Определение группы крови с помощью

СТАНДАРТНЫХ СЫВОРОТОК

Показания: необходимость переливания крови и ее компонентов.

Необходимые условия: помещение с хорошим освещением и температурой от 15^одо 25^оС.

Оснащение: два комплекта стандартных гемагглютинирующих сывороток I (О), II (А), III (В) групп двух различных серий и одна ампула сыворотки IV (АВ) (в каждую ампулу с сывороткой опускают сухую чистую пипетку), флакон с изотоническим раствором хлорида натрия с пипеткой, чисто вымытая сухая специальная маркированная или фаянсовая тарелка, предметные стекла, стеклянные палочки, стерильные копьевидные иглы для прокола мякоти пальца, стерильные марлевые шарики, спирт, песочные часы на 5 минут.

Этапы	Обоснование
1 Перед началом работы моют руки, одевают стерильные перчатки.	С целью инфекционной безопасности медперсонала при работе с кровью.
2 Проверяют чтобы каждая ампула стандартной сыворотки имела паспорт – этикетку с указанием группы крови, номера серии, титра, срока годности, места изготовления. Ампулой без этикетки пользоваться запрещается. Сыворотка должна быть светлой и прозрачной, ампула сохранной, титр не менее 1:32. Сыворотки располагают в специальных штативах в 2 ряда.	Стандартные сыворотки: I (О) – бесцветная – на этикетке полос нет; II (А) – голубая – на этикетке 2 полосы синего цвета; III (В) – красная – на этикетке 3 полосы красного цвета; IV (АВ) – желтая – на этикетке 4 полосы желтого цвета. Наличие хлопьев, осадков являются признаками непригодности сыворотки. Сыворотки с истекшими сроками хранения к использованию непригодны.
3 На стандартную или поделенную цветным карандашом на 4 квадрата тарелку наносят по одной капле сыворотки двух серий I (О), II (А), III (В) групп.	На тарелке поделенной цветным карандашом необходимо в каждом квадрате указать группу крови. На стандартную или поделенную цветным карандашом на 4 квадрата тарелку наносят по одной капле сыворотки двух серий I (О), II (А), III (В), IV (АВ) для исключения ошибки при чтении результата.
4 Каплю крови из пробирки или пальца наносят пипеткой или стеклянной палочкой или около каждой капли сыворотки (крови должно быть в 10 раз меньше чем сыворотки) и смешивают разными стеклянными палочками или разными уголками предметного стекла.	Для получения крови из пальца подушечку пальца обрабатывают спиртом и делают прокол кожи иглой – копьем. Первую каплю крови снимают марлевым шариком, последующие разными уголками предметного стекла для исключения ложной реакции агглютинации.
5 После смешивания тарелку осторожно покачивают в руках.	Для более быстрой и четкой агглютинации эритроцитов.
6 По мере наступления агглютинации, но не ранее чем через 3 минуты в каждую каплю сыворотки с эритроцитами, где наступила агглютинация добавляют по 1 капле 0,9% натрия хлорида, покачивая тарелку смешивают и продолжают наблюдение до истечения 5 минут.	При положительной реакции изогемагглютинации хлопья и зернышки из клеившихся эритроцитов не расходятся при добавлении изотонического раствора хлорида натрия и перемешивании. При отрицательной реакции капли сыворотки на тарелке прозрачные, равномерно розового цвета, не содержат хлопьев и зерен.
7 Через 5 минут читают реакцию в проходящем свете. Если агглютинация нечеткая, к смеси сыворотки и крови дополнительно добавляют по одной капле 0,9% раствора натрия хлорида после чего дают заключение о групповой принадлежности; возможны следующие 4 комбинации: а) все три сыворотки в обеих сериях не дают агглютинации. Исследуемая кровь I (О) группы; б) реакция изогемагглютинации отрицательная с сывороткой I (О) и III (В) групп исследуемая кровь II (А) групп; в) реакция изогемагглютинации отрицательная с сывороткой III (В) группы в обеих сериях и положительная с сыворотками I (О) и II (А) групп. Исследуемая кровь III (В) группы; г) сыворотки I (О), II (А), III (В) групп дают положительную реакцию в обеих сериях. Кровь принадлежит к IV (АВ) группе. Но прежде чем дать такое заключение, необходимо провести реакцию изогемагглютинации со стандартной сывороткой IV (АВ) группы по той же методике. Отрицательная реакция изогемагглютинации позволяет окончательно отнести исследуемую кровь к IV (АВ) группе	а) отсутствие агглютинации во всех каплях указывает на то, что в исследуемой крови нет агглютиногена, т.е. кровь относится к группе I (О); б) наступление агглютинации в каплях с сыворотками О (I) и В (III) указывает на то, что в крови имеется агглютиноген А, т.е. кровь относится к группе II (А); в) наличие агглютинации в каплях с сыворотками группы I (О) и II (А) указывает на то, что в исследуемой крови имеется агглютиноген В, т.е. кровь относится к группе III (В); г) агглютинация во всех каплях указывает на наличие в исследуемой крови агглютиногенов А и В, т.е. кровь относится к группе IV (АВ) однако учитывая, что агглютинация со всеми сыворотками возможна за счет неспецифической реакции, необходимо на тарелку нанести каплю сыворотки IV (АВ) Группы и добавить к ней 1 каплю исследуемой крови в соотношении 10:1 сыворотку и кровь переливают и наблюдают результат в течение 5 минут. Если агглютинация не наступила, то исследуемую кровь относят к IV (АВ) группе.
8 Выявление других комбинаций говорит о неправильном определении групповой принадлежности крови больного.	При слабой агглютинации и во всех сомнительных случаях кровь заново проверяют со стандартными сыворотками других серий.
9 Ошибки при определении групповой принадлежности крови и не выявленной агглютинации могут быть обусловлены: 1) слабой активностью стандартной сыворотки или низкой агглютинабельностью эритроцитов; 2) избыточным количеством исследуемой крови, добавляемой к стандартной сыворотке; 3) замедленной реакцией агглютинации при высокой температуре окружающей среды.	Для избежания ошибок: 1) использовать активные с достаточно высоким титром сыворотки 1:32; 2) соотношение объема исследуемой крови и стандартной сыворотки 1:10; 3) исследование проводишь при температуре не выше 25оС; 4) оценивать результаты не ранее чем через 5 минут после исследования; 5) строго и тщательно соблюдать все правила исследования.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППЫ КРОВИ С

ПРИМЕНЕНИЕМ ЦОЛИКЛОНОВ

Цель: умение определять группы крови у пациентов ускоренным способом, применяя цоликлоны.

Показания: переливание крови и ее компонентов пациентам по назначению врача. Цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ предназначены для определения группы крови человека системы АВО в прямых реакциях гемагглютинации и применяются взамен или параллельно с иммунными сыворотками.

Необходимые условия: флакон с кровью любой группы, цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ, пластины или размеченный планшет, индивидуальные пипетки – 3, предметное стекло.

Этапы	Обоснование
1 Нанести на планшет или пластину индивидуальными пипетками цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями.	Необходимые требования согласно инструкции Минздравмедпрома России от 17.03.1995 г. и утвержденной зам. начальника Управления научных исследований Минздравмедпрома России Бельговым В.Е.
2 Рядом с каплями антител нанесите по одной маленькой капли исследуемой крови (0,01 - 0,03 мл).
3 Смешайте кровь с реагентом разными концами предметного стекла.	Не допускать смешивания с разными реагентами.
4 Наблюдайте за ходом реакции с цоликлонами визуально при легком покачивании пластины в течение 3-х минут. Агглютинация эритроцитов с цоликлонами обычно наступает в первые 3-5 секунд, но наблюдение следует вести 3 минуты.
5 Результат выражается в агглютинации эритроцитов видных невооруженным глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся в крупные хлопья – это положительный. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинация в ней не обнаруживается.
6 Интерпретация результатов: - при отсутствии агглютинации во всех трех реагентах – первая группа крови; - при наличии агглютинации цоликлоном анти-А – вторая группа крови; - при наличии агглютинации с цоликлоном анти-В – третья группа крови; - при наличии агглютинации во всех трех реагентах – четвертая группа крови.	Результат читается по наличию агглютинации с цоликлонами.