Определение группы крови с помощью моноклональных антител
Моноклональные антитела Анти-А (красного цвета), Анти-В (синий) и Анти-АВ (бесцветная смесь) выпускаются во флаконах по 10 мл для определения групп крови системы АВО на пластине или планшете.
Нанесите Анти-А, Анти-В и Анти-АВ на планшет или пластину по одной капле (около 0,1 мл) под соответствующие надписи. Рядом с этими каплями нанесите по одной маленькой капле исследуемой крови (объём 0,01-0,03 мл) и смешайте её с расположенным рядом реагентом.
Наблюдайте за ходом реакции при легком покачивании пластины или планшета. О наличии агглютинации эритроцитов свидетельствует появление мелких красных агрегатов, сливающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет.
Вызванная Анти-А, Анти-В и Анти-АВ агглютинация эритроцитов обычно наступает в первые 3-5 сек. Однако, в тех случаях, когда эритроциты содержат слабые разновидности агглютиногенов А или В, агглютинация замедляется. Поэтому наблюдение следует вести 3 мин.
При наличии агглютинации во всех каплях, необходимо исключить неспецифическую агглютинацию. Для этого смешивают на плоскости 1 каплю исследуемой крови с каплей физиологического раствора.
Интерпретация результатов реакции агглютинации исследуемой крови представлена в таблице 8.
Таблица 8.
Интерпретация результатов реакции агглютинации исследуемой крови с Анти-А, Анти-В и Анти-АВ
| Результат реакции* с ЦОЛИКЛОНОМ: | Группа исследуемой крови | ||
| Анти-А | Анти-В | Анти-АВ | |
| - | - | - | 0 (I) |
| + | - | + | А (II) |
| - | + | + | В (III) |
| + | + | + | АВ (IV) |
* +- наличие агглютинации, -- отсутствие агглютинации
Кровь можно отнести к группе АВ (IV) только если и в физиологическом растворе (без Анти-А, Анти-В и Анти-АВ) агглютинации эритроцитов нет.
Группы крови определяются в помещении с хорошим освещением при комнатной температуре и заносятся в карточку животного.
Биохимические исследования
Вышеописанные лабораторные исследования крови дают специалисту лишь исходную информацию о состоянии здоровья животного. Поэтому при подозрении на наличие того или иного отклонения от нормы могут потребоваться биохимические анализы крови. Они позволяют уточнить состояния белкового, углеводного, жирового и витаминного обменов, а также функциональное состояние многих внутренних органов животного перед убоем.
Кровь для биохимических исследований берут в чистую сухую пробирку строго по ее стенке и оставляют до свертывания. Затем, стеклянной палочкой отделяют сгусток от стенок пробирки, а пробирку с оставшейся после удаления сгустка частью крови центрифугируют 10 минут при 1,5 тыс. оборотов в минуту. Образовавшуюся надосадочную жидкость (сыворотку) осторожно отбирают пипеткой или шприцем. Не рекомендуется использовать для анализа гемолизированную (то есть с лаковым оттенком) сыворотку.
Наиболее часто определяемыми показателями биохимического статуса животных, являются: общий белок, альбумин, глюкоза, АЛТ (аланинаминотрансфераза), ACT (аспартатаминотрансфераза), щелочная фосфатаза (ЩФ), амилаза, креатинфосфокиназа (КФК), общий билирубин, прямой билирубин, креатинин. Исследование данных может быть проведено стандартными химическими методами («пробирочными») или при помощи анализаторов различных модификаций.
При гепатитах может регистрироваться повышение уровня сывороточного белка (гиперпротеинемия) за счет увеличения концентрации глобулинов при одновременном снижении уровня альбуминов. Снижение уровня сывороточного белка (гипопротеинемия) отмечается при длительном недокорме или плохом усвоении корма из-за хронических заболеваний желудочно-кишечного тракта, часто повторяющихся кровотечений (желудочных, маточных и др.), панкреатита, уменьшения синтеза белка в печени (цирроз) и заболеваниях почек, приводящих к значительной потере белка с мочой.
Снижение концентрации альбумина происходит при нарушении его синтеза (заболевании печени), при недостаточном поступлении белка с пищей, при нарушении всасывания аминокислот при заболеваниях кишечника, а также при повышенных потерях альбумина (заболевания почек, ожоги, травмы, опухоли, кровотечения).
Низкий уровень глюкозы в крови - гипогликемию регистрируют при поражениях печени. Небольшое повышение глюкозы возможно после эмоционального стресса и при панкреатите. Стойкая гипергликемия отмечается при сахарном диабете.
Повышение содержания общего билирубина и его фракций отмечают при различных заболеваниях печени. Так, для гепатита характерно увеличение общего билирубина, главным образом за счет прямого билирубина.
Многие ферменты преимущественно находятся в клетках. Поэтому увеличение активности определенных ферментов в сыворотке крови является признаком повреждения тех или иных органов животного. Например, АЛТ участвуют в обмене аминокислот в печени, а в мышечных тканях преобладают АСТ. Поэтому повышение активности АЛТ в сыворотке крови свидетельствует о заболеваниях печени (например, о гепатитах и циррозах). В то же время, высокая активность АСТ может наблюдаться при инфаркте миокарда, мышечных дистрофиях, травмах и чрезмерных физических нагрузках. Одновременное понижение активности трансфераз часто свидетельствует о нехватке в организме витамина пиридоксина.
Щелочная фосфатаза (ЩФ) участвует в гидролизе многих фосфорных эфиров. Основным источником данного фермента у растущих животных является костная ткань (участвует в отложении фосфатов кальция в костях), у взрослых - печень. Содержится в клетках стенок желчных протоков, печени, костях, почках. Поэтому активность щелочной фосфатазы в плазме крови повышается при болезнях печени и костей, а также нарушении оттока желчи из печени. Снижается активность ЩФ при накоплении радионуклидов в кости.
Амилаза гидролизует полисахариды. Она продуцируется поджелудочной железой и, в меньшем количестве, слюнными железами. Значительное повышение активности амилазы сыворотки крови свидетельствует о панкреатите. Умеренное повышение - о воспалении слюнных желез. Снижение активности амилазы в сыворотке крови модно зарегистрировать при атрофии поджелудочной железы.
Креатинфосфокиназа (КФК) преимущественно в поперечно полосатых мышцах обеспечивает быстрое образование АТФ из АДФ и креатинфосфата. Увеличение активности КФК в сыворотке крови наблюдается при поражении миокарда, наследственной мышечной дистрофии (у цыплят), недостатке селена (у крупного рогатого скота), паралитической миоглобинурии (у лошадей).
При обнаружении увеличения концентрации в сыворотке крови таких конечных продуктов азотистого обмена как креатинин и мочевина, в первую очередь, предполагают нарушение выделительной функции почек. Снижение содержания мочевины в сыворотке крови характерно для голодания и тяжелых заболеваний печени.
Таблица 9.