ВИЧ-ГЕНОМ - Четвертая крупная ошибка

Важно понимать, что существование «ВИЧ» и ВИЧ/СПИД-теории были приняты до того, как были опубликованы какие-либо данные о последовательностях нуклеиновой кислоты, заявленных как геном ВИЧ.

Как было сказано ранее, ретровирусы имеют РНК-геном и реплицируются (копируются) через промежуточное звено ДНК, называемое «провирусом». Структура ДНК и РНК хорошо известна. ДНК представляет собой двухцепочечный полимер нуклеотидов, где каждый нуклеотид состоит из азотистого основания, связанного с дезоксирибозой, связанной с фосфорной кислотой. В ДНК есть четыре основания - Гуанин, Цитозин, Аденин и Тимин. Две нити в ДНК удерживаются вместе водородной связью между основаниями на противоположных цепях. Водородные связи относительно слабы и легко разрушаются, что позволяет разделить нити. Нуклеотиды на соседних цепях парами соединяются в соответствии с правилом спаривания оснований: G-пары с C и A-пары с T (GC-AT). Последовательность одной цепи предсказывает http://www.bugaco.com/calculators/dna_reverse_complement.php последовательность комплементарной цепи. РНК представляет собой одноцепочечный полинуклеотид, причем сахар представляет собой рибозу, а азотистое основание урацил заменяет тимин. РНК-цепь может связываться с одной цепью ДНК, следуя правилу связей G с C и A с U (GC-AU).

То, что может быть не столь хорошо известно, - это гибридизация нуклеиновых кислот, лабораторная техника, которая широко использовалась при исследовании ВИЧ для определения наличия или отсутствия данной ДНК или РНК in vitro (в пробирке) и in vivo (в живом организме). Эта техника основана на комплементарном спаривании оснований. Радиоактивно меченую нуклеиновую кислоту известной последовательности (зонд) добавляют к смеси неизвестных нуклеиновых кислот. Если присутствует ДНК или РНК, комплементарная зонду, две нити связываются (гибридизуются). Их объединение обнаруживается авторадиографически, хотя в настоящее время радиоактивное обнаружение в значительной степени заменено использованием более безопасных флуоресцентных или хромогенных маркеров. И зонд, и гибридизация ДНК часто упоминаются как «положительный сигнал». Обнаружение ДНК путём гибридизации называется Саузерн-блоттингом после его изобретения биохимиком Эдвином Меллором Саузерном (Edwin Mellor Southern). Подобное обнаружение РНК называется Нозерн-блоттингом.¹⁷⁷ Исследования крупномасштабной гибридизации требуют большого количества ДНК-зондов.

Это достигается путём клонирования. ДНК вставляется в ДНК микроорганизма, последний называется клонирующим вектором, обычно геном бактериофага (вирус, который заражает бактерии, также называемый фагом), часто фаг λ (лямбда). После введения «рекомбинантной» ДНК в микроорганизм, часто бактерии Escherichia coli (E. coli), бактерия культивируется, что умножает фаг с его вставленной ДНК. Затем извлекают ДНК-вставку.

Большинство геномов слишком длинны для работы и, таким образом, сначала перевариваются (разрезаются на части, соответствующего размера) ферментами, известными как рестрикционные ферменты. Это приводит к фрагментам ДНК, достаточно малым для включения в отдельные векторы, но не настолько малым, чтобы отдельные гены не делились. Коллекция различных последовательностей ДНК называется библиотекой ДНК.¹⁷⁸

Согласно центральной догме биологии, ДНК служит в качестве матрицы для синтеза РНК, которая, в свою очередь, направляет синтез белков. ДНК→ РНК→ белок. Многие типы РНК синтезируются в ядре, и большая часть их деградирует, а другие модифицируются и экспортируются в цитоплазму. Одним из последних является РНК, модифицированная полиаденилированием. Полиаденилирование представляет собой добавление аденинового полимера, состоящего из 100-200 адениновых нуклеотидов, на один конец молекулы РНК. Адениновый полимер упоминается как «поли(А) хвост» и РНК как поли(А) РНК. Поли(А) РНК также называют информационной РНК (mРНК), поскольку она направляет синтез белков (трансляцию) в цитоплазму.¹⁷⁹

ВИЧ-экперты утверждают, что можно продуцировать ВИЧ-частицы путём введения немодифицированной ВИЧ ДНК (обратной транскрипции предполагаемой ВИЧ РНК, сДНК) в клеточные культуры. Эксперты называют такую ДНК, как «инфекционный молекулярный клон». Другими словами, ДНК молекула → ретровирусные частицы. Это не следует путать с молекулярным клонированием ДНК, то есть ДНК молекула → ДНК молекула. Чтобы квалифицировать молекулярный клон как инфекционный, вводимая ДНК должна приводить к образованию вирусных частиц, несущих одни и те же морфологические признаки и биохимические компоненты, в качестве вирусных частиц, из которых была получена родительская РНК (сДНК).

Поскольку молекулярная биология стала привлекательной, важно не приравнивать её к вирусологии. ДНК, РНК и белки представляют собой большие молекулы, состоящие из повторяющихся субъединиц (полимеров). Вирусы – это инфекционные частицы из нуклеиновой кислоты, белков и других молекул. Как учит своих студентов Винсент Раканиелло (Vincent Racaniello): «Вирус это не то же самое, что вирусная [нуклеиновой кислоты] последовательность». Если вы изолируете 200 нуклеотидных последовательностей из образца, это не означает, что присутствует вирус».¹⁸⁰ На самом деле, этот вопрос был специально рассмотрен в случае Парензе (Parenzee) на апелляционном слушании⁸¹, когда прокурор представил документ, озаглавленный «последовательная идентификация микробных патогенов: пересмотр постулатов Коха"¹⁸² http://www.life.umd.edu/classroom/bsci424/BSCI223WebSiteFiles/KochsPostulates.htm

в качестве доказательства того, что генетические методы могут быть использованы для доказательства существования вируса. В ходе перекрёстного исследования один из нас (EPE – Элени Пападопулос Элеопулос) зачитала суду то, что авторы заявили в своей статье: «...при наличии только усиленной последовательности биологическая роль или даже существование этих предполагаемых микроорганизмов остаётся неясной» (выделено нами). В конечном счете, ВИЧ-эксперты, включая Галло, показали, что для выявления вирусного генома частицы вируса должны быть очищены.

http://theperthgroup.com/OTHER/ENVCommentary.pdf#page=37

ВИЧ-геном in vitro

Первоначальное действие при идентификации ДНК или РНК организма не является технологией клонирования и программирования (упорядочивания). Сотрудник полиции, желающий узнать, принадлежит ли ДНК, собранная на месте преступления, к подозреваемому, должен получить от этого лица пероральный тампон (клетки и отсюда ДНК). И впоследствии закон требует доказательной цепи, доказывающей, что источником ДНК является лицо, идентифицированное как подозреваемый. Как это есть с людьми, так это есть и с ретровирусами. Чтобы определить геном ретровируса, должно быть доказано, что существует ретровирус и нуклеиновая кислота поступает из этого ретровируса. Другими словами, учёный должен извлекать и упорядочивать (программировать) РНК из очищенных ретровирусных частиц. Тогда РНК может быть не чем иным, как ретровирусным геномом. Однако ни Монтанье, ни Галло, ни какой-либо другой исследователь по ВИЧ не определили геном «ВИЧ» таким образом.

Галло и его коллеги были первыми учёными, которые проводили эксперименты по определению генома ВИЧ. Его методы и данные приводятся в трёх статьях, опубликованных 31 августа, 8 ноября и 7 декабря 1984 г.^14-16. Факты Галло предлагают наиболее подробный пример, опубликованный для существования генома «ВИЧ», и из-за его важности мы сначала обобщим его данные, прежде чем подробно обсудим каждую деталь.