | Суммарные антитела к вирусу гепатита D |
| Anti-HDV IgM | антитела | Антитела к вирусу гепатита D класса IgM |
| Вирус гепатита E (HEV) | ||
| Anti-HEV IgG | антитела | Антитела к вирусу гепатита E класса IgG |
ПЦР — выявление возбудителей вирусных гепатитов
Самый чувствительный и специфичный метод на сегодняшний день для диагностики гепатитов (равно как и любой другой инфекции) — это полимеразная цепная реакция (ПЦР). Суть его состоит в выявлении самой чужеродной частицы (это могут быть как вирусы, так и любые другие виды микроорганизмов) даже в ничтожно малых количествах за счет повторного копирования в лабораторных условиях генетического набора микроорганизма. Это копирование состоит из нескольких циклов, которые многократно повторяются. Так за 20-30 циклов количество копий нужного фрагмента ДНК микроорганизма достигает нескольких миллионов, что позволяет обнаружить даже один вирус в одной клетке печени. Точность метода во многом зависит от того, насколько качественны реактивы. В нашем медицинском центре ПЦР диагностика инфекций отвечает самым современным требованиям науки и дает наиболее точные результаты. Кроме установления факта наличия вируса в крови важно определять его количество (так называемая вирусная нагрузка), поскольку от результатов этого анализа во многом зависит схема лечения и прогноз заболевания. Кроме того, важным показателем при выборе противовирусного лечения (в частности, гепатита С), его длительности и прогнозировании успеха, является определение генотипа вируса.
ПЦР анализ
Анализ РНК HCV (определение РНК вируса гепатита С), часто называемый анализ ПЦР гепатита С — это исследование крови, позволяющее выявить непосредственно генетический материал вируса гепатита (каждый вирус — это одна частица РНК). Этот тест чаще всего выполняется методом ПЦР, — отсюда и название ПЦР гепатита С. Существуют качественный и количественный анализы на РНК ВГС.
Качественный анализ указывает на наличие вируса в крови. Данный тест необходимо проводить всем пациентам, у кого обнаружены антитела к гепатиту С. Его результат может быть «обнаружено» или «не обнаружено». Референсные значения (значение, которое должно быть в норме) — «не обнаружено». Результат «обнаружено» может свидетельствовать о том, что вирус размножается и инфицирует все новые клетки печени. Качественный тест ПЦР имеет определенную чувствительность (10-500 МЕ/мл.). Это означает то, если вирус присутствует в крови в очень малой концентрации (ниже порога чувствительности метода), может быть получен результат «не обнаружено». Поэтому, при проведении качественного ПЦР у пациентов с низкой виремией (концентрацией вируса), например, проходящих противовирусную терапию, важно знать чувствительность диагностической системы. Для контроля вирусологического ответа при проведении противовирусной терапии желательно использовать диагностическую систему с чувствительностью не ниже 50 МЕ/мл. Таким критериям соответствуют, например, анализаторы COBAS AMPLICOR ВГС-TEST (аналитическая чувствительность 50 МЕ/мл или 100 копий/мл), РеалБест РНК ВГС (аналитическая чувствительность 15 МЕ/мл или 38 копий/мл) и другие.
ПЦР обнаруживает наличие РНК ВГС в крови, что указывает на наличие активной инфекции. Этот тест является очень чувствительным, он позволяет измерять вирусную нагрузку всего порядка 50 МЕ/мл.
Метод разветвлённой ДНК (р-ДНК)
Этот метод количественного определения вирусной нагрузки (более простой и дешёвый ) применяется для большого количества образцов, однако его чувствительность значительно ниже – он позволяет измерять вирусную нагрузку не менее 500 МЕ/мл. Это означает, что при таком тестировании ВГС может присутствовать в крови, но остаться незамеченным.
Метод транскрипционной амплификации (ТМА)
ТМА — технология позволяет обнаруживать нуклеиновые кислоты (компоненты генетического материала) в крови. С помощью этого теста можно измерять вирологические нагрузки порядка 5-10 МЕ/мл. Эта простая и дешёвая новая методика позволяет ускорить процесс тестирования и даёт надёжные и воспроизводимые результаты.