Монтанье и соавт ЭМ “вирус-продуцирующих пуповинных лимфоцитов

В 1984 году частицы Монтанье были зарегистрированы как “типичные частицы ретровируса типа С”, принадлежащего к роду Oncovirinae, подсемейству Retroviridae⁶⁰. Годом позже, Галло также сообщил о своем ВИЧ как частице типа С. Тогда же в 1984 году эксперты по ВИЧ (включая Монтанье) сообщили о том, что ВИЧ является членом другого рода Oncovirinae, т. е. ретровирусных частиц типа D.^{61, 62} В 2003 году, используя атомную силовую электронную микроскопию (с разрешением в доли нанометра), Юрий Кузнецов и его коллеги показали, что частицы ВИЧ «практически неотличимы от вирионов [вирусных частиц] вируса MuLV” (вирус мышиной лейкемии)⁶³. MuLV является прототипом ретровирусной частицы типа С.⁶⁴ Затем в 1986 году, когда имена LAV и HTLV-III были сброшены, частицы типа С Монтанье и Галло были переименованы в ВИЧ и классифицированы как род лентивируса, принадлежащий к другому Подсемейству Retroviridae, то есть, Lentivirinae.¹⁷ (Частицы, которые Монтанье предъявил как ВИЧ в своей Нобелевской лекции⁶⁵ в декабре 2008 года, бросают вызов классификации ^{66, 67}

ЗДЕСЬ http://www.theperthgroup.com/Nobel/MontagnierEMNobel.pdf

Ретровирусная таксономия, используемая до и в течение 1980-х годов, описана в Перспективах медицинской вирусологии», том 3, 1987 (Perspectives in Medical Virology Volume 3 dated 1987), «Критерии классификации ретровирусов являются главным образом морфологическими признаками, как видно на ультратонких срезах: местоположение ядра (таблетированное в цитоплазме или образованное во время бутонизации процесса в плазматической мембране); форма и размер поверхностных выступов (подобные шипу или ручке); наличие или отсутствие электрон-светящегося пространства между оболочкой и ядром в незрелых частицах, а также форма и расположение ядер в зрелых частицах».⁶⁰ Учитывая эти факты, крайне маловероятно, что электронные микроскописты могли бы ошибочно классифицировать один и тот же вирус членом двух Подсемейств и трех родов семейства Retroviridae. Или нет согласия, к какому Подсемейству или роду принадлежит «ВИЧ», или, поскольку вирусы Монтанье и Галло являются «типичными типа С» частицами и вирусы-типа С не являются лентивирусами, ретровирус, называемый сейчас ВИЧ, не мог быть обнаружен, о чём сообщали Монтанье и Галло в 1983 и 1984 годах соответственно.

Модель Ганса Гельдерблома (Hans Gelderblom) «идеальной» ВИЧ-частицы.^59,68

Эксперты в области ВИЧ согласны с тем, что на поверхности вирусной частицы имеются шипы/вздутия, присутствие которых является абсолютным требованием для инфицирования.⁶⁹ Говорят, что вздутия состоят из двух белков: gp120 и gp41 (GP = гликопротеин). Ганс Гельдерблом из Института Роберта Коха в Берлине является ведущим экспертом в области электронной микроскопии ВИЧ. В 1987 году он и его коллеги опубликовали модель “идеальной” частицы ВИЧ, утверждая, что «На «идеальной» нетронутой частице ВИЧ можно определить 72 вздутия». Тем не менее, в своих самых подробных электронных микроскопических исследованиях группа Гельдерблома сообщила, что «высвобождаемые клетками, "зрелые" частицы ВИЧ представляют собой на сегодняшний день большинство вирусных структур...Потеря ручек с поверхности, очевидно, коррелирует морфологически с созреванием вируса. Незрелые и/или начинающие частицы ВИЧ “покрыты шипами”, но они редко наблюдаются» и наблюдаются только “на клетках с нарушениями обмена веществ”.^{59, 68, 70} незрелые частицы имеют вздутия, но по определению не заразны. Поскольку вздутия имеют решающее значение для инфекционной активности, но теряются во время созревания, зрелые частицы также не могут быть инфекционными.

В 2006 году Пин Чжу и коллеги ⁷¹ опубликовали в Nature статью на тему «Распределение и трехмерная структура шипов в оболочке вируса СПИДа». Несмотря на название, предполагался дискурс об “оболочечных шипах” ВИЧ, на самом деле они проанализировали и "создали трехмерную (3D) модель SIV (СИВ) [вирус иммунодефицита обезьяны] [оболочка] шип, но не ВИЧ. Кроме того, они утверждали, что частицы ВИЧ имеют " 14 ± 7 оболочечных шипов на частицу (диапазон от 4 до 35) (см. примеры на рис. 2b-d)”. Однако фиг. 2b-d показывает только «поверхностно-визуализационные модели» вирионов ВИЧ с «предполагаемыми оболочечными шипами» (добавлен акцент). На снимках на рис. 1b (ВИЧ-1 ниже), которые предположительно являются их лучшими «примерами предполагаемыхоболочечных шипов на выбранных вирионах», трудно, если не невозможно, увидеть какие-либо шипы на частицах ВИЧ-1 (добавлен акцент). Изображение ВИЧ-1 также содержит структуры, напоминающие «предполагаемые оболочечные шипы» в частях изображения, где нет частиц. Эти мнения разделяют бескорыстные ученые, компетентные в этой области⁷².

Надпись Чжу гласит: «Рис. 1. Представлены томографические изображения мутанта SIV и дикого типа ВИЧ-1....Примеры предполагаемых оболочечных шипов на выбранных вирионах обозначены стрелками...

Масштабные полосы, 100 нм” (сверху справа на каждом изображении).

Это согласуется с предыдущей работой исследователей, где «Иммуноэлектронный микроскопический анализ с использованием сывороток от ВИЧ-1-инфицированных пациентов» показал небольшую маркировку [антителами, которые связываются с белками ручек/шипов] зрелых частиц ВИЧ-1» ⁷³ и с выводами Ганса Гельдерблома. Различия между Гельдербломом и Чжу с другими: (i) Гельдерблом утверждает, что шипы быстро теряются в процессе созревания, тогда как, по мнению Чжу и коллег, шипы не теряются, но их количество определяется, прежде всего, низким включением поверхностных ВИЧ-белков в частицы; (ii) по мнению Гельдерблома, «возможно, что структуры, напоминающие вздутия, могут наблюдаться даже тогда, когда не было gp120 [шипов], то есть ложных срабатываний» ⁷⁴, тогда как Чжу и др. называют их «предполагаемыми оболочечными шипами». В комментариях на последнее предложение Чжу и др. в Nature ⁷⁵ Деннис Бартон (Dennis Burton) ссылался на статью Кузнецова и др в Журнале вирусологии 2003 года, в которой отмечалось, что «исследования с помощью атомной силовой микроскопии дали другое представление об оболочечном шипе ВИЧ». В своей работе Кузнецов и др⁶³. объясняют, что они выбрали атомно-силовую микроскопию для своего анализа, потому что «криоэлектронная микроскопия, по-прежнему страдает от проблем в интерпретации результатов из-за суперпозиции признаков».

Их данные показали, что «Группы gp120 не образуют шипов на поверхности ВИЧ, как это обычно описывается в литературе», и они «не обнаружили никаких доказательств того, что мономеры gp120 образуют тройные симметричные тримеры ... Мы предполагаем, что шипы, наблюдаемые с помощью электронной микроскопии с отрицательной окраской, могут быть артефактом проникновения пятна тяжелого металла между белками оболочки. Действительно, термин «шип», по-видимому, принял довольно неточное, возможно вводящее в заблуждение определение, и его можно было бы использовать с осторожностью». Другими словами, «различный взгляд на оболочечный шип ВИЧ» Бартон приписывает Кузнецову, что у ВИЧ нет оболочечных шипов.

Таксономия и отсутствие шипов/ручек - не только проблемы «частичек ВИЧ». Некоторые из них включают:

1. Ретровирусные частицы типа С являются вездесущими. Они присутствуют «в большинстве, если не во всех, плацентах человека» ⁷⁶, а также в тканях из рыбы, змей, фазанов, перепелов, куропаток, индейки, мышей, агути, ленточных червей, насекомых и млекопитающих.⁷⁷ Электронная микрофотография частиц «ВИЧ» Монтанье была таковой в культуре лимфоцитов, полученных из пуповинной крови двух плацент человека.

2. В третьем эксперименте Монтанье к лимфоцитам пуповинной крови добавляли бесклеточный супернатант из культуры клеток BRU. Следовательно, частицы должны были возникнуть из этих клеток.

Тем не менее, лимфоциты пуповинной крови вызывают ускоренную бутонизацию вирусоподобных частиц «независимо от ВИЧ-инфекции».^78-80 Поскольку у Монтанье не было никаких контролей, невозможно связать частицы типа С, наблюдаемые в третьем эксперименте, с передачей ретровируса, происходящего от BRU.

3. Клетки от СПИД-пациентов часто культивируются совместно с бессмертными клеточными линиями, такими как H9, которые, как утверждается, облегчает то, что Галло называет «непрерывным производством» и «истинной изоляцией» ВИЧ⁸¹. Однако электронная микроскопия показывает множество ретровирусных и неретровирусных частиц в этих культурах. ^{59, 82, 83, 84} ВИЧ-эксперты продолжают молчать о происхождении, характере, роли и взаимосвязи этих частиц со СПИДом.⁸⁵

4. Частицы, идентифицированные как ВИЧ, наблюдаются в увеличенных лимфатических узлах больных СПИДом. Однако идентичные частицы наблюдаются также с одинаковой частотой в увеличенных лимфатических узлах пациентов, не имеющих СПИДа и не подверженных риску СПИДа. О таких пациентах сообщалось, в обширном, подробном и ослепительном электронно-микроскопическом исследовании О'Хары (O'Hara) и его коллег из Гарварда. "Частицы ВИЧ" были обнаружены у 18/20 (90%) пациентов с увеличенными лимфатическими узлами, отнесенными к СПИДу, тогда как идентичные частицы были обнаружены у 13/15 (87%) пациентов с увеличенными лимфатическими узлами, не отнесенными к СПИДу.⁸⁶

О'Хара и др.

5. По оценкам ВИЧ-экспертов Дэвида Хо⁸⁷ и Ксипинга Вэй⁸⁸⁽Xiping Wei) ВИЧ-положительные индивиды имеют массивную ВИЧ-инфекцию с самого начала, при которой «среднее общее производство ВИЧ-1 составило 10,3 x 10(9) [109] вирионов в день». Вэй цитирует Михаила Пятака, что «практически все ВИЧ-1-инфицированные лица, независимо от клинической стадии, проявляют стойкую плазменную вирусемию в диапазоне от 102 до 107 вирионов на мл”.⁸⁹ Гельдерблом пишет "Препараты для электронных микроскопических диагностических процедур требуют концентрации частиц от 106 до 108/мл. Поэтому отрицательные данные не является абсолютным диагнозом. Существует ряд эффективных концентраций или иммунологических процедур, которые заметно повышают чувствительность электронной микроскопической диагностики образцов с более низкими концентрациями частиц”. Такие методы могут повысить чувствительность в 5-1000 раз.⁹⁰ В 2014 году было сообщено, что недавно инфицированные пациенты могут иметь вирусемию до 108 частиц на мл.⁹¹ В этом случае, несомненно, можно будет подтвердить вирусемию с помощью электронной микроскопии. Тем не менее, на сегодняшний день не опубликовано ни одного электронного микрографа, подтверждающего наличие ретровирусных частиц у любого пациента с «вирусемией ВИЧ», в том числе “в диапазоне от 102 до 107 вирионов на мл”.²⁶

Многие изображения, претендующие быть «ВИЧ», являются «артистами» или компьютерной графикой, а не оригинальными, нетронутыми электронными микрофотографиями. Например, первая страница Международного информационного бюллетеня по СПИДу (International AIDS Society Newsletter, March 2007), в марте 2007 года, озаглавлена «Отрицатели СПИДа». В этом издании описывается глобальное влияние СПИД-отрицания». Около 75% страниц занято разноцветными картинками, которые, по-видимому, предназначены для представления части клеток с почками и свободных клеток «ВИЧ-частиц». Эта картинка - не электронная микрофотография, а компьютерная графика с надписью «Изображение: дочерние клетки ВИЧ зарождаются с поверхности Т-клетки».^.92 Однако вирусы не могут быть «дочерними клетками», потому что вирусы не являются клетками.

Другим примером является новостной материал, опубликованный в Nature 20 ноября 2003 года под названием «Медицинский журнал [British Medical Journal] под атакой, когда инакомыслящие захватывают платформу СПИДа».⁹³ Одна страница этой статьи включает в себя сканированную электронную микрофотографию с надписью, которая гласит: «Веб-сайт BMJ переносит публикации, которые отрицают, что ВИЧ, наблюдаемый здесь в лейкоците, вызывает СПИД ». Изображение, похожее на ложку спагетти, занимает около четверти доступного пространства, по-видимому, отражая ее важность. Однако источник электронной микрофотографии не указан, «ВИЧ» не имеет маркировки и не имеет размера. Появление клетки на микрофотографии не похоже на никакую клетку лейкоцитов, которая когда-либо проходила через сосудистую систему. Если отображаемые частицы действительно являются ретровирусами, они, очевидно, находятся на клетке, а не в клетке, как утверждает автор. Кроме того, эти поверхностные частицы являются цилиндрическими, а не сферическими и имеют длину в несколько микрон.

В любом случае, такие проявления и размеры были бы уникальными не только для «ВИЧ», но и для любого другого ретровируса, видимого с помощью электронной микроскопии. Наша группа написала в журнал «Природа» (Nature), поставив под сомнение эту нехарактерную нехватку научной строгости, и предположила, что из-за важности этого вопроса Nature может либо запросить разъяснения у ВИЧ-экспертов, либо, что предпочтительнее, организовать научную дискуссию между двумя сторонами, оценённую незаинтересованными учёными. Таким образом, вопрос мог бы быть разрешён раз и навсегда. Наше письмо http://www.theperthgroup.com/REJECTED/NatDecRejected.pdf

было отклонено, но нам сказали, что Nature «вероятно, опубликует исправление». Хотя мы являемся постоянными читателями Nature, нам ещё предстоит увидеть это исправление.

Надпись: «Веб-сайт BMJ переносит публикации, которые отрицают, что ВИЧ, наблюдаемый здесь в лейкоците, вызывает СПИД».

Дело в том, что, как и в случае активности обратной транскриптазы, ретровирусоподобные частицы являются неспецифичными. Ретровирусоподобные частицы могут быть обнаружены у людей с заболеваниями, не связанными со СПИДом, и даже не больных.^{69, 94, 95} Неспецифические результаты распространены в медицине. Лихорадка, например, является признаком сотен заболеваний, а не диагнозом. Подобно тому, как лихорадка указывает на наличие заболевания, но не указывает, какое заболевание, ретровирусные частицы и активность обратной транскриптазы указывают на возможное расстройство, но не являются специфичными для ретровирусов.