АТ – это иммуноглобулины, вырабатываемые в ответ на введение АГ и способные специфически связываться с АГ и участвовать во многих иммунологических реакциях.

n АТ – γ-глобулиновая фракция белков сыворотки крови (15-25% белков сыворотки).

АТ синтезируются В-лимфоцитами. Контакт с АГ → созревание В-клеток в антителобразующие клетки (АОК). Плазматические клетки

Типы Иммуноглобулинов:

· циркулирующие АТ (сывороточные и секреторные);

· рецепторные молекулы на иммунных клетках;

· миеломные белки (белки Бенс-Джонса).

По структуре, антигенному составу и по выполняемым ими функциям Ig подразделяются на 5 классов: IgG, IgM, IgE, IgD.

Использование: диагностика, лечение, профилактика инфекционных и соматических болезней.

Молекулярное строение АТ

Ig – гликопротеины.

Состоит из двух пар полипептидных цепей: две тяжелые (550-660 аминокислотных остатков, молекулярная масса 50-77 кДа) и две легкие (220 аминокислотных остатков, молекулярная масса 25 кДа).

Н- (от англ. heavy – тяжелый) и L- (от англ. light – легкий) цепи.

Тяжелые и легкие цепи связаны между собой дисульфидными связями (–S–S–).

Между тяжелыми цепями также есть дисульфидная связь. Это так называемый «шарнирный» участок.

Такой тип связи придает молекуле динамичность: молекула может легко менять свою конформацию в зависимости от окружающих условий и состояния.

Легкие цепи бывают двух типов – κ и λ.

Тяжелые цепи – 5 типов : α, γ, μ, εиδ. Среди цепей α-типа выделяют α1- и α-2, для γ-цепей известно 4 подтипа: γ1, γ2, γ3 и γ4.

Вторичная структура полипептидных цепей молекулы иммуноглобулинов имеет доменное строение: отдельные участки цепи свернуты в глобулы (домены), которые соединены линейными фрагментами. Домены стабилизированы внутренней дисульфидной связью. Таких доменов в составе тяжелой цепи бывает 4-5, а в легкой – 2. Каждый домен состоит примерно их 110 аминокислотных остатков. Выделяют С-домены (от англ. constant – постоянный), с неизменной структурой полипептидной цепи и V-домены (от англ. variable – изменчивый), с переменной структурой. В составе легкой цепи есть по одному V- и С-домену, а в тяжелой – один V- и 3-4 С-домена. Гипервариабельная область – 25 % V-домена.

Вариабельные домены легкой и тяжелой цепи образуют антигенсвязывающий центр или паратоп.

Гипервариабельные области определяют индивидуальные особенности строения антигенсвязывающего центра каждого клона иммуноглобулинов.

Папаин разрывает молекулу выше шарнирного участка → три фрагмента: двух Fab (связывающийся с антигеном) и Fc –ответственный за взаимодействие с С1 компонентом комплемента и активацию его по классическому пути, за связывание с рецепторами на мембране клеток макроорганизма (Fc-рецепторы) и некоторых микробов (с белком А стафилококка).

Пепсин расщепляет молекулу иммуноглобулина ниже шарнирного участка и приводит к образованию двух фрагментов: Fc и двух сочлененных Fab, или F(ab)2.

(Полимерные молекулы IgM, IgA имеют J-пептид (от англ. join – соединяю). Он объединяет отдельные мономеры Ig.

Молекулы секреторных иммуноглобулинов обладают S-пептидом (от англ. secret – секрет). Это так называемый секреторный компонент, 71000, β-глобулин. Секреторный компонент предохраняет АТ в секрете слизистых оболочек от ферментативного расщепления.

Рецепторный иммуноглобулин, который локализуется на ЦПМ В-лимфоцитов и плазматических клеток, имеет дополнительный М-пептид(от англ. membrane – мембрана). Благодаря своим гидрофобным свойствам он прочно удерживается в липидном бислое ЦПМ и фиксирует рецепторный иммуноглобулин на мембране иммунокомпетентной клетки.

J- и M-пептиды присоединяются к молекуле иммуноглобулина в процессе биосинтеза этого белка. S-пептид синтезируется эпителиальными клетками и является их рецептором для IgA. Присоединение S-пептида к молекуле IgA происходит при его прохождении через эпителиальную клетку.)

Моноклональные антитела — антитела, вырабатываемые иммунными клетками, принадлежащими к одному клеточному клону, то есть произошедшими из одной плазматической клетки-предшественницы. Моноклональные антитела могут быть выработаны против почти любого природного антигена (в основном белки и полисахариды), который антитело будет специфически связывать. Они могут быть далее использованы для детекции (обнаружения) этого вещества или его очистки.

Гибридо́ма — гибридная клеточная линия, полученная в результате слияния клеток двух видов: способных к образованию антител B-лимфоцитов, полученных из селезёнки иммунизированного животного (чаще всего мыши), и раковых клеток миеломы. Слияние клеток производится с помощью нарушающего мембраны агента, такого, как полиэтиленгликоль. Поскольку раковые клетки миеломы способны делиться большое количество раз, после слияния и соответствующей селекции гибридома, производящая моноклональные антитела против антигена может поддерживаться долгое время.

18. Антителообразование: первичный и вторичный иммунный ответ. Иммунологическая память.

В процессе взаимодействия с АГ участвует антигенсвязывающий центр (паратоп) Fab-фрагмента.

АТ взаимодействует лишь с антигенной детерминантой(эпитопом) АГ.

АТ отличает специфичность взаимодействия, т.е. способность связываться со строго определенной антигенной детерминантой.

n Сила нековалентной связи зависит прежде всего от расстояния между взаимодействующими химическими группами.

Важное значение имеют особенности АТ и АГ, а также условия, в которых происходит их взаимодействие.

По сравнению с ковалентными связями силы нековалентного межмолекулярного взаимодействия по отдельности весьма слабы, однако при большом числе слабых взаимодействий суммарная энергия связывания получается значительной.

Сила нековалентной связи зависит прежде всего от расстояния между взаимодействующими химическими группами.

Иммунологическая память.При повторной встрече с одним и тем же антигеном организм реагирует более активным и более быстрым формированием иммунитета (вторичный иммунный ответ). Этот феномен получил название иммунологической памяти.

Иммунологическая память распространяется как на гуморальный, так и на клеточный иммунитет, имеет высокую специфичность к конкретному антигену и обусловлена B-лимфоцитами и Т-киллерами. Иммунологическая память формируется практически всегда и сохраняется годами и даже десятилетиями. Благодаря ей организм надежно защищен от повторных антигенных интервенций.

На сегодняшний день существует две наиболее вероятные теории формирования иммунологической памяти. Одна из них считает, что иммунологическая память обусловлена длительно сохраняющимся в организме антигеном, и этому имеется множество примеров. Так, инкапсулированный возбудитель туберкулеза, персистирующие вирусы кори, полиомиелита, ветряной оспы и некоторые другие длительное время (иногда всю жизнь) сохраняются в организме и таким образом могут оказывать антигенное воздействие на иммунную систему. По другой теории, на наш взгляд более приемлемой, в процессе развития первичной иммунной реакции в организме часть лимфоцитов размножается без дифференцировки и превращается в малые покоящиеся клетки (В- и Т-клетки иммунологической памяти). Эти клетки отличаются высокой специфичностью к конкретной антигенной детерминанте и большой продолжительностью жизни (до 10 лет и более), что обеспечивает постоянную готовность иммунной системы реагировать на повторный контакт с антигеном по вторичному типу.

Феномен иммунологической памяти широко используется в практике вакцинации людей для создания напряженного иммунитета и поддержания его длительное время на защитном уровне. Осуществляют это 2—3-кратными иммунизациями при первичной вакцинации и периодическими повторными прививками — ревакцинациями.

Однако феномен иммунологической памяти имеет и отрицательные стороны. Так, пересадка иммунологически несовместимых органов и тканей завершается отторжением трансплантата и формированием посттрансплантационного иммунитета. Повторная попытка пересадить те же ткани вызывает быструю и бурную реакцию — криз отторжения.

19. Типы иммунного ответа при инфекционных заболеваниях

Клеточный и гуморальный иммунный ответ. Полностью разделить иммунитет на клеточный и гуморальный невозможно: в инициации образования АТ участвуют клетки, а в некоторых реакциях клеточного иммунитета важную связующую функцию выполняют АТ. Более того, не существует, по-видимому, клеточного иммунитета без образования АТ, которые способны различными путями модифицировать опосредованный клетками иммунный ответ. Так, комплексы АГ-АТ вызывают высвобождение хемотаксических фрагментов комплемента, усиленно привлекающих лейкоциты в очаг воспаления, и, кроме того, благодаря Fc-рецепторам АТ могут принимать участие в связывании АГ с клетками и тем самым влиять на реакции клеточного иммунитета, в частности обеспечивать прикрепление фагоцитов и цитотоксических Т-клеток к клеткам мишеням. Вообще, при скоординированном иммунном ответе происходит многосторонний обмен сигналами между различными типами вступающих в него лейкоцитов и тканевыми клетками.

Межклеточная кооперация.Межклеточная сигнализация в иммунной системе осуществляется путем непосредственного контакта взаимодействия клеток, в котором участвуют их поверхностные молекулы, или с помощью цитокинов, называемых «белками связи». Эти белки действуют как растворимые медиаторы межклеточных взаимодействий.

В осуществлении иммунной защиты участвует три вида клеток: фагоциты, Т- и B-лимфоциты. Деятельность этих клеток направлена на распознавание и уничтожение генетически чужеродных веществ, регуляцию функционирования компонентов иммунной системы и поддержание гомеостаза. Такая работа осуществляется в постоянном взаимодействии всех типов иммунокомпетентных клеток, т.е. в условиях межклеточной кооперации. Связующим звеном между клетками иммунной системы служат рецепторы, иммуноцитокины и другие медиаторы.

Каждый цитокин индуцирует различные механизмы внутриклеточной передачи сигнала в зависимости от того, какую из активностей он представляет. Регулируется тренскрипция различных генов.

Тh1- клеточный иммунный ответ. Активация Т-киллера (ЦТЛ) происходит по той же схеме. Отличие заключается в том, что мишенью для Т-киллера служит цельная клетка, а не отдельные молекулы антигена. Клеточное взаимодействие при возникновении Т-клеточного иммунного ответа состоит в том, что антиген может воздействовать на клетку только после его представления антиген-представляющей клеткой (АПК). Антиген сорбируется на поверхности АПК, затем подвергается эндоцитозу, в результате чего антиген фрагментируется и формирует комплекс с антигеном HLA.

Комплекс антиген — белок HLA экспрессируется на поверхности АПК и становится доступным к контакту с рецептором Т-лимфоцита. Контакт осуществляется при прямом взаимодействии клеток либо передаче комплекса через межклеточную среду. Рецептор Т-лимфоцита построен так, что воспринимает одновременно оба компонента комплекса. Воздействие на Т-клетку антигенного комплекса служит сигналом активации внутриклеточных процессов, продукции клеткой цитокинов и экспрессии на ней цитокиновых рецепторов. Основой внутриклеточных событий служит активация протеинкиназы С, обуславливающей стимуляцию генома клетки, начало пролиферации и дальнейшей дифференцировки с формированием клона клеток одинаковой специфичности, составляющих основу дальнейшего развития иммунного ответа. Одновременно с формированием протеинкиназы в цитозоле происходит повышение уровня свободного Са2+, активирующего эндонуклеазы клетки, что может привести к апоптозу — гибели клетки. Баланс этих антагонистических процессов определяет альтернативу возникновения позитивного иммунного ответа или толерантности.

Th2 (гуморальный) иммунный ответ (рис.). При появлении в организме антигена в молекулярной форме антиген захватывается фагоцитом, переваривается; его фрагмент в составе антигена гистосовместимости II класса (НLА-DR или Ia-антигены) представляется Т-хелперу для определения «свой—чужой». При контакте с чужеродным веществом фагоцит активируется и начинает вырабатывать иммуноцитокины, в том числе ИЛ-1. Т-хелпер, привлеченный реакцией фагоцита, прикрепляется к нему, распознает при помощи особого рецептора чужеродное вещество в составе антигена гистосовместимости II класса и выделяет в окружающую среду ИЛ-2. Оказавшийся рядом B-лимфоцит, специфичный к данному антигену, связывается с ним при помощи соответствующего рецептора. Сигнал, полученный от антигенсвязывающего рецептора, и стимуляция интерлейкинами (ИЛ-1 — от фагоцита и ИЛ-2 — от Т-хелпера) «включают» в B-лимфоцитах пролиферативные и дифференцировочные процессы. Клетка созревает, размножается и дифференцируется, в результате чего образуется клон высокоактивных лимфоцитов, синтезирующих антитела, специфичные к данному антигену.

Таким образом, для активации B-клеточного иммунного ответа необходим тройной сигнал: от антигенспецифичного рецептора, фагоцита и T-хелпера. Отсутствие хотя бы одного из стимулов (нарушение межклеточной кооперации, неспецифичность рецептора B-лимфоцита или элиминация антигена) блокирует развитие иммунного ответа.

20. Схема Th1 ответа. Эффекторы клеточного ответа.

Тh1- клеточный иммунный ответ. Активация Т-киллера (ЦТЛ) происходит по той же схеме. Отличие заключается в том, что мишенью для Т-киллера служит цельная клетка, а не отдельные молекулы антигена. Клеточное взаимодействие при возникновении Т-клеточного иммунного ответа состоит в том, что антиген может воздействовать на клетку только после его представления антиген-представляющей клеткой (АПК). Антиген сорбируется на поверхности АПК, затем подвергается эндоцитозу, в результате чего антиген фрагментируется и формирует комплекс с антигеном HLA.

Комплекс антиген — белок HLA экспрессируется на поверхности АПК и становится доступным к контакту с рецептором Т-лимфоцита. Контакт осуществляется при прямом взаимодействии клеток либо передаче комплекса через межклеточную среду. Рецептор Т-лимфоцита построен так, что воспринимает одновременно оба компонента комплекса. Воздействие на Т-клетку антигенного комплекса служит сигналом активации внутриклеточных процессов, продукции клеткой цитокинов и экспрессии на ней цитокиновых рецепторов. Основой внутриклеточных событий служит активация протеинкиназы С, обуславливающей стимуляцию генома клетки, начало пролиферации и дальнейшей дифференцировки с формированием клона клеток одинаковой специфичности, составляющих основу дальнейшего развития иммунного ответа. Одновременно с формированием протеинкиназы в цитозоле происходит повышение уровня свободного Са2+, активирующего эндонуклеазы клетки, что может привести к апоптозу — гибели клетки. Баланс этих антагонистических процессов определяет альтернативу возникновения позитивного иммунного ответа или толерантности.

21. Схема Th2 ответа. Эффекторы гуморального ответа

Th2 (гуморальный) иммунный ответ (рис.). При появлении в организме антигена в молекулярной форме антиген захватывается фагоцитом, переваривается; его фрагмент в составе антигена гистосовместимости II класса (НLА-DR или Ia-антигены) представляется Т-хелперу для определения «свой—чужой». При контакте с чужеродным веществом фагоцит активируется и начинает вырабатывать иммуноцитокины, в том числе ИЛ-1. Т-хелпер, привлеченный реакцией фагоцита, прикрепляется к нему, распознает при помощи особого рецептора чужеродное вещество в составе антигена гистосовместимости II класса и выделяет в окружающую среду ИЛ-2. Оказавшийся рядом B-лимфоцит, специфичный к данному антигену, связывается с ним при помощи соответствующего рецептора. Сигнал, полученный от антигенсвязывающего рецептора, и стимуляция интерлейкинами (ИЛ-1 — от фагоцита и ИЛ-2 — от Т-хелпера) «включают» в B-лимфоцитах пролиферативные и дифференцировочные процессы. Клетка созревает, размножается и дифференцируется, в результате чего образуется клон высокоактивных лимфоцитов, синтезирующих антитела, специфичные к данному антигену.

Таким образом, для активации B-клеточного иммунного ответа необходим тройной сигнал: от антигенспецифичного рецептора, фагоцита и T-хелпера. Отсутствие хотя бы одного из стимулов (нарушение межклеточной кооперации, неспецифичность рецептора B-лимфоцита или элиминация антигена) блокирует развитие иммунного ответа.

22. Антитоксический иммунитет, его особенности

Особенности антитоксического иммунитета. Заболевания, при которых микроб остается в месте входных ворот инфекции, а основные клинические проявления которых связаны с действием белкового бактериального токсина, получили название токсинемических инфекций (дифтерия, столбняк, анаэробная газовая инфекция, ботулизм). Иммуногенные свойства белковых токсинов проявляются в способности вызывать иммунный ответ со стороны макроорганизма, в частности индуцировать синтез специфических антител – антитоксинов, нейтрализующих гомологичный токсин. Описано три способа действия антитоксина: прямая реакция АТ с группами, ответственными за токсичность бактериального продукта; взаимодействие антитоксина с рецепторными участками токсина, что препятствует фиксации токсина на специальных рецепторах клеток-мишеней; образование иммунного комплекса, ограничение проникновение токсина в ткань и активный фагоцитоз комплекса.

Следующей особенностью ряда белковых токсинов, например столбнячного, дифтерийного и некоторых других, является их способность под действием формалина утрачивать свою ядовитость, сохраняя при этом иммуногенные свойства. Такие обезвреженные токсины получили название анатоксинов. Для профилактики и лечения токсинемических инфекций применяют анатоксины и антитоксические сыворотки.

23. Антивирусный иммунитет и его особенности.

Противовирусный иммунитет.Иммунную защиту макроорганизма при вирусных инфекциях осуществляет противовирусный иммунитет. Его особенности обусловлены двумя формами существования вируса: внеклеточной и внутриклеточной. Основными факторами, обеспечивающими противовирусный иммунитет, являются специфические антитела, Т-киллеры, интерферон и сывороточные ингибиторы вирусных частиц.

Специфические противовирусные антитела способны взаимодействовать только с внеклеточным вирусом, внутриклеточные структуры прижизненно для них недоступны. Антитела нейтрализуют вирусную частицу, препятствуя ее адсорбции на клетке-мишени, инфицированию и генерализации процесса, и обеспечивают иммунный фагоцитоз «маркированных» вирусных частиц. Специфические антитела также связывают вирусные белки и нуклеиновые кислоты, которые попадают в межклеточную среду и секреты после разрушения зараженных вирусами клеток. Противовирусные АТ служат важным механизмом защиты от повторных инфекций.

Клетки, инфицированные вирусом и приступившие к его репликации, экспрессируют (представляют) вирусные белки на поверхности цитоплазматической мембраны в составе молекул антигенов гистосовместимости — НLА I класса. Изменение структуры этих антигенов гистосовместимости служит сигналом для активации Т-киллеров. Последние специфически распознают клетки макроорганизма, зараженные вирусом и приступившие к биосинтезу его компонентов, и уничтожают их.

Мощным противовирусным действием обладает интерферон. Он не влияет непосредственно на внеклеточный и внутриклеточный вирус, а адсорбируется на мембране клеток и индуцирует ферментные системы, подавляющие синтез компонентов вируса.

Сывороточные ингибиторы неспецифически связываются с вирусной частицей и нейтрализуют ее, тем самым препятствуя адсорбции вируса на клетках-мишенях.

Напряженность противовирусного иммунитета оценивают преимущественно в серологических тестах — по нарастанию титра специфических антител в парных сыворотках в процессе болезни. Иногда определяют концентрацию интерферона в сыворотке крови.

Вирусы могут непосредственно нарушать функции иммунной системы, вызывая иммуносупрессию, иммунологическую недостаточность и аутоиммунные заболевания.

24. Механизмы ускользания бактерий от иммунных реакций организма.

Механизмы ускользания бактерий и вирусов от иммунных реакций организма.Чтобы закрепиться и размножиться в той или иной среде организма, бактерии должны выстоять против биоцидных и биостатических факторов, которые в разных количествах и сочетаниях представлены в секретах мукоидного тракта. Фактически, патогенные микробы патогенны именно благодаря своей способности обходить в известной мере механизмы защиты организма от инфекции.

Среди паразитов слизистых оболочек распространена способность к продукции IgA-протеаз, которые расщепляют IgA-антитела, лишая их антиадгезивного эффекта. Многие бактерии нейтрализуют лизоцим, инактивируют оксиданты и другие потенциально вредные начала, продуцируют сидерофоры, конкурируют с лактоферрином за ионы железа. Удивительной стойкостью обладает Helicobacter pylori: он активно персистирует в желудке, нейтрализуя вокруг себя кислую среду благодаря высокой уреазной активности.

Размножаясь в организме, микробы должны противостоять фагоцитозу. Бактерии оказывают сопротивление на всех этапах фагоцитоза. Находясь внутри клеток, микробы не подвергаются действию антител, лизоцима, комплемента и других факторов защиты. В то же время клетки, фагоцитирующие микробы, могут мигрировать, способствуя распространению микробов по организму. Выживание фагоцитированных микроорганизмов могут обеспечить различные механизмы. Одни патогенные агенты способны препятствовать слиянию лизосом с фагосомами (токсоплазмы, микобактерии туберкулеза). Другие обладают устойчивостью к действию лизосомных ферментов (гонококки, стафилококки, стрептококки группы А и др.), третьи после эндоцитоза покидают фагосому, избегая действие микробицидных факторов (риккетсии и др.). К веществам с антифагоцитарной активностью относятся капсульные полисахариды и полипептиды микробов, К- и Vi-антигены, входящие в состав микрокапсул энтеробактерий; кордфактор, возбудителей туберкулеза; слизистое вещество Pseudomonas aerugenosa, М-протеин β-гемолитических стрептококков группы А, А-протеин стафилококков и другие структуры микробных клеток. Все они так или иначе создают механический барьер, экранирующий области связывания микробов с рецепторами фагоцитирующих клеток, т.е. препятствующий фагоцитозу. Антифагоцитарные свойства микробов обусловлены также образованием ими веществ, подавляющих хемотаксис фагоцитов; способных вызывать лизис фагоцитирующих клеток (лейкоцидины); образовывать каталазу и супероксиддисмутазу, которые препятствуют действию перекисных радикалов фагоцитирующих клеток и т.д. Все это препятствует фагоцитозу или делает его незавершенным.

Ряд микроорганизмов могут противодействовать эффектам комплемента. Так, грамотрицательные бактерии в наружном слое клеточной стенки имеют ЛПС с длинными О-специфическими боковыми полисахаридными цепями, выступающими из мембраны наружу. Они эффективно активируют комплемент, но локализуют МАК на таком удалении от ЦПМ, что опсонизация и лизис невозможны.

Ряд микроорганизмов устойчивы к действию комплемента за счет присутствия на их поверхности молекул, препятствующих альтернативной активации комплемента. Микроорганизмы могут экспрессировать молекулы, подавляющие активацию комплемента (белок А стафилококка).

В развитии инфекционного процесса определенную роль может играть антигенная мимикрия (от англ. mimicry – подобный), т.е. сходство антигенных детерминант у микроба и организма хозяина, в результате чего микроб не распознается иммунной системой как чужеродный, что способствует его сохранению (персистенции) в организме. Другим механизмом, позволяющим микробам «уходить» от действия специфических факторов иммунной системы, является их способность в процессе размножения в организме изменять свою антигенную структуру (возбудители малярии, трипаносомы, боррелии и др.).

Вирусы также обладают разнообразными свойствами защиты от иммунной системы. Наиболее эффективно этому служит антигенная изменчивость, характерная для многих вирусов (гриппа, ВИЧ, ящура и др.). Гуморальный иммунитет к этим вирусным инфекциям сохраняется лишь до появления нового сероварианта возбудителя, что не позволяет рассчитывать на долговременный эффект вакцинации. Некоторые вирусы используют связанные с клеточными мембранами компоненты комплемента в качестве рецепторов для усиления проникновения в клетку. Такие вирусы как ВЭБ и аденовирусы способны противодействовать эффекту интерферона, другие обладаю генами, кодирующими синтез белков – аналогов цитокинов или цитокиновых рецепторов.

25. Иммунокомпетентный и иммунокомпрометированный организм

26. Реакция агглютинации, ее разновидности, механизм и техника постановки.

Реакция агглютинации (РА)

Реакция агглютинации применяется в лабораторной практике для идентификации выделенных микроорганизмов или для обнаружения специфических антител в сыворотке крови.

Механизм реакции основан на взаимодействии детерминантных групп антигена с активными центрами иммуноглобулина в электролитной среде. Реакции протекают в две фазы – соединение антигена с антителом, вторая фаза – выделение в осадок образовавшегося комплекса АГ+АТ. Характер осадка зависит от природы антигена: жгутиковые бактерии дают крупнохлопьевый осадок, безжгутиковые и бескапсулярные – мелкозернистый, капсульные – тяжистый (рис. 41).

Существуют два способа постановки реакции агглютинации: 1) пластинчатый и 2) пробирочный. Пластинчатый метод является качественной реакцией и служит для предварительного определения вида микроба. Пробирочный метод используется для определения количественного содержания антител, при этом в пробирках ставится развернутая реакция агглютинации.

При положительной реакции на дне пробирки образуется осадок (агглютинат). За титр антител принимают последнее разведение, в котором наблюдается четкая агглютинация. Интенсивность оценивается по 4-х крестной системе. Постановка РА должна сопровождаться контролем сыворотки и антигена. Учет реакции агглютинации на стекле производится через 5 – 10 мин, пробирочной – через 18 – 20 часов.

27. Реакции пассивной агглютинации. Реакции ко-агглютинации, латекс-агглютинации и непрямой гемагглютинации. Механизм и применение.

Иод РПА понимают реакцию, а которой АТ-а взаимодействуют с высокодисперсными АГ (гаптенами), предварительно адсорбированными на корпускулярных носителях, которые при этом склеиваются.
В качестве корпускулярных носителей применяют эритроциты животных, частицы латекса (полимерные микрошарики), бентонита, сефарозы, клетки St. Aureus (штам, содержащий протеин А).

Различают 3 -гипа РПА:
1) различные варианты РПГА (реакции пассивной (емаг-. глютинации);
2) Р. Коагглютинации (Реакцию коагглютинации применяют для определения антигенов с помощью антител, адсорбированных на белке А клеток стафилококка (антительный диагностикум).);
3) Р латексаагглюгинации (Реакция РЛА — экспресс-метод диагностики инфекционных болезней (время проведения — до 10 мин, возможно обнаружение антигена в небольшом объёме исследуемого материала). Для постановки РЛА используют стеклянные или тем-нопольные пластины.

РЛА применяют для индикации антигенов Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae типа b( Neisseria meningitidis в СМЖ, выявления стрептококков группы А в мазках из зева, в диагностике сальмонеллёзной инфекции, иерсиниозов и других заболеваний. Чувствительность метода — 1-10 нг/мл (103-106 бактериальных клеток в мл). Недостаток метода — возможность получения артефактов, особенно в присутствии ревматоидных факторов и продуктов фибринолиза плексы с участием комплемента — преципитаты. Простейший пример качественной реакциипреципитации — образование непрозрачной полосы преципитации в пробирке на границе наслоения антигена на иммунную сыворотку (реакция кольцепреципитации). Реакцию преципитации проводят в гелях агара, агарозы. Их используют для выявления и изучения свойств разнообразных антигенов и антител.)

.

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА)

РНГА применяют в двух вариантах: с известными антигеном для обнаружения антител или с известными антителами для выявления антигена. Эта реакция специфична и применяют ее для диагностики заболеваний вызванных бактериями и риккетсиями. Для постановки РНГА используют эритроцитарные диагностикумы, приготовленные путем адсорбции на эритроцитах антигенов или антител в зависимости от цели исследования.

В положительных случаях степень агглютинации эритроцитов отмечают плюсами. Четырьмя плюсами оценивают реакцию, имеющую вид тонкой пленки из склеивающихся эритроцитов (зонтик), покрывающей дно пробирки, наличие пленки с фестончатыми кружевными краями обозначают двумя плюсами. За титр принимают предельное разведение исследуемого материала, вызывавшее агглютинацию эритроцитов на два полюса.

28. Реакция преципитации, ее разновидности, механизм и применение.

Феномен преципитации заключается во взаимодействии мелкодисперсных антигенов (преципитиногенов) с соответствующими антителами (преципитинами) и образованием преципитата (рис. 42). Постановку РП осуществляют двумя методами: в жидкой среде – по типу реакции флокуляции, кольцепреципитации или в плотной среде в агаре (геле). РП применяют в двух целях: выявление антигенов по известной иммунной преципитирующей сыворотке или антител с использованием известных антигенов. Существует много вариантов постановок реакции, но чаще всего используют следующие методики: реакция преципитации в геле по Оухтерлони, радиальная иммунодиффузия по Манчини, реакция иммуноэлектрофореза, реакция флокуляции, кольцепреципитации.

Реакция преципитации в геле по Оухтерлони. Для постановки реакции используют 1% агар Дифко, который разливают расплавленным на предметные стекла или чашки Петри слоем толщиной 0,5 см. В застывшем агаре вырезают лунки диаметром 5 мм специальным приспособлением. В одну лунку помещают взвесь, содержащую исследуемый антиген, в другую – иммунную сыворотку. Антиген и антитела диффундируют в питательную среду, вступают в иммунную реакцию и образуют полосы преципитации. Учет реакции проводят предварительно через 4 часа, окончательно – через 24–48 часов. Реакцию Оухтерлони можно использовать для определения токсичности бактерий, титра антител, активности стандартных диагностикумов или иммунных специфических сывороток

29. Феномен вирусной гемагглютинации, применение и механизм реакции гемагглютинации (РГА). Реакция торможения гемагглютинации (РТГА), применение и механизм.

Реакция гемагглютинации (РГА) — это ме­тод об­на­руже­ния и иден­тифи­кации ви­ру­сов, ос­но­ван­ный на на­ли­чии у не­ко­то­рых ви­ру­сов спо­соб­но­сти из­би­ра­тель­но агглю­ти­ни­ро­вать эрит­роци­ты опре­де­лен­ных ви­дов жи­вот­ных.

Метод применяется для диагностики инфекционных заболеваний, таких как сальмонеллез, брюшной тиф, столбняк,коклюш и др.

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА)

РНГА применяют в двух вариантах: с известными антигеном для обнаружения антител или с известными антителами для выявления антигена. Эта реакция специфична и применяют ее для диагностики заболеваний вызванных бактериями и риккетсиями. Для постановки РНГА используют эритроцитарные диагностикумы, приготовленные путем адсорбции на эритроцитах антигенов или антител в зависимости от цели исследования.

В положительных случаях степень агглютинации эритроцитов отмечают плюсами. Четырьмя плюсами оценивают реакцию, имеющую вид тонкой пленки из склеивающихся эритроцитов (зонтик), покрывающей дно пробирки, наличие пленки с фестончатыми кружевными краями обозначают двумя плюсами. За титр принимают предельное разведение исследуемого материала, вызывавшее агглютинацию эритроцитов на два полюса.

30. Реакция нейтрализации (РН) с использованием лабораторных животных (РБН) и культуры ткани (метод цветной пробы). Механизм и применение

Реакция нейтрализации экзотоксина происходит при его взаимодействии с антитоксической сывороткой (антитела-антитоксины). В результате образовании комплекса антиген-антитело токсин теряет свои ядовитые свойства.

Реакцию нейтрализации проводят с целью обнаружения и титрования токсинов, анатоксинов или антитоксинов.

Токсины получают путем фильтрования жидкой питательной среды или исследуемого материала, где размножались токсигенные бактерии. При обработке формалином в течение 30-45 дней при температуре 37°С токсин превращается в анатоксин, который используют для иммунизации животных с целью получения антитоксической сыворотки.

Варианты постановки реакции нейтрализации токсина: Реакция флоккуляции основана на способности токсина или анатоксина при смешивании в эквивалентных соотношениях с антитоксической сывороткой образовывать помутнение в пробирке. Механизм флоккуляции аналогичен механизму реакции преципитации. Используют для количественного определения токсинов или анатоксинов.

Реакция нейтрализации in vivo. Для определения типа токсина его смешивают с диагностической антитоксической сывороткой и эту смесь вводят белым мышам. При нейтрализации токсина антитоксической сывороткой мыши не погибают.

Реакцию нейтрализации используют для определения антитоксического иммунитета у детей при дифтерии (проба Шика) и скарлатине (проба Дика). Для этого в область предплечья внутрикожно вводят определенное количество соответствующего токсина (1/40 DLM). При наличии в организме антитоксинов произойдет нейтрализация токсина и реакция будет отрицательной. При отсутствии антитоксинов в организме возникает воспалительная реакция на месте введения токсина.

Реакция нейтрализации вирусов. Данная реакция используется для идентификации вирусов. Для этого к исследуемому материалу, содержащему неизвестный вирус, добавляют специфическую противовирусную сыворотку. После инкубации эту смесь вводят либо в куриный эмбрион, либо лабораторному животному, либо в культуру клеток. Наиболее распространена реакция нейтрализации вирусов в культуре клеток. Здесь в культуральную среду добавляется индикатор. Если антитела соответствуют вирусу (нейтрализуют его), то клеточная культура развивается нормально. При этом происходит выделение кислых продуктов клеточного метаболизма, рН среды снижается, и индикатор изменяет свой цвет. В контроле вирус быстро разрушает клеточную культуру, рН не меняется, и цвет среды остается прежним.

31. Серологические реакции с использованием метки. Реакция иммунофлюоресценции (прямая и непрямая РИФ), иммуноферментный анализ (ИФА), радиоиммунный анализ (РИА). Механизм реак

Иммунофсрментный метод (ИФА)

Метод используется для выявления антигенов с помощью соот­ветствующих им антител, конъюшрованных с ферментом-меткой (пероксидаза хрена, |3-галактоза или щелочная фосфатаза). После соединения антигена с меченной ферментом иммунной сывороткой в смесь добавляют субстрат и хромоген. Субстрат расщепляется ф