Приготовление мазков крови

2.8.1 Методика приготовления мазков крови

Способ № 1: Стерильным предметным стеклом прикасаются к капле крови на месте укола. Не следует прикасаться стеклом к коже пальца.

Способ № 2: Кровь берут с индивидуального стерильного капилляра Панченкова на стекло Мазок делают шлифовальным стеклом, поставив его под углом в 45° к предметному стеклу впереди капли. Подведя стекло к этой капле, ждут, пока кровь расплывется вдоль его ребра, затем быстрым легким движением проводят шлифовальное стекло впе­ред, не отрывая от предметного раньше, чем иссякнет вся капля. Нельзя сильно прижимать на стекло , т.к. при этом травмируются форменные элементы крови.

Правильно сделанный мазок имеет желтоватый цвет (тонкий), не достигает краев стекла 1-1,5 см и заканчивается в виде следа (« усов», « метелочки»). Мазки высушивают на воздухе и маркируют простым карандашом (пишут фамилию).

Окрашивание сухих мазков производят после предваритель­ной фиксации.

Требования к мазку

1.Вся капля крови должна быть использована для мазка

2.Мазок должен занимать примерно 3\4 предметного стекла

3.Хорошо должен быть выражен край мазка

4.Мазок должен быть полупрозрачен и иметь желтоватый тон

Фиксирующие жидкости:

1.Метиловый спирт (3—5 мин) (унифицированный)

2.Смесь Никифорова из равных частей абсолютного этилового спирта и эфира (30 мин).

3. Краситель-фиксатор Мая - Грюнвальда (3 мин)- (унифицированный)

Клиническое значение фиксирующих жидкостей:Фиксация предохраняет эритроциты от гемолиза и закрепляет мазок на стекле.

Основные гематологические краски:

метиленовый синий и его производное — азур I (метиленовый азуровый) и азур II (смесь равных частей азура I и метиленового синего), к кислым — водорастворимый желтый эозин

Окраски мазков

Реактивы для окраски мазков по Нохту. 1. Основной раствор азура II: 1 г краски растворяют в 1000 мл дистиллированной воды. Оставляют в посуде из темного стекла на 12—14 дней при комнатной температуре, после чего используют. 2. Основной раствор эозина калия: 1 г краски растворяют в 1000 мл дистил­лированной воды. Оставляют в посуде из тем­ного стекла при комнатной температуре на 12— 14 дней, затем используют. 3. Фосфатный буфер (смесь Вейзе) рН 7,4—7,5: смешивают 0,49 г ка­лия фосфата однозамещенного безводного (КН₂Р0₄) и 0,909 г натрия фосфата двузамещенного безводного (Na₂HPO,t) и дистиллиро­ванной воды 1000 мл. 4. Рабочий раствор азур-эозина: перед употреблением смешивают 25 мл основного раствора азура II, 20 мл основного раствора эозина калия и 55 мл буферного раст­вора (пропорции красителей могут варьировать, их устанавливают опытным путем при приготов­лении свежих партий основных растворов).

Реактивы для окраски мазков по Паппенгейму. 1. Раствор эозин-метиленового синего по Маю — Грюнвальду. При от­сутствии готового раствора красителя его можно приготовить, растворив 1 г сухого красителя в 1000 мл метилового спирта. Раствор готов к употреблению через 4 дня. 2. Рабочий раствор азур-эозина по Нохту.

Специальное оборудование. Кювета для фиксации и окраски мазков со шта­тивом-контейнером (при отсутствии используют эмалированные лотки с установленными для стекол «рельсами» из пары стеклянных палочек, соединенных резиновыми трубками).

Фиксация мазков. Фиксатор мазков наливают либо в кювету, либо в широкогорлую посуду с притертой пробкой. Высушенные на воздухе мазки помещают в контейнер, который опускают в кювету с фиксатором (или кладут по одному в посуду) на 5—10 мин. Вынимают кон­тейнер со стеклами из кюветы (или вынимают пинцетом стекла и устанавливают в штативе), оставляют на воздухе до полного высыхания.

Окраска по Нохту.

Высохшие фикси­рованные мазки, не вынимая из контейнера, по­мещают в кювету с рабочим раствором краски на строго определенное время, подобранное для каждой партии красителя (от 20 до 45 мин). При отсутствии кюветы с контейнером стекла поме­щают горизонтально на «рельсы» (мазком квер­ху) и наливают высокий слой (3—4 мл на мазок) рабочего раствора краски. Вынимают контейнер со стеклами из кюветы с красителем и поме­щают его в кювету с водопроводной водой (при отсутствии кюветы краску со стекол смывают, не снимая их с «рельсов», водопроводной водой). Высушивают мазки на воздухе.

Окраска по Романовскому — Г и м з е

Производится так же, как и по Нохту: в качестве красителя используют готовый раст­вор Романовского—Гимзы, который перед упот­реблением разводят из расчета 1 капля краски на 1 мл дистиллированной воды(1:10). Время окраски устанавливают опытным путем для каждой но­вой партии красителя (25—40 мин) = 30 мин

Комбинированная окраска Мая—Грюнвальда—Романов­ского—Гимзе по Паппенгему.

На нефиксированный мазок налива­ют пипеткой готовый краситель — фиксатор Мая—Грюнвальда, представляющий собой раствор эозин-метиленового синего в метиленовом спирте, на 3 мин. Через 3 мин к покрывающей раст­вор краске добавляют равное количество дистиллированной во­ды и продолжают окрашивание еще 1 мин. После этого краску смывают и мазок высушивают на воздухе. Затем высушенный мазок докрашивают свежеприготовленным водным раствором краски Романовского в течение 8—15 мин.(=10 мин).

2.9.Лейкоцитарная формула

2.9.1 Методика подсчета лейкоцитарной формулы

Количество лейкоцитов в сосудистом русле зависит от выраженности процессов их образования, скорости их выхода (мобилизации) из костного мозга и перемещения в ткани (в особенно­сти в очаги повреждения), от степени захвата легкими и селезенкой. В силу этих и других причин содержание лейкоцитов в крови здорового человека подвержено определенным коле­баниям: оно повышается к концу дня, при физической нагрузке, эмоциональном напряжении, резкой смене темпера­туры окружающей среды. Следует иметь в виду и возмож­ность перераспределения лейкоцитов в кровяном русле за счет их пристеночного накопления в сосудах с замедленным кровотоком. Увеличение их содержания наступает после при­ема пищи (пищеварительный лейкоцитоз). Даже положение руки в момент взятия крови из пальца может повлиять на ре­зультаты анализа.

Самый многочисленный отряд лейкоцитов составляют гранулоциты, т.е. зернистые лейкоциты. Зернистыми они называются потому, что в их цитоплазме обнаруживается мно­жество мелких зернышек. К зернистым лейкоцитам относят эозинофилы, т.е. лейкоциты, окрашивающиеся кислыми красителями (у здорового человека на их долю приходится (1 —5% от всего количества лейкоцитов), базофилы, окрашивающие­ся основными красками (в норме их не более 1% от всего ко­личества лейкоцитов), а также нейтрофилы, окрашивающие­ся нейтральными красителями и составляющие большинство лейкоцитов. Последние различаются по степени своей зрелости и делятся на юные лейкоциты (0-1%), лейкоциты среднего возраста — палочкоядерные (1-6 %) и зрелые, или сегментоядерные, нейтрофилы (47—72%).

Эозинофилы и базофилы служат «транспортерами» важ­ного биогенного амина — гистамина, избыток которого вызы­вает аллергические реакции, проявляющиеся, в частности, в виде крапивницы и бронхиальной астмы.

Другая разновидность лейкоцитов — агранулоциты, т.е. лейкоциты, лишенные мелких зернышек, гранул. К ним от­носятся моноциты, которые могут образовываться не только в костном мозге, но и в лимфатических узлах, элементах со­единительной ткани. К агранулоцитам причисляют также лимфоциты, образующиеся преимущественно в лимфатичес­ких узлах. У практически здорового человека моноциты со­ставляют 3—9%, лимфоциты — 19-37 от всего количества лейкоцитов.

При резкой активации кроветворения возможен выход я кровь незрелых лейкоцитарных клеток (вплоть до бластных).

Лейкоцитарная формула -это процентное соотношение различных видов лейкоцитов.В норме встречаются: нейтрофилы - палочкоядерные- 1-6 % . сегм.- 47-72 и т. д

При патологических процессах в крови могут выявлять и предшественники палочкоядерных клеток: метамиелоцит. и миелобласты.

Увеличение содержания нейтрофилов в крови характер, но для острых инфекционных заболеваний, интоксикация злокачественных новообразований, т.е. всех тех состоят которым свойственно внедрение в организм микробов, накопление в нем продуктов распада клеток, чужеродных веществ (известно, что нейтрофилы выполняют в организм фагоцитарную и бактерицидную функции). Оно особенно выражено при лейкозах. В крови больных лейкозами и страдающих так называемыми лейкемоидными реакциями обнаруживаются и предшественники обычных лейкоцитов — миелоциты, промиелоциты и миелобласты.

Появление незрелых нейтрофилов в крови (большого количества палочкоядерных нейтрофилов, метамиелоцитов юных миелоцитов, промиелоцитов) носит название нейтрофильного сдвига влево. Его выраженность отражает тяжесть патологического процесса. При многих тяжелых инфекциях септических и гнойных процессах лейкоцитарная формула изменяется за счет увеличения количества палочкоядерных нейтрофилов, метамиелоцитов и миелоцитов. Такой ядерный сдвиг влево встречается, в частности, при ангинах, остром ап­пендиците, холецистите, тяжелых формах пневмоний, актив ном туберкулезе, абсцессе легкого, гнойном менингите, дифтерии, сепсисе.

Значительное количество нейтрофилов с повышенной сегментированностью ядер характеризует нейтрофильный сдвиг вправо. Он наблюдается при лучевой болезни, некоторых других заболеваниях.

Для дополнительной, углубленной оценки сдвига в лейкоцитарной формуле (влево, вправо) нередко прибегают к рас­чету индекса сдвига (ИС) в содержании нейтрофилов, различающихся структурой ядра. Под индексом сдвига принято понимать соотношение показателей: (миелоциты+метамиелоциты+палочкоядерные нейтрофилы)/сегментоядерные нейтрофилы. В норме ИС составляет 0,06.

При лейкопенических реакциях уменьшается количеств нейтрофилов в крови. Такое наблюдается при гипо- и апластической анемии, лучевой болезни. Для этих состояний характерно угнетение продукции клеток костным мозгом, сис­тематическом употреблении некоторых лекарственных пре­паратов: сульфаниламидов, амидопирина, снотворных и др.

Изменения содержания отдельных

элементов белой крови

1.Базофилы. Увеличение числа базофилов встречается при хроничес­ком миелолейкозе, полицитемии, гемофилии, гемолитических анемиях, гипотиреозе, при введении сывороток. Уменьшение чиста базофилов ма­ло известно, так как малое нормальное содержание (0,4%) затрудняет изучение таких состояний.

2.Эозинофилы. Увеличение — эозинофилия — содержания эозинофилов в крови свыше 5—6%. Эозинофилия связана с антигистаминной, антиток­сической и фагоцитарными функциями эозинофилов. Эозинофилия встре­чается, как правило, при различных аллергических заболеваниях и синдро­мах: бронхиальной астме, крапивнице, отеке Квинке и др. В основе эозинофилии при заболеваниях лежит всасывание эозинофилами специфических аллергенов гистаминовой природы. Умеренная эозинофилия может наблю­даться при выздоровлении от инфекционных и воспалительных заболева­ний («заря выздоровления»). Повышение эозинофилов до 10—35% наблю­дается при пенициллинотерапии. Описывают случаи аутоимунной эозинофилии, достигающей иногда 60—70%, природа которых остается неизвест­ной. Эозинофилия наблюдается также при следующих болезнях крови: лимфогранулематозе и хроническом миелолейкозе (увеличение абсолютно­го количества эозинофилов при нормальном процентном соотношении — базофильно-эозинофильная ассоциация). Уменьшение — эозинопения или анэозинофилия — встречается при: острых инфекционных заболеваниях в разгаре болезни, при различных стрессовых ситуациях (инфаркт миокар­да), синдроме Кушинга, при острых лейкозах (базофильно-эозинофильная диссоциация), В_|2-фолиево-дефицитной анемии (до лечения).

3.Нейтрофилы. Увеличение — нейтрофилез — появляется при инфек­ционных или гнойно-воспалительных процессах, лейкозах (хроническом миелолейкозе и миелозе), лейкемоидных реакциях. При этом обычно воз­никает ядерный сдвиг нейтрофилов влево, т.е. повышается число незре­лых нейтрофилов — палочкоядерных форм, юных и даже миелоцитов в пе­риферической крови (незрелые нейтрофилы ставят в лейкоцитарной фор­муле слева). Обычно это сочетается с увеличением общего содержания лейкоцитов в крови и называется регенеративным сдвигом влево. Извес­тен и сдвиг вправо — уменьшение количества палочкоядерных нейтрофи­лов и повышение содержания гиперсегментированных форм (при В₁₂-фо-лиево-дефицитной анемии). Уменьшение количества нейтрофилов — нейтропения — обычно сочетается с уменьшением количества лейкоцитов и наблюдается при функциональном или органическом угнетении гранулоцитопоэза. Нейтропения встречается при вирусных инфекциях, брюш­ном тифе, бруцеллезе, малярии, тяжелом сепсисе, В_|2-фолиево-дефицитной анемии, лекарственных лейкопениях, алейкилиях (апластическая анемия). В противоположность указанному регенеративному ядерному сдвигу нейтрофилов влево существует и дегенеративный сдвиг нейтрофилов влево. Он заключается в том, что увеличивается количество только палочкоядерных форм нейтрофилов (без юных), которые дегенеративные изменения (вакуолизация цитоплазмы, пикноз). При этом имеет место нейтропения и отсутствует лейкоцитоз. Дегенеративный сдвиг влево возникает при угнетении костного мозга (тиф, туберкулез) и свидетельствует о снижении защитных сил организма.

4Лимфоциты. Увеличение — относительный лимфоцитозпри всех лейкопениях, зависящих от нейтропении (брюшной тиф, грипп); абсолютный лимфоцитоз — часто наблюдается в период выздоровления от инфекционных заболеваний, а также при доброкачественном течении туберкулеза, сифилиса, коклюше, лимфолейкозах. Уменьшение — относительная лимфопения — при нейтрофильном лейкоцитозе (круг пневмония, инфаркт миокарда), миелолейкозе; абсолютная лимфопения встречается редко (лучевая болезнь).

5.Моноциты. Увеличение — относительный моноцитоз — возникает в тех же случаях, что и относительный лимфоцитоз (при нейтропениях); абсолютный моноцитоз возникает в период выздоровления от острых инфекционных заболеваний, при гельминтозах, хронической инфекции - туберкулезе, сифилисе, инфекционном мононуклеозе. Уменьшение моноцитопения — возникает при тяжелом сепсисе, относительная миело - и лимфолейкозах.