Практическая работа № 3. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППЫ КРОВИ И РЕЗУС ПРИНАДЛЕЖНОСТИ С ПОМОЩЬЮ ЦОЛИКЛОНОВ

Моноклональные Анти-А и Анти-В антитела продуцируются двумя мышиными гибридомами и принадлежат к иммуноглобулинам класса М. Цоликлоны изготавливаются из асцитной жидкости мышей – носителей анти-А и анти-В гибридом. Цоликлон Анти-АВ представляет собой смесь моноклональных анти-А и анти-В антител. Имеются и цоликлоны Анти-D для определения резус принадлежности крови.

Ход определения. На планшет индивидуальными пипетками наносятся цоликлоны Анти-А, Анти-В и Анти-АВ, а также Анти-D по одной большой капле (0,1мл). Рядом с каплями антител наносится по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01 мл). Кровь смешивается с реагентом. Наблюдается ход реакции с цоликлонами визуально при легком покачивании планшета в течение трех минут. Агглютинация эритроцитов с цоликлонами обычно наступает в первые 3-5сек., но наблюдение следует вести 3 минуты ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В или резус-антигена.

Интерпретация результатов. Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются.

Интерпретация результатов реакции агглютинации исследуемой крови с цоликлонами представлена в таблице.

Результат реакции с цоликлоном   Анти-А Анти-В Анти -АВ	Исслед.кровь принадлежит к группе
-	-	-	0(I)
+	-	+	А(II)
-	+	+	В(III)
+	+	+	АВ(IV)

Знаком плюс (+) обозначено наличие агглютинации, знаком минус (-) – отсутствие агглютинации.

Наличие агглютинации с Анти-D цоликлоном свидетельствует о том, что кровь резус-положительная, а отсутствие агглютинации – что кровь резус-отрицательная.

Для лучшего усвоения навыка чтения результатов определения групповой принадлежности крови желающие студенты могут использовать компьютерную программу «Тренажер по определению групп крови».

ПРОТОКОЛ ДАННЫХ ПО ТЕМЕ: «Физиология системы крови. Физиология свертывающей и антисвертывающей систем. Группы крови».

Данные пациента:

Ф.И.О.______________ Возраст_____________ Пол: М/Ж

Практическая работа № 1

Определение скорости свертывания крови.

Полученные результаты:

Рисунок

Время свертывания крови____________________мин.

Выводы:________________________________________________________

Практическая работа № 2

Определение времени кровотечения по Дьюку.

Время кровотечения______________мин.

Выводы:__________________________________________________________

Практическая работа № 3

Определение группы крови.

Полученные результаты:

После смешивания крови с цоликлонами агглютинация (наступила, не наступила)

Анти –А_____________________________________

Анти -В______________________________________

Анти -АВ_____________________________________

Анти-А Анти-В Анти-АВ

Выводы:____________________________________________

Практическая работа № 4

Определение резус – принадлежности (Rh).

Полученные результаты:

После смешивания крови с цоликлоном Анти-Д агглютинация (наступила, не наступила)

_________________

Анти-Д

Выводы:__________________________________________________________