Энтеровирусные инфекции. Лабораторная диагностика гепатитов А, Е, полиомиелита, инфекций, вызываемых вирусами Коксаки, ECHO, ротавирусами

Занятие № 2.1.4

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:

изучить основные группы энтеровирусов; биологические свойства возбудителей гепатитов А, Е, полиомиелита, вирусов Коксаки, ECHO, ротавирусов; принципы вирусологической диагностики энтеровирусных инфекций.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:

1. Характеристику биологических свойств возбудителей.

2. Клинику, патогенез, эпидемиологию, восприимчивость, иммунитет, механизм передачи возбудителей при энтеровирусных инфекциях.

3. Принципы лабораторной диагностики гепатитов А, Е, полиомиелита, инфекций, вызванных вирусами Коксаки, ECHO, ротавирусами.

4. Основы профилактики гепатитов А, Е, полиомиелита,

инфекций вызванных вирусами Коксаки, ECHO, ротавирусами.

5. Препараты для диагностики, лечения и профилактики энтеровирусных

инфекций.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:

· составлять алгоритм вирусологического обследования пациента с
энтеровирусной инфекцией;

· интерпретировать результаты вирусологических исследований с целью
диагностики энтеровирусных инфекций;

· классифицировать препараты в соответствии с их назначением.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ВЛАДЕТЬ:

алгоритмом лабораторной диагностики инфекционных болезней;

методами анализа и оценки результатов лабораторной диагностики по выявлению возбудителейвирусных кишечных инфекций.

Ситуационная задача 1

В Индию прибыла группа врачей по линии ВОЗ для выявления больных полиомиелитом и оказания помощи в проведении поголовной вакцинации против полиомиелита. В одной из обследованных деревень к врачам принесли из многодетной семьи мальчика 6 лет, который заболел 5 дней назад. Внезапно повысилась температура, сильно заболела голова, была повторная рвота, боль в руках и ногах. При обследовании: высокая температура, резкая слабость, менингеальные симптомы, на правой ноге снижен мышечный тонус, резко ослаблен сухожильные рефлексы, стопа свисает. При пункции спинномозгового канала цереброспинальная жидкость вытекла под повышенным давлением, увеличено количество лимфоцитов, бактерии не выделены. Поставлен предварительный диагноз «Паралитическая форма полиомиелита». Каким путем мог заразиться мальчик? Как проводиться специфическая активная профилактика полиомиелита? Существует ли опасность заражения других детей этой семьи, что необходимо предпринять? Какие методы необходимо использовать для лабораторной диагностики?

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Работа № 1. Принципиальная лабораторная диагностика энтеровирусных инфекций

Цель:изучить схему лабораторной диагностики энтеровирусных инфекций. Самостоятельная работа: отметить основные направления и этапы лабораторной диагностики энтеровирусных инфекций (см. теоретическую справку).Отметить необходимость и информативность используемых методов.

Энтеровирусные инфекции. Лабораторная диагностика гепатитов А, Е, полиомиелита, инфекций, вызываемых вирусами Коксаки, ECHO, ротавирусами - student2.ru Исследуемый материал:

____________________

Работа № 2. Строение энтеровирусов

Цель:изучить морфологию энтеровирусов.

Самостоятельная работа: используя атлас, теоретическую справку, зарисовать строение вирусов полиомиелита, ECHO, Коксаки, гепатитов АиЕ, ротавирусов; описать, сделать вывод.

пикорнавирусыгепевирусы (вирус ГЕ) реовирусы (ротавирус)

Вывод:________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Работа № 3. Вирусологическая диагностика энтеровирусов

Методические указания

Идентификацию вирусов проводят в различных серологических реакциях, используя известные специфические антитела. Например, вирусы полиомиелита можно дифференцировать от вирусов Коксаки А и В, ECHO в РСК, используя антитела к общему антигену (VP-4) для всех типов вирусов полиомиелита.

В реакции использована диагностическая сыворотка, содержащая антитела к общему (внутреннему) антигену вируса полиомиелита VP-4 и исследуемый вируссодержащий материал.

Тип вируса полиомиелита определяют в реакции нейтрализации по цветной пробе, используя антитела к поверхностным антигенам вирусов полиомиелита 3-х типов (VP-1, VP-2 и VP-3).

Самостоятельная работа

А) Цель:учестьрезультат РСК, поставленной с целью идентификации вируса полиомиелита, выделенного от больного с подозрением на полиомиелит.

Направление:___________________________________________________________________

Ингредиенты:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Механизм:

Постановка:

Опыт КС КДКГС

Результат:_____________________________________________________________________

Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

Б) Определить тип вируса полиомиелита в реакции нейтрализации по результату постановки цветной пробы, используя антитела к поверхностным антигенам вирусов полиомиелита 3-х типов (VP-1, УР-2 и VP-3). Учесть результат реакции. Сделать вывод.

Методические указания

Цветная проба для обнаружения вируса полиомиелита в культуре тканиприменяется наряду с изучением цитопатического эффекта, вызываемого вирусом в культуре тканей. В пробирки с культурами тканей и питательной средой вносят исследуемый материал и индикатор феноловый красный, пробирки ставят в термостат. В этом случае, если вирус не размножается в культуре ткани, кислые продукты метаболизма клеток поступают в среду, которая приобретает желтую окраску. Если же полиовирусы размножаются в клетках тканей и пораженные клетки гибнут, то среда сохраняет первоначальный красный цвет, так как в неё не поступают кислые продукты метаболизма клеток и не изменяют её окраску. При рН 7,4-7,8 цвет среды красный, при рН 7,2 — оранжевый, при рН 7,0 и ниже — жёлтый. Таким образом, по изменению цвета среды с культурой тканей, куда внесён исследуемый материал и индикатор, можно судить о поражении клеток вирусами.

Направление:___________________________________________________________________

Механизм:

Постановка:

	Диагностические сыворотки, содержащие антитела к поверхностным антигенам вируса полиомиелита	Контроль среды	Контроль культуры клеток	Контроль вируса
	VP-1(тип1)	VP-2 (тип2)	VP-3 (типЗ)
Результат реакции

Вакцина «ИмоваксПолио»

2._____________________________________________________________________________

3._____________________________________________________________________________

4._____________________________________________________________________________

5._____________________________________________________________________________

6._____________________________________________________________________________

Вакцина «Аваксим»

2._____________________________________________________________________________

3._____________________________________________________________________________

4._____________________________________________________________________________

5._____________________________________________________________________________

6._____________________________________________________________________________

Вакцина ротавирусная

2._____________________________________________________________________________

3._____________________________________________________________________________

4._____________________________________________________________________________

5._____________________________________________________________________________

6._____________________________________________________________________________

Заполнить контрольные карты по предложеннымнозоформам:

ПОЛИОМИЕЛИТ

Эпидемиология

Источник инфекции____________________________________________________________________

Механизм передачи______________________________________________________________________

Пути передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Факторы передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Патогенез

Входные ворота________________________________________________________________________

Инкубационный период______________________________________________________________________

Основные фазы патогенеза___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Назовите основные клинические формы полиомиелита:

____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Лабораторная диагностика_____________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Неспецифическая профилактика (мероприятия)____________________________________________________________________________________________________________________________________________

Специфическая профилактика (препараты)______________________________________________________________________________________________________________________________________________

ГЕПАТИТ Е

Эпидемиология

Источник инфекции____________________________________________________________________

Механизм передачи______________________________________________________________________

Пути передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Факторы передачи___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Патогенез

Входные ворота________________________________________________________________________

Инкубационный период______________________________________________________________________

Особенности течения гепатита Е:

____________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Лабораторная диагностика_____________________________________________________

_____________________________________________________________________________

Эпидемиология

Источник инфекции____________________________________________________________

Механизм передачи____________________________________________________________

Пути передачи________________________________________________________________

Факторы передачи_____________________________________________________________

Патогенез

Входные ворота_______________________________________________________________

Инкубационный период________________________________________________________

Основные клинические проявления:

_____________________________________________________________________________

Лабораторная диагностика____________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Специфическая профилактика (препараты)_________________________________________________________________

Эпидемиология

Источник инфекции____________________________________________________________

Механизм передачи____________________________________________________________

Пути передачи________________________________________________________________

Факторы передачи_____________________________________________________________

Патогенез

Входные ворота_______________________________________________________________

Инкубационный период________________________________________________________

Основные клинические проявления:

_____________________________________________________________________________

Лабораторная диагностика____________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Специфическая профилактика (препараты)__________________________________________________________________

Подпись преподавателя_________________________________________________________

СИТУАЦИОННЫЕ ЗАДАЧИ

1. В приемное отделение инфекционной больницы поступило несколько детей в возрасте 10-12 лет из пригородного спортивного лагеря. По клиническим симптомам был поставлен предварительный диагноз «Гепатит А?». Какой исследуемый материал необходимо взять для лабораторного исследования? Какие методы необходимо использовать для диагностики заболевания? Возможные источники и пути заражения?

2. В приемное отделение инфекционной больницы поступили двое больных с желтухой. Возникло подозрение на гепатит А. В целях подтверждения диагноза в лабораторию отправлена сыворотка крови больных для проведения иммуноферментного анализа с использованием диагностикума вируса гепатита А. Оценить результат, записать протокол, сделать выводы. Как проводится специфическая профилактика гепатита А?

Выделяется для учета результатов исследования полистироловый планшет с результатами ИФА.

Диагностикум	Сыворотки
	Больной 1	Больной 2	Положительный контроль	Отрицательный контроль
Диагностикум гепатита А	+ (окрашивание)	- (отсутствие окрашивания)	+	-

Какую тест-систему взяли для исследования? Зарисовать схему реакции (ИФА) в данном исследовании. 3. У кого из больных подтвержден диагноз гепатита А и почему?

3. В инфекционную больницу массово поступили пациенты с жалобами на боли в правом подреберье, тошноту, рвоту, головную боль, изменения цвета мочи и кала. При обследовании выявлены гепато- и спленомегалия, желтушность склер и кожных покровов. В анамнезе – употребление водопроводной воды после аварии на водозаборе. Какой материал следует взять на исследование в острый период для выявления возбудителя? ИФА поставлена с диагностической сывороткой и исследуемым материалом. Учесть и описать реакцию по схеме: направление, механизм, ингредиенты, результат, вывод.

4. Женщина, 25 лет на 3 неделе беременности поступила в клинику с жалобами на общую слабость, тошноту, отсутствие аппетит, ноющие боли в правом подреберье. Из анамнеза, больная приехала из Туркменистана. Ответить на вопросы: какой вирус гепатита мог вызвать инфекционный процесс у больной? Указать тропизм вируса. Перечислить признаки, характерные для данной инфекции. Составить план лабораторного обследования на гепатит, указать, какие реакции и с какой целью используются для диагностики заболевания.

5. Двое работниц из числа обслуживающего персонала ГИКБ №1 - Евсеева В. и Астафьева Н. заболели инфекционным гепатитом. Было известно, что Евсеева В. (по совместительству) постоянно проводила уборку в санузлах, а Астафьева Н. осуществляла предстерилизационную очистку материала, часто загрязненного биологическими жидкостями от больных, в том числе и кровью. Учитывая разные условия работы, какими видами гепатита могли вероятнее всего, заразиться Евсеева В. и Астафьева Н.? Что могло способствовать заражению работниц? Какие пути заражения для каждого из случаев наиболее вероятны? Какие вирусы гепатита передаются парентеральным и половым путями? Как необходимо дезинфицировать руки при попадании на них крови или любого другого биологического материала от больных?

6. Две студентки МУ проходили УПП в ГИКБ №1. Студентка Сидорова Е., в основном, работала в процедурном кабинете, а студентка - Иванова Р. - в палатах (осуществляла сестринский уход за больным гепатитом). Через две недели после прохождения УПП Иванова Р. почувствовала недомогание, а через 3 дня стала темнеть моча (напоминать цвет пива). Через 4 месяца такие же симптомы заболевания появились у Сидоровой Е., что характерно для больных инфекционным гепатитом. Ответить на вопросы: поставьте предварительный диагноз заболевшим студенткам. Какими характерными свойствами обладают возбудители этих гепатитов? Какие механизмы передачи характерны для разных видов возбудителей? Как называется скрытый период болезни? Какова его продолжительность у данных больных?

7. В лабораторию поступили сыворотки крови больных детей с подозрением на полиомиелит для определения в них специфических вируснейтрализующих антител. Поставлена цветная проба с соответствующимдиагностикумом в динамике. Результаты исследования – в таблице. Учесть результаты и ответить на вопросы. Какие ингредиенты необходимы для постановки цветной пробы в данном серологическом методе? Каким должен быть результат цветной пробы при условии обнаружения вируснейтрализующих антител в исследуемом материале? Кто из обследуемых болен полиомиелитом? Чем объяснить наличие вируснейтрализующих специфических антител в сыворотке Больного 2.?

Обследуемые	Дни	Разведение сывороток
1/10	1/20	1/40	1/80	1/160	К
Больной 1	5-й	+	-	-	-	-	-
	15-й	+	+	+	+	+	-

Больной 2	5-й	+	-	-	-	-	-
	15-й	+	-	-	-	-	-

8. В лабораторию поступила сыворотка крови больного с подозрением на перенесенную энтеровирусную инфекцию. Для подтверждения диагноза была поставлена цветная проба с соответствующимидиагностикумами. Оценить результат, сделать вывод. Ответить на вопросы: цель постановки реакции. Каков механизм изменения цвета среды? Какой диагноз подтверждается и почему?

Диагностикум	Разведение сыворотки
	1/4	1/8	1/16	1/32	1/64	К
ЕСНО	- (красный цвет среды 199)	-	-	-	-	-
Коксаки	+ (изменение цвета среды на желтый)	+	+	+	+	-

9. У ребенка повышение температуры тела, общее недомогание, головные боли, рвота, боли в горле. Выяснено, что он находился в контакте с больным полиомиелитом. Какой материал следует взять для исследования? Какая должна быть поставлена серологическая реакция? Учесть и описать реакцию по схеме: направление, механизм, ингредиенты, результат, вывод.

10. В лабораторию поступили исследуемый материал от пациента с подозрением на энтеровирусную инфекцию. Какой материал взят на исследование? Для подтверждения диагноза поставлена РН по методу цветной пробы полиомиелитными диагностическими сыворотками типов 1, 2, 3. Учесть и описать реакцию по схеме: направление, механизм, ингредиенты, результат, вывод.

11. Вечером, после возвращения из детского сада девочки И., 3-х лет,мама обратила внимание на бледность ребенка, вялость, высокую температуру (38 градусов С). Вечером была два раза рвота, утром ребенок стал жаловаться на боль в животе и появился неоднократный жидкий водянистыйстул. Педиатр, посетивший больного ребенка, поставил диагноз: «Ротавирусный гастроэнтерит».

Задание:

1. Укажите таксономическое положение ротавирусов. 2. Охарактеризуйте распространение во внешней среде, источники и возможные пути передачи.

3. Назовите применяемые методы лабораторной диагностики ротавирусной инфекции. 4. Укажите таксономическое положение ротавирусов. 5. Опишите морфологию вирионов и их антигенный состав. 6. Объясните этапы репродукции ротавирусов. 7. Объясните патогенез ротавирусного гастроэнтерита. 8. Назовите цели и применяемые методы лабораторной диагностики ротавирусной инфекции.

Решение ситуационной задачи:

Теоретическая справка

Маркеры гепатитов А и Е

Возбуди-тель	Маркеры	Диагностическое значение
Вирус HA	Антиген HAV Ag анти-HAVIgM анти-HAVIgG	Определяется в фекалиях уже через 10–20 дней после заражения и обычно сохраняется там короткое время (не более 1–2 недель). Появляются в сыворотке в начале желтушного периода и сохраняются до 6 месяцев. Таким образом, выявление антител анти-НAV IgM указывает на острое заболевание вирусным гепатитом А. Появляются в начальной стадии инфекции и сохраняются в крови всю жизнь.Обнаружение в крови антител анти-HAV IgG при отсутствии анти-HAV IgM указывает на перенесенный в прошлом вирусный гепатит А.
Вирус HE	антигеныВГЕ анти-HEVIgM анти-HEVIgG	Определяют методом иммуноэлектронной микроскопии, ПЦР,иммунофлюоресцирующих антител (МФА) в фекалиях больных определяются с высокой частотой в сыворотках больных ГЕ в острой стадии заболевания и в период ранней реконвалесценции; свидетельствуют о перенесенной в прошлом ГЕ - инфекции.