Изучение биохимических свойств микроорганизмов. Использование современных тест-систем для идентификации микроорганизмов.

Изучение ферментативной активности микроорганизмов. В пре­делах семейства у представителей разных родов можно обнару­жить как общие для семейства, так и специфические для родов наборы ферментов. У микроорганизмов разных видов в пределах одного рода есть общие (родовые) и специфические для отдель­ных видов ферменты. Таким образом, каждый вид микроорга­низмов характеризуется специфическим набором ферментов, по­этому определение ферментного спектра — важнейший этап идентификации микроорганизмов.

О наличии того или иного фермента судят по способности микроорганизмов воздействовать на известный субстрат. При­сутствие фермента регистрируют по изменению физического со­стояния субстрата (разжижение желатины), закислению пита­тельной среды (среды Гисса с углеводами), образованию опреде­ленных продуктов метаболизма (индол, сероводород, аммиак) и т.д.

Проводят выявление сахаролитической, липолитической, протеолитической активности. Для ускоренной идентификации используют готовые тест-системы (готовые среды, малые объемы), существенно облегчающие работу.

Этапы приготовления питательных сред. Правила хранения питательных сред. Контроль качества готовых питательных сред.

Приготовление рабочего места, навески, варка, фильтрование при необходимости, установление рН, стерилизация, розлив. Контроль, хранение. .Хранение при комнатной температуре или в холодильнике. В соответствии с МУ «Методы контроля бактериологических питательных сред» проводится контроль качества. Рост музейной культуры; изменение среды музейной культурой; контроль химический.

20. Питательные среды. Приготовление основных, специальных, элективных и диффе­ренциально-диагностических сред питательных сред.

Они могут выть жидкими, твердыми (лучше называть их плотными) или полужидкими. Жидкие cреды готовят на основе водных растворов каких-либо веществ, чаще всего мясной воды, различных гидролизатов, иногда жидких естественных продуктов (молока, крови и др.). Для получения плотных сред к ним добавляют или агар, или желатин в соответствующих концентрациях. По происхождению среды делят на естественные (кровяные, молочные, картофельные, яичные) и искусственные, получившие особенно широкое распространение.

Элективные (избирательные) — служат для выделения определённого вида микробов, росту которых они благоприятствуют, задерживая или подавляя рост сопутствующих микроорганизмов. Среды становятся элективными при добавлении к ним определённых антибиотиков, солей, изменения pH. Жидкие элективные среды называют средами накопления.

-Дифференциально-диагностические — среды, позволяющие отличать одни виды бактерий от других по их ферментативной активности или культуральным проявлениям. К ним относятся среды Эндо, Левина, Плоскирева, Гисса и многие др.

-Среда Эндо. Состоит из МПА с добавлением 1% лактозы и обесцвеченного сульфитом натрия основного фуксина (индикатор). Среда Эндо имеет слаборозовый цвет. Используется в диагностике кишечных инфекций для дифференциации бактерий, разлагающих лактозу с образованием кислых продуктов, от бактерий, не обладающих этой способностью.

-Среда Плоскирева. В состав среды входят: сухого питательного агара с желчными солями, лактозы, 3,7% фосфорнокислого натрия, 0,03—0,06% нейтрального красного, 0,002 бриллиантового зеленого, и др.

22.Определение pH, разливка и сте­рилизация питательных сред. Оценка качества питательных сред.

Установление рН сред ориентировочно производят с помощью индикаторных бумажек. Для точного определения рН используют потенциометр. Разливают среды в пробирки (по 3—5 мл или по 10 мл), флаконы, колбы, матрицы и бутылки не более чем на 23 емкости, так как при стерилизации могут намокнуть пробки и среды утратят стерильность. Среды, которые стерилизуют при температуре выше 100°С, разливают в чистую сухую посуду. Среды, стерилизуемые при более низкой температуре, обязательно разливают в стерильную посуду.

Качество среды оценивают по питательности, химическому составу, стерильности, плотности.